一种DNA纳米花级联CRISPR系统的蛋白标志物检测平台及其构建方法和应用技术方案

本发明专利技术属于蛋白检测技术领域，具体涉及一种基于DNA纳米花级联CRISPR系统的蛋白标志物检测平台及其构建方法和应用。该基于DNA纳米花级联CRISPR系统的蛋白标志物检测平台，包括基于DNA纳米花的蛋白标志物输入信号放大的上游模块和基于CRISPR/Cas系统的输出信号放大的下游模块，该检测平台用于蛋白标志物检测检测时，基于DNA纳米花的上游模块能够将蛋白标志物转化为成百上千的DNA信号，被Cas‑crRNA复合物识别并激活Cas蛋白顺式和反式切割活性，从而放大输出信号，实现了蛋白标志物的高灵敏度和快速检测，特别在肾损伤疾病标志物中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白检测中，检测限为500 fg/ml。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白检测，具体涉及一种基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物检测平台及其构建方法和应用。

技术介绍

1、临床组织和液体样本中的蛋白质标志物是反映疾病进展程度的重要指标。灵敏并准确地检测蛋白质标志物对于疾病管理中的及时干预和预后判断至关重要。迄今为止，蛋白质标志物通常通过免疫组织化学（ihc）、酶联免疫吸附试验（elisa）、和免疫印迹技术进行分析和定量。然而，在成分复杂的真实临床样本中，受限于蛋白质标志物信号的高效放大，准确、灵敏、快速地检测蛋白质生物标志物仍是一大挑战。同时，随着健康管理需求的不断增加，迫切需要开发真实样本中蛋白质标志物的放大方法，以用于临床疾病的早期诊断和预后评估。

2、近十年来兴起的crispr/cas系统因其对核酸的特异性识别和顺式、反式裂解活性，被广泛应用于核酸、蛋白质和小分子标志物的检测，为crispr/cas生物技术进入临床应用打开了大门。尽管 crispr/cas系统具有多次翻转的反式裂解特性，可以放大输出信号，但目前基于 crispr 的检测平台仍需要与非等温聚合酶链反应（pcr）和等温本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于DNA纳米花级联CRISPR系统的蛋白标志物检测平台，其特征在于，所述的基于DNA纳米花级联CRISPR系统的蛋白标志物的检测平台，包括利用DNA纳米花放大蛋白标志物输入信号的上游模块，和利用CRISPR系统放大蛋白标志物输出信号的下游模块；

2.如权利要求1所述的基于DNA纳米花级联CRISPR系统的蛋白标志物的检测平台，其特征在于，所述的利用DNA纳米花放大蛋白标志物输入信号的上游模块中，还包括用于DNA纳米花制备所用的T4 DNA连接酶、EquiPhi29 DNA聚合酶、dNTP、DTT、EquiPhi29缓冲液。

3.如权利要求1所述的基于DN...

【技术特征摘要】

1.一种基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物检测平台，其特征在于，所述的基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物的检测平台，包括利用dna纳米花放大蛋白标志物输入信号的上游模块，和利用crispr系统放大蛋白标志物输出信号的下游模块；

2.如权利要求1所述的基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物的检测平台，其特征在于，所述的利用dna纳米花放大蛋白标志物输入信号的上游模块中，还包括用于dna纳米花制备所用的t4 dna连接酶、equiphi29 dna聚合酶、dntp、dtt、equiphi29缓冲液。

3.如权利要求1所述的基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物的检测平台，其特征在于：

4.权利要求1、2或3所述的一种基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物的检测平台的构建方法，其特征在于包括如下构建步骤：

5.如权利要求4所述的基于dna纳米花级联crispr系统的蛋白标志物的检测平台的构建方法，其特征在于，步骤（1）所述dna纳米花是在equiphi29 dna 聚合酶作用下发生滚环扩增反应形成，反应时间为2-6小时，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘培峰，李凤琴，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：