一种预防及治疗瘢痕的疫苗及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种预防及治疗瘢痕的疫苗及制备方法，该疫苗由编码人白细胞介素10（human?interlenkin?10,hIL-10）基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)在基因水平融合后构成。经Balb/C小鼠伤口愈合模型试验证实，该疫苗在一定时间内能够持续诱导小鼠合成分泌hIL-10-CBD。分泌的hIL-10-CBD蛋白能够与伤口愈合过程中细胞产生的胶原蛋白特异结合，既可以降低疫苗量、毒副作用及治疗成本，又能够在瘢痕部位特异有效地发挥药理作用，从而阻止了胞外基质的过度沉积而造成的纤维化，达到了预防及治疗瘢痕的形成，改善瘢痕外观的疗效。本发明专利技术通过基因工程手段把人白细胞介素10（human?interlenkin?10，hIL-10）与胶原特异结合的CBD多肽在基因水平融合与真核表达载体pcDNA3.1(+)在基因水平融合后组成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种疫苗，特别是，属于医药领域。
技术介绍
白细胞介素10 (IL-10)是多种细胞产生的重要免疫调节细胞因子，具有广泛的生物学活性，包括免疫抑制、抗炎及免疫调节特性，主要生物学功能是限制和終止炎症反应，调节多种免疫细胞的分化和増殖。体内外和动物实验表明IL-10在炎症、恶变和自身免疫性疾病方面都发挥了重要功能。在临床上应用于治疗急、慢性炎症疾病、自身免疫性疾病如炎性肠炎、类风湿性关节炎、克隆病、多发性硬化症、银屑病等。IL-10作为ー种炎症反应调节抑制因子，具有①调整炎症细胞的募集和分化，减 少前炎症细胞因子的分泌减少胞外基质(ECM)的产生，上调蛋白水解酶(如基质金属酶)増加ECM的降解；③下调TGF-β I的活性及表达，拮抗瘢痕增生的作用。Renovo公司利用重组hIL-ΙΟ作为治疗瘢痕增生，改善瘢痕外观的候选药物已进入III期临床研究，但存在着缺乏对病理部位的特异性、用药次数多、时间长及纯化工艺繁杂等缺点。胶原蛋白过度沉积是瘢痕组织的重要特征，而CBD多肽(TKKTLRT，7肽)是能够特异结合胶原蛋白的多肽序列。将编码人hIL-ΙΟ基因、CBD基因与真核表达载体pcDNA3. I (+)在基因水平融合，构建了预防和治疗瘢痕的核酸疫苗。经Balb/C小鼠伤ロ愈合模型试验证实，该疫苗在一定时间内能够诱导小鼠合成分泌hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD蛋白能够与伤ロ愈合过程中细胞产生的胶原蛋白特异结合，既可以降低疫苗量及治疗成本，又能够在瘢痕部位有效地发挥药理作用，从而达到预防及治疗瘢痕的形成，改善瘢痕外观的疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该疫苗是ー种核酸疫苗，是由编码人白细胞介素10 (human interlenkin 10，hIL_10)基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体pcDNA3. 1(+)在基因水平融合后构成。经Balb/C小鼠伤ロ愈合模型试验证实，该疫苗在一定时间内能够诱导小鼠合成分泌hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD蛋白能够与伤ロ愈合过程中细胞产生的胶原蛋白特异结合，从而阻止了胞外基质的过度沉积而造成的纤维化。该疫苗用于预防及治疗瘢痕的形成，改善瘢痕的外观的作用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为一种预防及治疗瘢痕的疫苗，其特征是它是由编码人白细胞介素10基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体pcDNA3. I (+)在基因水平融合后构成，其中，编码人白细胞介素10基因简称hIL-ΙΟ基因；融合后的hiL-10-CBD重组基因的核酸序列Nol 5，atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcgagatctccgagatgccttcagcagagtgaagactttctttcaaatgaaggatcagctggacaacttgttgttaaaggagtccttgctggaggactttaagggttacctgggttgccaagccttgtctgagatgatccagttttacctggaggaggtgatgccccaagctgagaaccaagacccagacatcaaggcgcatgtgaactccctgggggagaacctgaagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttcttccctgtgaaaacaagagcaaggccgtggagcaggtgaagaatgcctttaataagctccaagagaaaggcatctacaaagccatgagtgagtttgacatcttcatcaactacatagaagcctacatgacaatgaagatacgaaacggtggtggtggttctaccaagaagac c ctccgcacc3’，其中 3’，5’ 分别代表重组核酸链的3，，5，端。所述的hIL-ΙΟ基因，其相应的核酸序列No2 5’ atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcgagatctccgagatgccttcagcagagtgaagactttctttcaaatgaaggatcagctggacaacttgttgttaaaggagtccttgctggaggactttaagggttacctgggttgccaagccttgtctgagatgatccagttttacctggaggaggtgatgccccaag ctgagaaccaagacccagacatcaaggcgcatgtgaactccctgggggagaacctgaagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttcttccctgtgaaaacaagagcaaggccgtggagcaggtgaagaatgcctttaataagctccaagagaaaggcatctacaaagccatgagtgagtttgacatcttcatcaactacatagaagcctacatgacaatgaagatacgaaac3’其中，3’，5’分别代表核酸链的3’，5’端。所述胶原特异结合的多肽CBD基因，其核酸序列No3 5’ accaagaagaccctccgcacc3’，其中 3’ , 5’ 分别代表核酸链的 3’ , 5’ 端。所述的融合后的hIL-10-CBD重组基因在制备用于预防或治疗瘢痕的疫苗中的应用。本专利技术与现有技术相比，本专利技术通过基因工程手段把人白细胞介素10 (humaninterlenkin 10，hIL-10)与胶原特异结合的CBD多肽在基因水平融合与真核表达载体pcDNA3. I (+)在基因水平融合后组成。经Balb/C伤ロ愈合模型试验证实，该疫苗在一定时间内能够持续诱导小鼠合成分泌hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD能够与伤ロ愈合过程中产生的胶原特异结合，既可以降低疫苗的用量、減少毒副作用，同时更为重要的是该疫苗能够特异地在瘢痕部位发挥药理作用，最大程度地预防及治疗瘢痕的形成，改善瘢痕的外观。附图说明下面结合实施例及附图对本专利技术作进ー步详细说明，但不作为对本专利技术的限定图I是愈合切ロ及愈合组织中胶原分布(A-C为疫苗治疗组；D_F为空白对照组；箭头示意创缘大小)。具体实施例方式本专利技术通过基因工程手段把人白细胞介素10 (human interlenkin 10, hIL-10)基因与胶原特异结合多肽CBD在基因水平融合后的重组基因hIL-10-CBD核酸序列。所述的hIL-ΙΟ基因，其相应的核酸序列No2 5，atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcg本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预防及治疗瘢痕的疫苗，其特征是：它是由编码人白细胞介素10基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)在基因水平融合后构成，其中，编码人白细胞介素10基因简称hIL？10基因；融合后的hIL？10？CBD重组基因的核酸序列No1：5’atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcgagatctccgagatgccttcagcagagtgaagactttctttcaaatgaaggatcagctggacaacttgttgttaaaggagtccttgctggaggactttaagggttacctgggttgccaagccttgtctgagatgatccagttttacctggaggaggtgatgccccaagctgagaaccaagacccagacatcaaggcgcatgtgaactccctgggggagaacctgaagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttcttccctgtgaaaacaagagcaaggccgtggagcaggtgaagaatgcctttaataagctccaagagaaaggcatctacaaagccatgagtgagtttgacatcttcatcaactacatagaagcctacatgacaatgaagatacgaaacggtggtggtggttctaccaagaagacc？ctccgcacc3’，其中3’，5’分别代表重组核酸链的3’，5’端。...

【技术特征摘要】
1.一种预防及治疗瘢痕的疫苗，其特征是它是由编码人白细胞介素10基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体PCDNA3. 1(+)在基因水平融合后构成，其中，编码人白细胞介素10基因简称hIL-ΙΟ基因；融合后的hIL-10-CBD重组基因的核酸序列Nol 5’ atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcgagatctccgagatgccttcagcagagtgaagactttctttcaaatgaaggatcagctggacaacttgttgttaaaggagtccttgctggaggactttaagggttacctgggttgccaagccttgtctgagatgatccagttttacctggaggaggtgatgccccaagctgagaaccaagacccagacatcaaggcgcatgtgaactccctgggggagaacctgaagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttcttccctgtgaaaacaagagcaaggccgtggagcaggtgaagaatgcctttaataagctccaagagaaaggcatctacaaagccatgagtgagtttgacatcttcatcaactacatagaagcctacatgacaatgaagatacgaaacggtggtggtggttctaccaagaagacc ctccgcacc3’，其中 3’，5’ 分别代表重组核酸链的 3’，5’端。2.根据权利要求I所述的ー种预防及治疗瘢痕的疫苗，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡大海，石继红，朱雄翔，韩军涛，胡晓龙，方小兵，白晓智，蔡维霞，汤朝武，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：