一种从生物样本中快速提取核酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种从生物样本中快速提取核酸的方法。该方法为：取生物样本，置于chelex-100的水溶液或chelex-100的DEPC水溶液中，在80～100℃加热1～50分钟；将抽提柱放入离心管，将上述液体加入到抽提柱中，1000～20000转/分钟离心2～120秒；取离心后的液体用于PCR或RT-PCR反应。本发明专利技术采用chelex-100与高温加热的方法进行提取，省去了蛋白酶水解的步骤，对石蜡切片省去了脱蜡的步骤，消除了有机溶剂二甲苯，时间大为缩短；通过在抽提柱放置截留膜，去除了液态石蜡和chelex-100对PCR或RT-PCR反应的不良影响，提高了PCR或RT-PCR反应的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
DNA分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。目前抽提DNA的方法一般有以下几种(I)阴离子去污剂法用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA。细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，由于阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA，但阴离子去污剂常常影响后续的PCR反应。 (2)水抽提法利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2. 6M。加入2倍体积95 %乙醇，立即用搅拌法搅出，然后分别用66 %，80 %和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品，此法提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用。(3)苯酹抽提法苯酹作为蛋白变性剂，同时抑制了 DNase的降解作用。用苯酹处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。苯酚抽提法是抽提DNA最常规的方法，但是因为要使用苯酚，对实验者有害，因此目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。因为需要蛋白酶K处理过程，一般需要经过3-4小时的抽提过程，才能进入后续的PCR反应。医院病理科存在大量各种疾病甲醒固定石腊包埋组织(formalin fixed andparaffin embedded tissues, FFPET),为分子病理研究提供了大量的信息来源,近年来的靶向治疗使从石蜡包埋组织中抽提DNA成为研究的热点。然而福尔马林固定后的蜡块包埋组织DNA降解严重，存档FFPET组织切片取量有限，传统酚氯仿提取DNA步骤繁杂，提取过程损失严重等都制约了石蜡组织在分子病理学中的研究应用，如何高效、高质量提取微量石蜡组织中DNA对利用石蜡组织进行分子研究及诊断至关重要。传统从石蜡组织里抽提DNA需要先用二甲苯脱蜡，然后用无水乙醇去除二甲苯，脱蜡过程繁琐，至少需要3 4小时，而且二甲苯是有机溶剂，对实验操作者的身体有害。脱完蜡后，标本也需要再经过3 4小时的抽提，才能进入后续的PCR反应。Chelex-100是一种由苯乙烯和苯二乙烯共聚体组成的螫合树脂，其悬液在碱性环境(pHIO 11)和100°C条件下，可导致细胞膜破裂并使DNA变性释放出来，并且Chelex-100可高选择性的结合多价阳离子，去除样品和缓冲液中的多价金属离子，避免煮沸过程中模板DNA的降解。Chelex-100提取DNA具有经济、简便、高效等优点，目前已被用于从全血或血液、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等提取DNA。但一般也需要经过2 3小时的抽提过程，才能进入后续的PCR反应。目前已经有采用Chelex-100提取石蜡切片中的遗传物质的报道，如在2010年海南医学学院学报上发表的文章“四种微量石蜡组织DNA提取方法的比较” 一文中，就采用了Chelex-100提取石蜡切片中的DNA，但在该文献中，在采用Chelex-100提取前，还是采用了二甲苯脱蜡、乙醇洗涤的步骤，从而使得步骤繁琐，操作不够简单快捷。为此，专利技术人提出了一种简单快捷、效果良好的从生物样本中提取DNA的方法。但目前尚没有采用Chelex-100提取RNA的报道，为此，专利技术人提出了一种采用Chelex-100简单快速、效果良好的从生物样本中提取RNA的方法。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的在于提出一种核酸的快速提取方法。 为了实现本专利技术的专利技术目的，所采用的技术方案为本专利技术涉及一种从生物样本中快速提取DNA的方法，所述的方法包括以下步骤I.取少量生物样本，所述生物样本选自病理组织石蜡切片样本、血斑精斑或精液样本、组织液样本、脑脊液样本、血液样本、血清样本、血浆样本、尿液样本、积液样本、组织细胞样本；2.将生物样本置于chelex-100的水溶液中，所述的chelex-100的水溶液的浓度为 I 80g/100ml ；3. 80 100°C条件下加热I 50分钟；4.将抽提柱放入离心管中，将步骤3中获得的液体加入到抽提柱中，1000 20000转/分钟，离心2 120秒；5.收集离下的液体，用于PCR反应。本专利技术还涉及一种从生物样本中快速提取RNA的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤I.取少量生物样本，所述生物样本选自病理组织石蜡切片样本、血斑精斑或精液样本、组织液样本、脑脊液样本、血液样本、血清样本、血浆样本、尿液样本、积液样本、毛发样本、组织细胞样本；2.置于 I 80% chelex-100 的 DEPC 水溶液中；3. 80 100°C条件下加热I 50分钟；4.将抽提柱管放入离心管中，将步骤(3)中获得的液体加入到抽提柱管中，1000 20000转/分钟，离心2 120秒；5.收集离下的液体，用于RT-PCR反应。其中，本专利技术的第一优选技术方案为，所述的方法抽提柱为，在抽提柱底部有一层起物理阻挡的膜。本专利技术的第二优选技术方案为，所述的chelex-100的水溶液的浓度为2 50g/100ml，更优选 3 10g/100ml。本专利技术的第三优选技术方案为，所述的chelex-100的EDPC水溶液的浓度为2 50g/100ml，优选 3 10g/100ml。本专利技术的第四优选技术方案为，所述的加热温度为90 100°C，优选90 95°C。本专利技术的第五优选技术方案为，所述的加热时间为5 30分钟,优选8 10分钟。本专利技术的第六优选技术方案为，所述的离心的时间为2 120秒，优选10 30秒。本专利技术的第七优选技术方案为，所述的离心的转速为5000 20000转/分钟，优选10000 20000转/分钟，更优选15000 20000转/分钟。其中，本专利技术中的生物样本选自病理组织石蜡切片样本、血斑精斑或精液样本、组织液样本、脑脊液样本、血液样本、血清样本、血浆样本、尿液样本、积液样本、毛发样本、组织细胞样本；当生物样本为组织细胞样本或石蜡切片时，在步骤I中采用研磨棒对生物组织进行研磨，当提取RNA时，则需要在冰上进行研磨，以减少RNA降解，提高生物组织中RNA的释放，提闻检验效率。本专利技术的技术优势为 I.本专利技术方法简单，时间短，且不使用有害有机溶剂。传统方法中一般从石蜡包埋组织中抽提DNA需要先用二甲苯脱蜡，然后用无水乙醇去除二甲苯，所用的时间长，过程繁琐，至少需要3 4小时才能完成，而且二甲苯是有机溶剂，对人体有害。脱完蜡后，标本需要再经过蛋白酶K的处理，以去除蛋白质，这个过程也需要3 4小时，故通常方法抽提石蜡包埋组织中DNA，进入后续PCR反应，需要6 8小时以上。本专利技术的方法简便易行，不使用挥发性有害有机溶剂二甲苯，不会对实验人员造成伤害，并且所需时间大为缩短，仅需10余分钟即可完成；2.本专利技术采用高温加热进行提取，不仅使石蜡变成液态，而且使组织中的蛋白质变性，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从生物样本中快速提取DNA的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：(1)取少量生物样本，所述生物样本选自病理组织石蜡切片样本、血斑精斑或精液样本、组织液样本、脑脊液样本、血液样本、血清样本、血浆样本、尿液样本、积液样本、毛发样本、组织细胞样本；(2)将生物样本置于chelex？100的水溶液中，所述的chelex？100的水溶液的浓度为1～80g/100ml；(3)80～100℃条件下加热1～50分钟；(4)将抽提柱放入离心管中，将步骤(3)中获得的液体加入到抽提柱中，1000～20000转/分钟，离心2～120秒；(5)收集离下的液体，用于PCR反应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：熊慧，谢立群，陈嘉铮，
申请(专利权)人：熊慧，
类型：发明
国别省市：