本发明专利技术提供一种满山白药材中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，先配制标准溶液与待测液，然后将标准溶液及待测液进行高效液相色谱检测，其中，色谱条件为：色谱柱：C18色谱柱；流动相：乙腈-水；柱温：25℃；检测波长：360nm；进样量：20μL；流动相变化过程：0min～25min内，乙腈：水的体积比为70：30；25min～26min内，乙腈与水的体积比由70：30等度梯度转变至60：40；26min～55min内，乙腈与水的体积比为60：40。本发明专利技术的优点在于：能够对满山白药材中三种黄酮类化合物含量进行同时测定，从而减少了测定的步骤、降低了测定所需耗费的时间。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物中多组分同时测定的方法，尤其涉及一种。
技术介绍
满山白是杜醇科植物毛果杜胃$ (Rhododendron senniavinii Maxim.)的干燥嫩枝和叶，具有祛痰止咳功效，是福建省地方药材；满山白止咳糖浆系列产品是以满山白药材作为主要原料的临床应用中成药。满山白药材中的金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等黄酮类化合物是其药理活性的物质基础，金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素三者的含量水平直接影响到药材原料的质量，并最终影响成药的质量。开发并应用满山白药材中黄酮类化合物的快速定量测定方法，是满山白药材质量科学监控的必要手段。目前满山白药材中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素的相关检测方法的文献报道有《HPLC测定毛果杜鹃中槲皮苷的含量》、《HPLC测定毛果杜鹃中金丝桃苷的含量》、及《RP-HPLC测定几种闽产杜鹃中的槲皮素含量》。所报道的方法是应用高效液相色谱方法分别对金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素进行单独的定量测定，使得测定满山白药材中多种黄酮类化合物的含量所需耗费的时间较长。因此，从业人员有待研究一种能够同时对满山白药材中的多种黄铜类化合物的含量进行测定的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种，减少了测定的步骤，节省了时间。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的一种，该方法操作如下(I)标准溶液的制备以2 I I的质量比分别称取适量纯度为98%的金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素对照品并混合，之后采用甲醇对混合后的对照品进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的总浓度为4. 000mg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液；(2)提取液的制备称取适量满山白药材粉末并加入甲醇，且料液质量比为1:5-1: 20，之后超声提取0.5-3小时，超声提取结束后将溶液进行过滤蒸干，并将蒸干获得的样品用甲醇定容至100-500mL，然后采用45nm孔径滤膜过滤得满山白药材黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液；(3)高效液相色谱检测在色谱柱上，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱分离黄酮类化合物，色谱条件如下检测仪器高效液相色谱仪；色谱柱C18色谱柱；流动相乙腈-水；柱温25°C;检测波长360nm;进样量20yL;流动相变化过程0min 25min内，乙腈水的体积比为70 30 ；25min 26min内，乙腈与水的体积比由70 30等度梯度转变至60 40 ；26min 55min内，乙腈与水的体积比为60 40 ；(4)测定分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度；其中，三种黄酮类化合物分别为金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素。进一步地，所述提取液的制备操作中超声提取结束后将溶液采用滤纸进行过滤。本专利技术的有益效果在于能够对满山白药材中三种黄酮类化合物即金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素的含量进行同时测定，从而减少了测定的步骤、降低了测定所需耗费的时间。附图说明下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的描述。图I是本专利技术标准溶液的高效液相色谱图。图2是本专利技术中实施例一待测液高效液相色谱图。图3是本专利技术中实施例二待测液高效液相色谱图。图4是本专利技术中实施例三待测液高效液相色谱图。具体实施方式结合如下实施例对本专利技术满山白药材中三种黄酮类化合物(即金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素)含量同时测定的方法进行进一步说明。实施例一I.标准溶液的制备分别称取20mg金丝桃苷、IOmg槲皮苷、IOmg槲皮素对照品并混合，之后采用甲醇对混合后的对照品进行溶解并定容以获得总浓度为4. 000mg/mL的母液，然后将母液分别稀释成6个浓度梯度，浓度梯度分别为母液浓度的O. 01,0. 1,0. 2,0. 5、O.8和I. O倍；其中金丝桃苷、槲皮苷、及槲皮素对照品的纯度均为98%。2.待测液的制备称取IOg满山白药材粉末，加入5倍其质量的甲醇(即料液质量比为I : 5)，之后超声提取3小时，超声提取结束后将溶液进行滤纸过滤并蒸干，将蒸干获得的样品用甲醇定容至IOOmL,然后采用45nm孔径滤膜过滤得满山白药材黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液。3.高效液相色谱检测在色谱柱上，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱分离黄酮类化合物，色谱条件如下检测仪器Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱C18色谱柱；流动相乙腈-水；柱温25°C;检测波长360nm；进样量20yL;流动相变化过程0min 25min内，乙腈水的体积比为70 30 ；25min 26min内，乙腈与水的体积比由70 30等度梯度转变至60 40 ；26min 55min内，乙腈与水的体积比为60 40o4.测定分别取制备获得的标准溶液及待测液注入上述色谱条件的高效液相色谱仪中进行分析测定，得到三种对照品的线性回归方程及样品的高效液相色谱图，具体地，三种对照品的线性回归方程如下表I所示，标准溶液的高效液相色谱图如图I所示，待测液的高效液相色谱图如图2所示，且经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度分别为O. 8092mg/mL,0. 7908mg/mL和O. 0853mg/mL。表I三种对照品线性回归方程、相关系数、线性范围对照品线性方镙相关系4t线性范围{tng/mL)金 it 桃苷 y = 2E-05x+ 0.0()03 0.99950.020-2,000 槲皮苷 y = 2E4)5x - OiKXn 0,99930.020-2.000 .獬皮素 V = I E-OSx .十 0.00010.99940.010-1.000为了不重复累赘，对以下实施例仅针对不同点进行阐述说明。实施例二待测液的制备称取IOg满山白药材粉末，加入20倍其质量的甲醇(即料液质量比为I : 20)，之后超声提取O. 5小时，超声提取结束后将溶液进行滤纸过滤并蒸干，将蒸干获得的样品用甲醇定容至250mL，然后采用45nm孔径滤膜过滤得满山白药材黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液。测定取本实施例制备获得的待测液注入与实施例一中色谱条件一致的高效液相色谱仪中进行分析测定，得到待测液的高效液相色谱图，具体地，样品液的高效液相色谱图如图3所示，且经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度分别为 O. 3772mg/mL,0. 0938mg/mL 和 O. 0105mg/mL。实施例三待测液的制备称取IOg满山白药材粉末，加入15倍其质量的甲醇(即料液质量比为I : 15)，之后超声提取2小时，超声提取结束后将溶液进行滤纸过滤并蒸干，将蒸干获得的样品用甲醇定容至500mL，然后采用45nm孔径滤膜过滤得满山白药材黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液。测定取本实施例制备获得的样品液注入与实施例一中色谱条件一致的高效液相色谱仪中进行分析测定，得到样品的高效液相色谱图，具体地，样品液的高效液相色谱图如图4所示，且经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度 O. 0539mg/mL,0. 0333mg/mL 和 O. 0707mg/mL。综上，能够对满山白药材中三种本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种满山白药材中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，其特征在于：所述三种黄酮类化合物分别为金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素；该方法操作如下：（1）标准溶液的制备：以2∶1∶1的质量比分别称取适量纯度为98%的金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素对照品并混合，之后采用甲醇对混合后的对照品进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的总浓度为4.000mg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液；（2）提取液的制备：称取适量满山白药材粉末并加入甲醇，且料液质量比为1∶5？1∶20，之后超声提取0.5？3小时，超声提取结束后将溶液进行过滤蒸干，并将蒸干获得的样品用甲醇定容至100？500mL，然后采用45nm孔径滤膜过滤得满山白药材黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液；（3）高效液相色谱检测：在色谱柱上，以乙腈？水为流动相，梯度洗脱分离黄酮类化合物，色谱条件如下：检测仪器：高效液相色谱仪；色谱柱：C18色谱柱；流动相：乙腈？水；柱温：25℃；检测波长：360nm；进样量：20μL；流动相变化过程：0min～25min内，乙腈：水的体积比为70：30；25min～26min内，乙腈与水的体积比由70：30等度梯度转变至60：40；26min～55min内，乙腈与水的体积比为60：40；（4）测定：分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄颖桢，陈菁瑛，赵云青，林峰，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：
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