直接分析通过胶带剥离获得的皮肤样品中的皮肤胆固醇制造技术

本发明专利技术涉及皮肤胆固醇的测定，将粘胶带放到皮肤的指定区域并使胶带粘贴到指定的皮肤区域，然后将胶带从选择的皮肤区域剥离下来，得到代表皮肤外角质层的样品，粘附在胶带上的样品含有暴露的皮肤组分。利用能与胆固醇特异性结合的检测试剂和能定量检测暴露皮肤组分中胆固醇含量的指示剂组分分析样品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测定皮肤胆固醇的方法。更具体地说，本专利技术涉及直接测定通过胶带剥离获得的皮肤样品中皮肤胆固醇的方法，用于判断个体是否患有动脉硬化、以及是否具有发展成动脉硬化及与高胆固醇相关的和由高胆固醇引起的类似疾病的风险。
技术介绍
许多研究表明，动脉硬化及其并发症，如心脏病发作和休克，在几乎所有的国家都是发病和死亡的主要原因。要想有效地预防动脉硬化就需要确定一个人是否有患动脉硬化的风险，从而采取 适当的治疗措施并改变其生活方式。确定哪些人属于高风险人群虽然是我们所期望的，但是，要找出确定一个人是否有患病风险的最佳方法却是有困难的。一种确定一个人是否有患动脉硬化风险的被广泛使用的方法是测定静脉血浆中的总胆固醇水平(Consensus Conference on Lowering Blood Cholesterol to PreventHeart Disease, JAMA, 1985，253，pg. 2080)。如果患者的胆固醇水平超过240mg/dL，那么这个患者就被认为是高风险人群，最近有人提议将此阈值降低到更低的水平。然而，单纯凭一个总胆固醇指标无法精确地预测患者的患病风险。更好的预测方法是分析血浆脂蛋白；尤其是测定低密度脂蛋白和高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平(Totaland High Density Lipoprotein Cholesterol in the Serum and Risk of Mortality,British Medical Journal,1985, 290, pg. 1239-1243)。利用上述方法虽然有其优点，但是这种方法需要在禁食一段时间后采集血液样本。而且，采血令人不舒服，有感染的风险，分析血浆脂蛋白和胆固醇水平复杂而昂贵。另夕卜，研究表明，血浆分析并不能完整反映胆固醇在动脉壁和其他组织内的累积过程。在许多情况下，血浆胆固醇水平甚至完整的脂质检测与动脉硬化的严重程度并不完全相关。胆固醇水平的升高既发生在组织内，也发生在血浆中，研究表明组织胆固醇在动脉硬化的发展中起主导作用。现已证实，组织，其中包括皮肤，以与动脉壁相同的方式累积胆固醇，研究表明动脉壁和皮肤内的胆固醇含量呈密切相关关系。例如，从冷冻的皮肤样本中提取胆固醇，利用传统的化学和生物化学方法测定(Nikitin Y. P. , GordienkoI.A. , Dolgov A. V. , Filimonova T. A. Cholesterol content in the skin and itscorrelation with lipid quotient in the serum in normals and in patients withischemic cardiac disease , Cardiology, 1987, II, No. 10, P. 48-51)。这种方法虽然有用，但是很复杂，用于大规模的人群筛选时是很痛苦的。美国专利No. 4，458，686描述了一种在皮肤之下或其表面直接测定血液中各种组分的方法。该方法的根据是利用电化学方法，如通过极谱分析法，测定氧浓度的变化。如果使用的是不会透过皮肤扩散的非挥发性物质，就需要在皮肤下植入酶以影响皮肤表面氧的变化。该专利还公开了使用胆固醇氧化酶通过该方法定量测定胆固醇含量的用途。由于该方法需要复杂的设备和操作过程，因而需要高技能的人员来完成测定，从而限制了该方法用于筛选大量的人群。皮肤胆固醇含量的测定可用于确定动脉硬化的严重程度，通过标准的实验室分析方法分析皮肤活检样品就可以完成。但是，在采集皮肤样品时是很痛苦的，并且采样点有感染的风险。另外，该方法还有一个缺点，那就是较厚的皮肤标本包括几层皮肤，有最外面的角质层、表皮和真皮。由于真皮层是高度血管化的，因此皮肤活检样品含有血管和血管成分。还可能含有汗腺和皮脂腺及其所包含的分泌物。另外，真皮下就是皮下脂肪，皮下脂肪也可能包含在标本内。因此，皮肤活检标本成分复杂，在 分析皮肤的胆固醇含量时会得到不真实的数据。美国专利No. 5，489，510描述了一种视觉判断皮肤胆固醇含量的非侵入性方法，该方法使用了一种含有特异性胆固醇结合组分的试剂和一种含有指示剂组分的试剂，后者可根据是否存在与皮肤胆固醇结合的组分来显示可见的颜色变化。该方法克服了以前方法的许多缺点，满足了大样本筛选以鉴定个体是否具有动脉硬化风险的目标。该方法可在手掌皮肤上直接测定，虽然简单而快捷，但是需要所有接受检测的人都要到进行检测的医生办公室或诊所去检测。这也会限制进行大规模筛选。现在已经有方法可以测定皮肤的溶剂直接提取物中角质层的脂质摩尔比例，其中包括胆固醇(Norlen L 等,J. Invest. Dermatology 72-77,112,1999)。高效液相色谱(HPLC)和气液色谱与质谱连用可用于分离和分析脂质。这种分析方法很复杂，而且更重要的是，使用有腐蚀性且刺激的有机溶剂系统提取人皮肤对于常规的测定方法来说是不切实际的。利用胶带剥离方法来确定皮肤角质层的脂质组成见A. Weerheim和M. Ponec (Arch. Dermatol. Res. , 191-199, 293, 2001)的描述。在该研究中，在用胶带粘贴皮肤再剥离后用溶剂从角质层提取脂质，其中包括胆固醇。所得到的脂质提取物通过高效薄层色谱分离。该方法是很费力的。需要三种连续的溶剂系统来完成脂质的分离，需要用染色和焦化方法使组分显色，还需要通过密度测定来确定脂质的相对含量。该方法不是一种适于大样本的胆固醇简单快速测定方法。专利技术概述因而，本专利技术的一个目的是克服上述缺点，并提供一种简单的非侵入性皮肤胆固醇测定方法，可用于大规模的筛选。提供一种用于获得皮肤样品的胶带剥离装置也是本专利技术的一个目的。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括如下步骤a)提供一包括背衬件的胶带，其中至少有一面涂有医用胶粘剂；b)将胶带放置到皮肤的指定区域并使其粘贴到该区域；c)从皮肤的指定区域剥离下胶带，得到皮肤外角质层样品，粘附到胶带上的样品带有暴露的皮肤组分；d)提供具有结构式A-C-B的亲和-酶催化(affinity-enzymatic)化合物来源,其中的A是对胆固醇有亲和力的检测试剂，B是酶催化可视化试剂(enzymatic visualizingagent)，C是将检测试剂与可视化试剂彼此连接的结合试剂；e)将预定量的亲和-酶催化化合物加到样品的预定表面区域上，使化合物与样品接触一段时间，该段时间足以使检测试剂与暴露的皮肤组分内的胆固醇结合；以及f)将预定量的显色剂加到样品的预定表面区域上，使其与酶催化可视化试剂反应生成有色产物，该产物的颜色能指示胆固醇水平。上述方法中的检测试剂选自如下一组甾类糖苷、三萜糖苷、疏水性蛋白质、多烯抗生素和抗胆固醇抗体。在本专利技术的一个方面，检测试剂是留类糖苷，其中留类糖苷是毛地黄阜苷。另外，在上述方法中，酶催化可视化试剂是选自如下一组的酶过氧化物酶、碱性磷酸酶、脲酶、半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶和乙酰胆碱酯酶。在本专利技术的一个方面，酶是过氧 化物酶，其中过氧化物酶是辣根过氧化物酶。在本专利技术的另一方面，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括：a)提供一包括背衬件的胶带，胶带至少有一面涂有医用胶粘剂；b)将胶带放置到皮肤的指定区域并使其粘贴到该区域；c)从皮肤的指定区域剥离下胶带，得到皮肤外角质层样品，粘附到胶带上的样品带有暴露的皮肤组分；d)提供具有结构式A？C？B的亲和？酶催化化合物来源，其中的A是对胆固醇有亲和力的检测试剂，B是酶催化可视化试剂，C是将所述检测试剂与所述可视化试剂彼此连接的结合试剂；e)将预定量的所述亲和？酶催化化合物加到所述样品的预定表面区域上，使所述化合物与样品接触一段时间，该段时间足以使所述检测试剂与所述暴露的皮肤组分中存在的胆固醇结合；以及f)将预定量的显色剂加到所述样品的预定表面区域上，使所述显色剂与所述酶催化可视化试剂反应生成有色产物，该产物的颜色能指示胆固醇水平。

【技术特征摘要】
2004.04.28 CA 24654271.一种测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括 a)提供一包括背衬件的胶带，胶带至少有一面涂有医用胶粘剂； b)将胶带放置到皮肤的指定区域并使其粘贴到该区域； c)从皮肤的指定区域剥离下胶带，得到皮肤外角质层样品，粘附到胶带上的样品带有暴露的皮肤组分； d)提供具有结构式A-C-B的亲和-酶催化化合物来源，其中的A是对胆固醇有亲和力的检测试剂，B是酶催化可视化试剂，C是将所述检测试剂与所述可视化试剂彼此连接的结合试剂； e)将预定量的所述亲和-酶催化化合物加到所述样品的预定表面区域上，使所述化合物与样品接触一段时间，该段时间足以使所述检测试剂与所述暴露的皮肤组分中存在的胆固醇结合；以及 f)将预定量的显色剂加到所述样品的预定表面区域上，使所述显色剂与所述酶催化可视化试剂反应生成有色产物，该产物的颜色能指示胆固醇水平。2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述检测试剂选自如下一组留类糖苷、三萜糖苷、疏水性蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·豪斯沃德，R·扎瓦蒂斯基，
申请(专利权)人：麦拉克林有限公司，
类型：发明
国别省市：