利用植物基因工程技术培育菊苣优质新种质的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用植物基因工程技术培育菊苣优质新种质的方法，包括以下步骤：A1、菊苣无菌实生苗的获得；A2、叶片外植体预培养；A3、转化菌液的准备；A4、外源基因的浸染转化；A5、抗性芽筛选和再生；A6、菊苣优质种质材料的鉴定和筛选。本发明专利技术具有培育周期短、效率高、成本低、对菊苣本身重要农艺性状影响小等优点,该技术将加速我国菊苣品种培育的进程。该技术通过提高菊苣含硫氨基酸含量，降低饲料成本，实现优质饲料的绿色无公害生产，为畜牧业发展和人们生活提供充足的绿色蛋白质原料来源，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及转基因工程
，尤其涉及的是一种利用植物基因工程技术培育菊苣优质(含蛋氨酸和半胱氨酸)新种质的方法。
技术介绍
含硫氨基酸在饲料植物中含量较 少，特别是半胱氨酸和蛋氨酸，常成为第一限制性必需氨基酸。培育高含硫氨基酸的饲草品种是当前饲草品质改良的研究热点之一。菊苣(Cichorium intybus L.)是菊科菊苣属多年生草本植物,适应性强,喜温暖湿润气候,温度达5 °C时，能正常生长发育。抗寒能力强，幼苗能耐_8°C的低温。对土壤要求不严格，在荒地、坡地均能生长，全国各地都适合种植。利用期长，由于春季返青早，冬季休眠晚，利用期长达8个月(4 11月)之久，夏秋干旱季节，大多数牧草枯黄时，菊苣仍能保持青枝绿叶，可解决养殖业春秋两季和青饲料紧缺的矛盾，一次播种，在不收种的情况下可连续利用多年。菊苣被广泛用于饲料、蔬菜、制药和制糖原料，是目前较具开发前途的经济作物和首选的养殖业青饲料，近年来，菊苣在很多地区大量栽培，己成为一种极受欢迎的高档保健型蔬菜和新型优良饲草。但是菊苣含硫氨基酸特别是蛋氨酸和半胱氨酸含量很低，限制了其更为广泛的利用。菊苣遗传背景复杂，用常规育种方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用植物基因工程技术培育菊苣优质新种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、菊苣无菌实生苗的获得；A2、叶片外植体预培养；A3、转化菌液的准备：用无菌牙签或接种针挑取含有外源基因质粒的农杆菌LBA4404单菌落，接种到50？mL？含有硫酸链霉素(Str,？50？mg/L)和卡那霉素(Kan,？50？mg/L)的液体YMB培养基中，28℃振荡培养16～24h至对数生长期，将培养物于4000~5000？r/min？离心10？min？，去除上清液，收集菌体，用1/2MS无菌液体培养基重悬沉淀至OD600=0.4Abs，用于侵染转化；或直接用1/2MS无菌液体培养基稀释菌液用于侵染；所述YMB培...

【技术特征摘要】
1.ー种利用植物基因工程技术培育菊苣优质新种质的方法，其特征在于，包括以下步骤:A1、菊苣无菌实生苗的获得；A2、叶片外植体预培养； A3、转化菌液的准备用无菌牙签或接种针挑取含有外源基因质粒的农杆菌LBA4404单菌落，接种到50 mL含有硫酸链霉素(Str, 50 mg/L)和卡那霉素(Kan, 50 mg/L)的液体YMB培养基中，28°C振荡培养16 24h至对数生长期，将培养物于4000飞000 r/min离心10 min，去除上清液，收集菌体，用1/2MS无菌液体培养基重悬沉淀至0D600=0.4Abs，用于侵染转化；或直接用1/2MS无菌液体培养基稀释菌液用于侵染；所述YMB培养基0. 5g/LK2HPO4 + 0. 2g/L MgSO4 *7H20 + 0. 5g/L NaCl + lOg/LMannitol + 0. 4g/LYeast extract,pH7. 5 ； A4、外源基因的浸染转化无菌条件下，选取生长状态良好的预培养外植体放入制备好的菌液中，使叶片外植体与菌液充分接触，并放于震荡培养箱上震荡浸染IOmin ;浸染完后取出外植体，用灭菌滤纸吸去叶片表面附着的多余菌液，接种到垫有一层无菌滤纸且添加有こ酰丁香酮(AS，100umol/L)的共培养基上，于黑暗中共培养2_3d到肉眼有可见微菌落；共培养完后，将外植体接种到与预培养相同的培养基上进行恢复培养l-2d ;所述共培养培 养基为MS 基本培养基 +6-BA 2. Omg/L + IBA 0. 2mg/L+AS 100 u mol/L+30g/L 蔗糖 +8g/L琼脂，pH5. 4 5. 8 ; A5、抗性芽筛选和再生恢复培养后,将转化外植体转入含筛选剂潮霉素(Hyg,25mg/L)和抑菌剂头孢霉素(Cef，500 mg/L)的筛选培养基中筛选培养直到长出抗性芽，当抗性芽长到Icm吋，转入含筛选剂潮霉素(Hyg，15...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉，白史且，李达旭，邓永昌，方鹏飞，
申请(专利权)人：四川省草原科学研究院，
类型：发明
国别省市：