肌源性疾病检测用标记物及使用其的检测方法技术

本发明专利技术提供一种侵袭性低、且不受运动负荷的影响的高灵敏度的肌源性疾病的检测方法。所述检测方法对存在于受试者的血液中的miR-1、miR-133a、miR-133b及miR-206中的至少一种的量进行测定，在受试者的miRNA的血中量与健康个体的对应的miRNA的血中量相比统计学上显著高时，判断该受试者患有肌源性疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种肌源性疾病检测用标记物及使用其的检测有无肌源性疾病的方法、特别是涉及一种检测有无患有肌营养不良症的方法。
技术介绍
肌营养不良症作为肌源性疾病的一种，为由于骨骼肌的肌纤维变性或坏死而导致产生肌肉萎缩及肌肉力量下降的进行性的遗传性疾病。根据遗传类型及临床症状，已知有假肥大型、贝克尔型、肢带型、面肩肱型等各种病型(非专利文献I)。肌营养不良症的诊断由临床症状、血液检查、身体检查、肌电图检查、肌肉活检、基 因检查等综合进行。其中，血液检查通过肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)或醛缩酶等酶量的测定来进行。血液检查方法基于如下现象在肌细胞中大量含有的这些酶在肌营养不良症患者中由于肌细胞的坏死而漏出至血液中、成为比健康状态高的值。由于可进行末梢血中的检测，因此，对于受试者的侵袭性低、测定方法也比较简便，因此，可广泛用于肌营养不良症的诊断。其中，一般是对血清中的肌酸激酶值进行测定的方法(非专利文献2)。可是，以肌酸激酶为代表的上述酶也由于运动负荷引起的肌细胞的坏死而大量漏出至血中，因此，受试者有无运动负荷，血清中的浓度会大幅变动。因此，即使是健康人肌酸激酶值等也显示高值，因此，存在错误判断的问题及为了正确判断必须使采血前的受试者处于安静状态的烦恼。现有技术文献非专利文献非专利文献I杉田秀夫，小泽英二郎，埜中征哉编辑，1995，新筋肉病学.南江堂，东京pp469-550非专利文献2Sugita H.，等，1959，J. Biochem.，46 103-10
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的课题在于提供一种对受试者造成的侵袭性低、且相对于运动负荷稳定性高的肌源性疾病检测用标记物和使用其的肌源性疾病、特别是肌营养不良症检测方法。 用于解决课题的方法为了解决上述课题，本专利技术人等进行了潜心研究，结果发现，含有变异体的3种微小 RNA (miRNA)、即 miR-1、miR_133 (含有 2 个变异体 miR_133a 及 miR_133b)及 miR-206 的血中量与肌源性疾病、特别是肌营养不良症的发病密切相关，且几乎不受运动负荷的影响。迄今为止，已知miR-1及miR-133在心肌、心房及骨骼肌中特异性表达，还有miR-206在骨骼肌中特异性表达(Kim等.,2006, J.Cell Biochem，174，677-687)，但这些miRNA的血中量在肌源性疾病发病个体中几乎不受运动负荷的影响，关于可成为代替肌酸激酶的有用的检测用标记物是完全未知的。本专利技术是基于该见解而完成的，即，提供以下内容。(I) 一种检测受试者中有无肌源性疾病的发病的方法,该方法含有对存在于从受试者采集的血液中的含有序列号I 4所示的碱基序列的miRNA中的至少一种的量进行测定的工序；将受试者的所述miRNA的血中量与健康个体的对应的miRNA的血中量相比统计学上显著高的情况和该受试者患有肌源性疾病的情况相关联的工序。(2)根据⑴所述的方法，其中，miRNA由序列号I 4所示的碱基序列组成。(3)根据(I)或⑵所述的方法，其中，受试者的所述miRNA的血中量为健康个体的该miRNA的血中量的5倍以上。(4)根据⑴ (3)中任一项所述的方法，其中，通过核酸扩增法或杂交法对miRNA的血中量进行定量。 (5)根据(4)所述的方法，其中，核酸扩增法为实时PCR法。(6)根据(I) (5)中任一项所述的方法，其中，所述血液是从运动负荷后的受试者米集的。(7)根据(I) (6)中任一项所述的方法，其中，所述肌源性疾病为肌营养不良症。(8) 一种肌源性疾病检测用标记物，该标记物由含有序列号I 4所示的碱基序列的miRNA组成。本说明书包括作为本申请的优先权的基础的日本专利申请2010-041845号的说明书及/或附图中所记载的内容。专利技术效果根据本专利技术的肌源性疾病检测用标记物，可以提供一种不受受试者的运动负荷的影响的肌源性疾病的发病检测标记物。根据本专利技术的肌源性疾病的检测方法，可以提供一种可以检测该受试者中有无肌源性疾病发病的方法，所述方法对受试者造成的侵袭性低、且不受受试者的运动负荷的影响。附图说明图I表示mdx小鼠相对于BlO小鼠的各miRNA的血清中量的相对值；图2是表示BlO小鼠及mdx小鼠的运动负荷后的经过时间中的血清中的miR-1、miR-133a及miR-206量的变化的图。所表示的为，将各小鼠的运动前及运动负荷后的各经过时间中的血清中的miR-1、miR-133a及miR-206量用miR-16量校正后，相对于BlO小鼠的运动前的校正值的相对值。图中，a表示miR-l、b表示miR_133a、c表示miR-206及d表示肌酸激酶(CK),另外，白圈/虚线表示BlO小鼠、黑圈/实线表示mdx小鼠；图3是表示BlO小鼠及mdx小鼠的运动负荷后的经过时间中的血清中的miR-1、miR-133a及miR-206量的变化的图。所表示的为，将血清中的肌酸激酶(CK)、miR_l、miR-133a及miR-206用miR-16量校正后，运动负荷后的血清中量相对于各个运动负荷前的血清中量的相对值。图中，a表示miR-l、b表示miR_133a、c表示miR-206及d表示肌酸激酶(CK)，另外，白圈/虚线表示BlO小鼠、黑圈/实线表示mdx小鼠；图4表示肌营养不良症模型犬CXMDj或其带原犬出生后的血清中miRNA等的变化量。miRNA等的量是由用miRNA16的血清中的量校正后，相对于健康犬中的各自对应的miRNA等的对应的时期中的校正值的相对值表示。具体实施例方式I.肌源性疾病检测用标记物1-1.概要本专利技术的第I实施方式为肌源性疾病检测用标记物。通过对本实施方式的肌源性疾病检测用标记物即特定的miRNA的血液中的量进行测定，可以检测有无肌源性疾病的发病、特别是肌营养不良症的发病。1-2.构成 本专利技术的肌源性疾病检测用标记物由含有序列号I 4所示的碱基序列的miRNA构成。在本专利技术中，“肌源性疾病检测用标记物”是指在受验个体中成为检测有无肌源性疾病的发病时的指标的物质，在本专利技术中，在骨骼肌、心肌中特异性表达的特定的miRNA、SP以下具体地进行说明的miR-1、miR-133 (miR-133a及miR-133b)及miR-206是适用的。肌源性疾病检测用标记物含有所述miRNA单独或二种以上的组合中的任一种。在本专利技术中，“肌源性疾病”是指产生肌肉萎缩、肌肉力量下降的疾病。例如包括肌营养不良症(包括假肥大型、贝克尔型、埃-德型、肢带型、面肩肱型、眼咽型、先天性的各种肌营养不良症)、肌病(先天性、远端型、甲状腺功能低下性、类固醇肌病等)、炎症性肌病(包括多发性肌炎、皮肤肌炎)、Danon病(夕'' 7 >病)、肌无力综合征、线粒体病、肌红蛋白尿症、糖原病、周期性四肢麻痹等。在本专利技术中，优选的肌源性疾病为肌营养不良症。“miRNA”是指存在于细胞内的长度21 23碱基长的单链非编码RNA。已知该小分子RNA与靶基因的mRNA、及蛋白质因子结合而形成复合体，通过RISC(RNA诱导的沉默复合体)/miRNP的作用阻碍靶基因的翻译，由此对靶基因的表达进行调节。miRNA在被称为pri-miRNA的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：桥户和夫，水野英哉，
申请(专利权)人：独立行政法人国立精神·神经医疗研究中心，
类型：发明
国别省市：