本发明专利技术提供了一种从中药组合物中提取活性部位的方法，包括将原料药金银花、玄参、当归、甘草按照重量比2.5～4∶2.5～4∶1.5～2.5∶0.5～1.5的比例混匀后乙醇提取，得到提取液和残渣；所得提取液浓缩后上大孔树脂，分别采用水、30％乙醇、60％乙醇和95％乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第1～4提取物；残渣用水提取后得到第5提取物；第5提取物上大孔树脂，采用水、55％乙醇和95％乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第6提取物、第7提取物和第8提取物。本发明专利技术所提供的制备方法得到的提取物1～8，经实验验证对急性冠脉综合征均具有预防或治疗作用。此外，还提供了在上述制备过程中得到的一组有效部位。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种预防和治疗急性冠脉综合征的药物组合物，尤其是涉及这种组合物的现代剂型的制备方法和制备过程中得到的一组活性部位。
技术介绍
急性冠脉综合征(ACS)是一组由急性心肌缺血引起的临床综合征，包括急性心肌梗死(AMI)及不稳定型心绞痛(UA)，是严重危害人类健康的重大、常见疾病。凝血功能激活和易损斑块炎症反应在ACS的发生中起着重要作用，是两个核心病理环节。目前抗凝和抗血小板治疗研究较为深入，临床应用广泛；而在控制炎症反应、稳定易损斑块的治疗上缺乏有效手段。中医药在急性冠脉综合征的治疗上，特别是抑制动脉粥样硬化炎症反应、稳定斑块、减少严重心脑血管事件方面，显示了巨大潜力。四妙勇安汤由金银花、玄参、当归、生甘草组成，具有显著解毒活血定痛的作用，传统用于下肢动脉闭塞症和脉管炎的治疗。目前，关于该方在冠心病治疗方面的临床疗效及其抑制炎症反应、稳定动脉粥样硬化易损斑块的药理作用方面的报道已有一些。但因为原方用药量过大，煎煮麻烦，给临床用药和新药开发带来难度。因此，需要发现“四妙勇安汤”新剂型的制备方法和药效学物质基础，发现该经典名方的活性靶点所在，研制出药效物质清楚、作用环节明确、安全高效、质量可控的治疗急性冠脉综合征的现代中药。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种药效物质清楚、作用环节明确、安全高效、质量可控的对急性冠脉综合征具有预防或治疗作用的药物组合物的制备方法。进一步地，本专利技术还提供了在该制备过程中所得到的、具有显著抑制动脉粥样斑块炎症反应作用的一组有效部位。为了实现上述至少一个专利技术目的，本专利技术首先提供了一种对急性冠脉综合征具有预防或治疗作用的药物组合物的制备方法，包括如下步骤a)将原料药金银花、玄参、当归、甘草按照重量比2. 5 4 2. 5 4 I. 5 2.5 0. 5 I. 5的比例混匀；b)将所述原料药中加入40 60%的乙醇作为提取溶剂，所述原料药与所述提取溶剂的固液比为I : 5 10，提取2次以上，每次I. 5 4. 5小时，过滤后合并滤液，得到提取液和残渣；c)将所述提取液浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，分别采用水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第I提取物、第2提取物、第3提取物和第4提取物；d)将所述残渣用水提取2 3次，每次I 2小时，得到第5提取物；以及，e)将所述第5提取物浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，采用水、55%乙醇和95%乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第6提取物、第7提取物和第8提取物。根据本专利技术的实施方式之一，原料药中金银花、玄参、当归、甘草的优选重量比为3 : 3 : 2 : I。这既是临床经验的总结，同时又是经过实验验证的有效配比。根据本专利技术的另一实施方式，提取的步骤b)中乙醇的浓度为55%。根据本专利技术的实施方式之一，步骤b)中固液比为优选为I : 6 8。根据本专利技术的实施方式之一，步骤b)中的提取次数为4次。根据本专利技术的实施方式之一，步骤b)中的提取时间为2 4小时。根据本专利技术的实施方式之一，本制备方法中所采用的大孔树脂为苯乙烯型弱极性共聚物，优选为AB-8大孔树脂。 优选地，本专利技术所提供的一种对急性冠脉综合征具有预防或治疗作用的药物组合物的制备方法，包括如下步骤a)将原料药金银花、玄参、当归、甘草按照重量比3:3:2: I的比例混匀；b)将所述原料药中加入55%的乙醇作为提取溶剂，所述原料药与所述提取溶剂的固液比为I : 8，提取4次，每次2小时，过滤后合并滤液，得到提取液和残渣；c)将所述提取液浓缩至干，后加水混悬，上AB-8大孔树脂，分别采用水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第I提取物、第2提取物、第3提 取物和第4提取物；d)将所述残渣用水提取2次，每次I. 5小时，得到第5提取物；以及，e)将所述第5提取物浓缩至干，后加水混悬，上AB-8大孔树脂，分别采用水、55%乙醇和95%乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第6提取物、第7提取物和第8提取物。以上所述本专利技术所提供的制备方法及其优选方案，是专利技术人在多年医疗实践的基础上摸索而成，并经过实验验证的、针对传统名方四妙勇安汤的新剂型的提取加工工艺。采用本专利技术所提供的制备方法得到的提取物I 8，经分子水平实验验证对急性冠脉综合征的病理靶点均具有预防或治疗作用。经专利技术人在实验中，采用NF-k B反应原件 结合抑制剂筛选模型和过氧化物酶增殖剂受体(PPARy)激动剂筛选模型，对这些提取物的抑制炎症反应的作用进行验证，证实它们均有不同程度的抑制动脉粥样斑块炎症反应的作用。NF-k B过度活化可引起多种病理反应，特别是和多种炎症反应相关，其中激活动脉粥样斑块炎症反应也是其中之一。NF- K B多以p50或p52结合p65亚基的形式存在，活化后P65亚基与I K B解离，由胞浆转位进入胞核，与靶基因上的反应原件(RE)结合，调节目的基因的表达。因此，NF-K B转位后早期基因表达的阻断策略为抑制其病理信号通路的关键靶点。专利技术人利用分子克隆技术，以人脐静脉内皮细胞cDNA为模板，扩增NF-K B-RE基因，克隆至pGL4. 32真核表达载体中，经转染，导入293A细胞内，经Hygromycin筛选、传代，建立了稳定表达NF- K B-RE的细胞系(pGL4. 32 [luc2P/NF_kappaB-RE] 293A)。该模型可直接通过荧光素酶检测试剂检测荧光素酶光化学值的变化，用于进行NF-k B抑制剂的高通量筛选。经验证，确定第1、2、3、5、6、7提取物对即-1^8通路具有阻断作用，能够通过抑制早期基因表达而抑制该病理信号通路。过氧化物酶增殖剂受体(PPAR)是配体激活的转录因子核受体超家族成员之一。目前已知其三个亚型PPARa，-￠/6和-Y。过氧化物酶增殖剂受体Y (PPAR y )能影响NF-K B、信号转录子、激活蛋白-I介导的信号通路，通过抑制这些途径的激活达到抑制靶基因启动子激活和转录的目的。PPARy的N端功能区含有一个能被有丝分裂原激活的蛋白激酶磷酸化位点，若该区域突变或在磷蛋白磷酸酶共同作用下则不能产生磷酸化而使其活化。配体与PPAR Y结合并使之激活后，与视黄醒X受体a (retinoid X receptor a，RXR a )形成异ニ聚体，再结合于特异性DNA序列而使靶基因活化，此序列称为PPAR特异性反应兀件(peroxisome proliferator responsive element, PPRE)。含有 PPRE 结构的基因包括已酰辅酶A合成酶、脂蛋白脂肪酶(LPL)、胰岛素受体底物-2 (IRS-2)、瘦素以及肿瘤坏死因子-a (TNF-a)等。PPARy通过调节相关基因的表达，在脂肪形成、糖脂代谢，以及在免疫系统中发挥重要作用，并与多种疾病如糖尿病、肥胖、高血压、癌症等的发生、发展有关。尤其是PPARy是脂肪细胞分化过程中的关键因子，近年来备受关注。PPARy成为了肥胖，高血压，动脉粥样硬化的治疗靶点。专利技术人以PPARy为靶位筛选其激动剂，发现第3、4、7、8提取物均有明显的PPARy激动剂效果，其中第3提取物和第7提取物在0. lmg/ml时的有效率分别为100%本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从中药组合物中提取活性部位的方法，包括如下步骤：a)将原料药金银花、玄参、当归、甘草按照重量比2.5～4∶2.5～4∶1.5～2.5∶0.5～1.5的比例混匀；b)将所述原料药中加入40～60％的乙醇作为提取溶剂，所述原料药与所述提取溶剂的固液比为1∶5～10，提取2次以上，每次1.5～4.5小时，过滤后合并滤液，得到提取液和残渣；c)将所述提取液浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，采用水、30％乙醇、60％乙醇和95％乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第1提取物、第2提取物、第3提取物和第4提取物；d)将所述残渣用水提取2～3次，每次1～2小时，得到第5提取物；e)将所述第5提取物浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，分别采用水、55％乙醇和95％乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第6提取物、第7提取物和第8提取物。
【技术特征摘要】
2011.04.01 CN 201110082380.41.一种从中药组合物中提取活性部位的方法，包括如下步骤 a)将原料药金银花、玄參、当归、甘草按照重量比2.5 4 2. 5 4 I. 5 2.5 0. 5 I. 5的比例混匀； b)将所述原料药中加入40 60%的こ醇作为提取溶剂，所述原料药与所述提取溶剂的固液比为I : 5 10，提取2次以上，毎次I. 5 4. 5小时，过滤后合并滤液，得到提取液和残渣； c)将所述提取液浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，采用水、30%こ醇、60 %こ醇和95%こ醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第I提取物、第2提取物、第3提取物和第4提取物； d)将所述残渣用水提取2 3次，毎次I 2小时，得到第5提取物； e)将所述第5提取物浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，分别采用水、55%こ醇和95%こ醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到第6提取物、第7提取物和第8提取物。2.如权利要求I所述的制备方法，其中所述原料药中金银花、玄參、当归、甘草的重量比为 3 : 3 : 2 : I。3.如权利要求I所述的制备方法，其中所述步骤b)中こ醇的浓度为55%。4.如权利要求I所述的制备方法，其中所述步骤b)中固液比为I: 6 8。5.如权利要求I所述的制备方法，其中所述步骤b)中的提取次数为4次，提取时间为2 4小时。6.如权利要求I所述的制备方法，其中所述大孔树脂为苯こ烯型弱极性共聚物，优选为AB-8大孔树脂。7.如权利要求I所述的制备方法，其中所述第I 8提取物对急性冠脉综合征均具有预防或治疗作用。8.ー种对急性冠脉综合征具有预防或治疗作用的中药组合物有效部位，其制备方法为 a’)将原料药金银花、玄參、当归、甘草按照3 3 2 I的比例混匀；b’ )将原料药中加入55%的こ醇作为提取溶剂，所述原料药与所述提取溶剂的固液比为I : 8，提取4次，毎次2小时，过滤后合并滤液，得到提取液；以及...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈立新，吴圣贤，聂波，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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