【技术实现步骤摘要】
本专利技术设计绵羊18号染色体末端微卫星标记UMP基因型，分型检测方法，可以快速高效预测陶赛特羊早期生长发育性状，建立了该微卫星标记基因型分型的检测方法。
技术介绍
1983年，在美国的无角陶赛特羊群体中发现了一只后臀极度发达的个体，人们称这种表型为双肌臀性状，根据表型将该基因命名为Callipyge (CLPG)基因，20世纪末，人们将CLPG基因初歩定位于陶赛特羊第18号染色体的末端区域，位于微卫星标记CSSM18和TGLA122 之间。文献检索披露I)Journal of Animal Science, 76(1998), 2549- 2559，作者Freking等研究发现CLPG基因可显著提高双肌臀羊的瘦肉率，也使皮下肌间、肌内和肾周的脂肪減少，能显著提高屠宰率。2)GenetiCS，163(2003)，453-456，作者Maria等研究发现在CLPG基因内的DLKl和GTL2位点间存在ー处碱基突变(A-G)可以决定CLPG表型。3)国内南京农业大学刘国庆等研究陶赛特羊和萨福克羊及其杂交后代CLPG基因多态性，发现18号染色体Meg3. 9位点与肉羊...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ー种通过微卫星标记检测陶赛特羊早期生长发育的方法，其特征在干包括I)依据第五代绵羊基因图谱，发现位于绵羊18号染色体末端93. 9cM位置的微卫星标记UMP ；2)人工合成一对核苷酸序列作为检测微卫星标记UMP基因型的引物，其正向引物5’-CTTCCTCATTGGACTTAGCTGCTT -3，；反向引物5，- GAGCCTGGTGAGCTGCTGTCTAT -3，；上下游引物长度分别为24bp和23bp ；3)采集陶赛特羊血液，提取基因组DNA，利用引物扩增PCR，以凝胶成像确定已扩增的目的条带；4)利用荧光标记的PCR引物对多态位点进行扩增并确定扩增片段的长度，实现对微卫星多态位点的分型，确定陶赛特羊微卫星标记UMP的基因型分别是 104/110,107/110,104/107,110/110,104/104，107/107 ； 其中绵羊基因组DNA体外扩增 采集羊外周血液I. 5ml，使用肝素纳抗凝采血管，-20°C冷冻保存，提取基因组DNA ；· 其中绵羊血液基因组DNA的制备 (1)取出-20°C冷冻血液O.5-1.0 ml，在室温下完全融化，于10000 r/min离心10分钟，弃去上层液，中含裂解的红细胞；加入Iml红细胞裂解液，弹起管底沉淀，轻柔的摇匀10分钟，于10000 r/min离心10分钟，弃去上层液；再加入Iml红细胞裂解液，弹起管底沉淀，轻柔的摇勻10分钟，于10000 r/min离心10分钟,弃去上层液； (2)向管内依次加入600μI的白细胞裂解液，70ul的10% SDS溶液，15ul浓度为20mg/mL的蛋白酶K溶液和3 ul浓度为10mg/mL的Rnase A溶液，弹起管底沉淀，轻柔的摇匀，置于55°C振荡水浴锅中振荡过夜； (3)取出混合液将其冷却至室温，向管内加入600ulTris-HCl饱和酚溶液，将两相上下轻柔颠倒混勻5分钟，于10000 r/min离心10分钟；用直径为O. 2-0. 35cm的Iml枪头将上层清液吸出600ul-650ul，移至另一新的灭菌离心管中，加入酚氯仿比1:1的混合溶液600ul，轻柔的摇匀10分钟，于10000 r/min离心10分钟；再用直径为O. 25-0. 38cm的Iml枪头将上层清液吸出490-520ul，移至另一新的灭菌离心管中，加入氯仿溶液600ul，轻柔的摇匀10分钟，于10000 r/min离心10分钟；第三次用直径为O. 28_0. 37cm的Iml枪头将上层清液吸出300-350ul，移至另一新的灭菌离心管中，加入无水こ醇1ml，轻柔的摇匀2分钟，可看到漂浮的絮状物即为DNA，于10000 r/min离心10分钟； (4)将管内的上清混合液弃去，加入70%酒精200ul，弹起管底DNA沉淀，...
【专利技术属性】
技术研发人员：史洪才，牛志刚，杨丹，梁庆玲，刘明军，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国澳大利亚绵羊育种研究中心，
类型：发明
国别省市：
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