一种模拟人盆腔炎动物模型的制作方法技术

本发明专利技术涉及一种模拟人盆腔炎动物模型的制作方法，选用无生殖道疾患的鼠科动物，在无菌的条件下，将肠杆菌属、葡萄球菌属或念珠菌属接种于动物阴道中。接种1-8周，每周1-7次。本发明专利技术具有以下优点：模型制作成功率高，模型成功率高，不依赖免疫抑制剂，模型成功后，阴道口分泌物显著增多；阴道涂片镜检可观察到细菌；解剖发现子宫充血脓肿，卵巢囊肿。组织器官切片镜检可观察到子宫和输卵管均见大量炎症细胞浸润，血液检查表明中性粒细胞数异常增高。操作方法简单易行，材料易得，方法易掌握，对使用者无特殊技术要求，并符合盆腔炎临床自然发生过程，适用于盆腔炎发生，发展及其机制的研究和相关药物的筛选。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
盆腔炎是指女性内生殖器官及周围的结缔组织、盆腔腹膜发生炎症。它包括子宫内膜炎、子宫肌炎、输卵管炎、卵巢炎等。盆腔炎为 妇科常见病、难治病。严重者可引起败血症及脓毒血症。如不及时控制，可出现感染性休克甚至死亡。亦可能导致月经失调，甚至不孕。其发病率不断增高。临床研究表明盆腔炎常见的致病因子为细菌(包括需氧菌和厌氧菌)，也有病毒、霉菌、支原体、衣原体等。目前盆腔炎动物模型与人疾病发生机制不吻合，发病机制不清，严重阻碍治疗盆腔炎药物的开发与研究。目前公开的盆腔炎动物模型有以下几种 一、子宫内膜炎模型 I.苯酚胶浆剂致大鼠子宫内膜炎模型苯酚胶浆是化学腐蚀烧伤剂。将大鼠麻醉后，下腹常规消毒后正中切口，暴露子宫，于子宫分叉处进针入子宫腔内，朝卵巢方向缓慢推入25 %苯酹胶浆0.05 mL/只，然后分层缝合关腹，子宫病理学检查发现与炎症反应相似，可见子宫腔闭塞黏连，上皮细胞坏死脱落，大量炎症细胞浸润。2.盐酸致大鼠子宫内膜炎模型将大鼠麻醉后，行腹正中线切口，暴露子宫，用镊子夹住双角子宫分叉处的一侧，在同侧子宫近卵巢端进针，向子宫腔内注射0. 2 M盐酸，以管腔充盈为度，维持2. 5 min后松开镊子，另一侧相同。双侧子宫注射完毕后，逐层关腹。子宫病理学检查发现在子宫内膜黏膜少量炎症细胞浸润。一周后炎症细胞浸润增多。3.异物致大鼠子宫内膜炎模型将大鼠麻醉后，开腹暴露子宫，沿左侧子宫角上Icm处作一横切口，将一塑料管放在子宫内，缝合固定以防脱落。病理观察到少量炎症细胞。然而以上两种方法通过化学烧伤、腐蚀或异物致炎，方法过于强烈，同人盆腔炎发生的自然过程不符合。4.大鼠大肠杆菌感染性子宫内膜炎模型将大鼠麻醉后，无菌条件下取腹部正中切口，开腹暴露子宫，用ImL注射器抽取0. 2mL大肠杆菌液，于子宫内进针，在注射前先用注射器机械损伤子宫内膜组织，然后注入菌液0. 08 0. lmL，逐层关腹。病理学检查发现造模感染第3 d，黏膜出现化脓灶，第5 d，子宫右侧积液，充血水肿。第60 d，盆腔出现广泛黏连不易分离。病理切片发现大量炎性细胞浸润。该方法与手术过程中感染产生的盆腔炎较为接近，然而同现实中的手术操作条件不相吻合，动物死亡率高，不适用于药物筛选与机理研究。5.兔细菌感染性子宫内膜炎模型将致病性大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和无乳链球菌等比例混合。用导尿管通过子宫灌注并结合一定的损伤。隔天一次，共三次。发现造模后兔精神变差、采食量减少，阴门肿胀，流出脓性分泌物；每次灌注细菌后8 h内体温升高0.5 °C左右，血液中性粒细胞的比例升高；子宫分泌物中混有大量白细胞、脓球和少量脱落的子宫内膜上皮细胞；子宫显著肿大，子宫内膜溃疡和出血，上皮结构不完整，细胞变性、坏死，微绒毛和纤毛脱落，上皮下出血、瘀血、水肿和炎性细胞浸润。该方法同临床更为接近，但是导尿管损伤过于剧烈，且兔子体型较大，洁净级兔成本较高，不适用于药物研究。二、输卵管炎模型 I.苯酚胶浆剂致大鼠输卵管炎模型将大鼠麻醉后，开腹暴露两侧输卵管，各注射25%苯酚胶浆0.1 mL，缝合。20 d后，大鼠全血黏度升高，输卵管阻塞。该法于临床疾病发生不吻合。2.兔溶血性链球菌感染性输卵 管炎模型新西兰白兔，麻醉后，打开腹膜暴露子宫、输卵管，用动脉夹将输卵管峡部端、伞端夹住，由峡部端向伞端注射3 -溶血性链球菌菌液(I. 5亿菌落/mL)0. 4 mL/侧。I min后松开动脉夹，关腹。血液观察发现血沉压积异常，输卵管阻塞，盆腔黏连。3.大鼠细菌感染性输卵管炎模型麻醉开腹，在子宫角近输卵管处进针，朝输卵管侧注射0. 05 mL混合菌液(致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌，菌液体积比为2:1:1。感染后3 12 d，感染组大鼠子宫显著增重。感染后第9 d，感染大鼠子宫出现化脓；感染前期可见子宫内膜上皮细胞脱落，黏膜层水肿、充血、出血，炎症细胞浸润；感染后期可见肌层增厚等病变。以上两种方法同临床盆腔炎发生也不相同，且手术难度较大，阻碍模型的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种操作简单可行，材料容易得到，对操作者无特殊技术要求，模型制作成功率高，模拟人盆腔炎发生的动物模型的制作方法。为实现以上目的，本专利技术采用如下技术方案一种建立模拟人盆腔炎动物模型的方法，选用无生殖道疾患的鼠科动物，在无菌的条件下，将肠杆菌属、葡萄球菌属或念珠菌属接种于动物阴道中。接种1-8周，每周1-7次。本专利技术可在动物接种前，采用类固醇激素类药物处理动物1-8周，每周1-7次。所述类固醇激素为雌性激素或肾上腺皮质激素。所述的雌性激素为雌二醇。所述的肾上腺皮质激素为氢化考的松、泼尼松或地塞米松等。所述的肠杆菌属为大肠杆菌菌株6頂1.457、大肠杆菌菌株々了025922等，优选大肠杆菌菌株GMl. 457 ;所述葡萄球菌属为金黄色葡萄球菌CPCC160012、金黄色葡萄球菌菌株ATCC25923等，优选金黄色葡萄球菌CPCC160012 ；、所述念珠菌属为白色念珠菌ATCC90029、白色念珠菌菌株(国标10231)等，优选白色念珠菌ATCC90029。所述的鼠科动物为远交系或近交系小鼠或大鼠。本专利技术具有以下优点模型制作成功率高，模型成功率达75%以上，采用大肠杆菌菌株GMl. 457、金黄色葡萄球菌CPCC160012或白色念珠菌ATCC90029接种，模型成功率达90%以上(动物接种前，采用类固醇激素类药物处理后，模型成功率达100%)，不依赖免疫抑制剂，模型成功后，阴道口分泌物显著增多；阴道涂片镜检可观察到细菌；解剖发现子宫充血肿大，卵巢囊肿病变。组织器官切片镜检可观察到子宫和输卵管均见大量炎症细胞浸润，血液检查表明中性粒细胞数异常增高。操作方法简单易行，材料易得，方法易掌握，对使用者无特殊技术要求，并符合盆腔炎临床自然发生过程，适用于盆腔炎发生，发展及其机制的研究和相关药物的筛选。附图说明图I为实施例2大肠杆菌(GM1. 457)制备盆腔炎模型SD大鼠生殖器官照片。其中Con为正常组大鼠A.外阴；B.生殖器官；C.子宫切片HE染色。Coli为大肠杆菌组大鼠A.外阴；B.生殖器官；C.子宫切片HE染色。图2为实施例2大肠杆菌制备盆腔炎模型SD大鼠血液中性粒细胞百分比图。 图3为实施例4金黄色葡萄球菌(CPCC160012)制备盆腔炎模型Wistar大鼠生殖器官照片。Con为正常组大鼠A.外阴；B.生殖器官；C.输卵管切片HE染色。Aureus为大肠杆菌组大鼠A.外阴；B.生殖器官；C.输卵管切片HE染色。图4为实施例4金黄色葡萄球菌制备盆腔炎模型Wistar大鼠血液中性粒细胞百分比图。图5为实施例6白色念珠菌(ATCC90029)制备盆腔炎模型昆明小鼠生殖器官照片。Con为正常组小鼠A.生殖器官；B.输卵管切片HE染色。Albus为白色念珠菌组小鼠A.生殖器官输卵管切片HE染色。图6为本专利技术实施例6白色念珠菌制备盆腔炎模型昆明小鼠血液中性粒细胞百分比图。具体实施例方式本专利技术可包括 菌种准备在菌种准备步骤中，选用所需细菌菌株接种于培养基中，15-38°C下培养1-7 天； 动物准备在动物准备步骤中，选用无生殖道疾患的鼠科动物； 接种前处理(也可不采用该步骤)在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
2011.05.24 CN 201110134884.61.一种建立模拟人盆腔炎动物模型的方法，其特征在于选用无生殖道疾患的鼠科动物，在无菌的条件下，将肠杆菌属、葡萄球菌属或念珠菌属接种于动物阴道中；接种1-8周，每周1-7次。2.根据权利要求I所述的方法，在动物接种前，采用类固醇激素类药物处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏，李玉桑，唐和斌，杨祥良，
申请(专利权)人：唐和斌，
类型：发明
国别省市：