具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及具有纤维素分解增强活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于制备和使用所述多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有纤维素分解增强活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多 核苷酸。本专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于产生和使用所述多肽的方法。相关领域描述纤维素是单糖葡萄糖通过β -I, 4-键连接的聚合物。许多微生物产生水解β -连接的葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶、纤维ニ糖水解酶和葡糖苷酶。内切葡聚糖酶在随机位置消化纤维素聚合物，将其打开(opening it)以受到纤维ニ糖水解酶攻击(attack)。纤维ニ糖水解酶继而从纤维素聚合物的末端释放纤维ニ糖的分子。纤维ニ糖是水溶性的β -I, 4-连接的葡萄糖ニ聚体。β -葡糖苷酶将纤维ニ糖水解成葡萄糖。将含木素纤维素原料(lignocellulosic feedstock)转化为こ醇具有以下优势大量原料现成可用，避免燃烧或填埋材料的合意性和こ醇燃料的清洁性。木材、农业残余物、草本作物和城市固体废物被认为是用于こ醇生产的原料。这些材料主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。一旦将纤维素转化成葡萄糖，葡萄糖将容易地由酵母发酵成こ醇。本领域中有利的是改进酶法降解木素纤维素原料的能力。WO 2005/074647公开了来自土生梭抱霉(Thielavia terrestris)的具有纤维素分解增强活性的分离的多肽和它的多核苷酸。WO 2005/074656公开了来自桔橙嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)的具有纤维素分解增强活性的分离的多肽和它的多核苷酸。WO 2007/089290公开了来自里氏木霉(Trichodermareesei)的具有纤维素分解增强活性的多肽和它的多核苷酸。本专利技术提供具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸。专利技术概述本专利技术涉及具有纤维素分解增强活性的分离的多肽，所述多肽选自下组(a)多肽，其包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少90%同一性，或与SEQ ID N0:4或SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少80%同一性；(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在高严格条件下与以下杂交(i)SEQID N0:USEQ ID N0:3 或SEQ ID NO:5 的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NOiUSEQID N0:3或SEQ ID N0:5的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或(iii) (i)或(ii)的全长互补链；(c)多肽，其由包含核苷酸序列的多核苷酸编码，所述核苷酸序列与SEQID NO: I的成熟多肽具有至少90%同一性，或与SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5的成熟多肽具有至少80%同一性；和(d)SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:4或SEQ ID NO: 6的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入ー个或多个(几个)氨基酸的变体。本专利技术还涉及编码具有纤维素分解增强活性的多肽的分离的多核苷酸，所述多核苷酸选自下组(a)多核苷酸，其编码包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ IDNO: 2的成熟多肽具有至少90%同一性，或与SEQ ID N0:4或SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少80%同一I生； (b)多核苷酸，其在至少高严格条件下与以下杂交(i)SEQ ID NOiUSEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO: K SEQ ID N0:3或SEQ IDNO: 5的成熟多肽编码序列中的cDNA序列或(iii)⑴或(ii)的全长互补链；(c)多核苷酸，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列与SEQ ID NO: I的成熟多肽具有至少80%同一性，或与SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5的成熟多肽具有至少80%同一性；和(d)多核苷酸，其编码SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:4或SEQ ID N0:6的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入ー个或多个(几个)氨基酸的变体。本专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体和重组宿主细胞，和产生具有纤维素分解增强活性的多肽的方法。本专利技术还涉及抑制具有纤维素分解增强活性的多肽在细胞中表达的方法，所述方法包括对细胞施用或在细胞中表达双链抑制性RNA(dsRNA)分子，其中所述dsRNA包含本专利技术的多核苷酸的亚序列。本专利技术还涉及这种双链抑制性RNA(dsRNA)分子，其中任选地dsRNA 是 siRNA 或 miRNA 分子。本专利技术还涉及用于降解或转化纤维素材料的方法，其包括在存在本专利技术具有纤维素分解增强活性的多肽的情况下，用酶组合物处理纤维素材料。在一个优选的方面，本方法进ー步包括回收经降解或转化的纤维素材料。本专利技术还涉及产生发酵产物的方法，其包括(a)在存在本专利技术的具有纤维素分解增强活性的多肽的情况下用酶组合物糖化纤维素材料；(b)用ー种或多种(几种)发酵微生物发酵经糖化的纤维素材料以产生发酵产物；和(C)从发酵回收发酵产物。本专利技术还涉及发酵纤维素材料的方法，其包括用ー种或多种(几种)发酵微生物发酵纤维素材料，其中在存在本专利技术的具有纤维素分解增强活性的多肽的情况下，用酶组合物糖化纤维素材料。在一个优选的方面，所述纤维素材料的发酵产生发酵产物。在ー个方面，本专利技术进一歩包括从发酵回收发酵产物。本专利技术还涉及包含分离的多核苷酸的植物，所述多核苷酸编码具有纤维素分解增强活性的多肽。本专利技术还涉及用于产生具有纤维素分解增强活性的多肽的方法，其包括(a)在有助于产生该多肽的条件下培养包含多核苷酸的转基因植物或植物细胞，所述多核苷酸编码具有纤维素分解增强活性的多肽；和(b)回收所述多肽。本专利技术进ー步涉及编码信号肽的分离的多核苷酸，所述信号肽包含SEQID N0:2的氨基酸I至22、SEQ ID NO:4的氨基酸I至18或SEQ ID N0:6的氨基酸I至23，或者由SEQ ID NO:2的氨基酸I至22、SEQ ID NO:4的氨基酸I至18或SEQ ID NO:6的氨基酸I至23组成；涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、表达载体和重组宿主细胞；并涉及产生蛋白的方法。附图简述图I显示具有纤维素分解增强活性的甲壳嗜热子囊菌(Thermoascuscrustaceus)CBS 181.67 GH61A多肽基因的基因组DNA序列和推导的氨基酸序列(分别为SEQ ID NO 1 和 2)。图2显示具有纤维素分解增强活性的甲壳嗜热子囊菌CBS 181.67 GH61B多肽基因的基因组DNA序列和推导的氨基酸序列(分别为SEQ ID NO 3和4)。 图3显示具有纤维素分解增强活性的甲壳嗜热子囊菌CBS 181.67 GH61C多肽基因的基因组DNA序列和推导的氨基酸序列(分别为SEQ ID NO 5和6)。图4显示pGH61a51486的限制图谱。图5显示pGH61D14YF的限制图谱。图6显示pGH61D14YH的限制图谱。图7显示具有纤维素分解增强活性的甲壳嗜热子囊菌CBS 181.67 GH61A多肽对PCS水解的作用。图8显示具有纤维素分解增强活性的甲壳嗜热子囊菌CBS 181.67 GH61B多肽对PCS水解的作用。定义具有纤维素分解增强活性的多肽术语“具有纤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.09.30 US 61/247,2501.具有纤维素分解增强活性的分离的多肽，其选自下组 (a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQID NO:2的成熟多肽具有至少90%同一性，或与SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的成熟多肽具有至少80%同一性； (b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在高严格条件下与以下杂交(i)SEQIDNO: K SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO: K SEQID NO:3或SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或(iii) (i)或(ii)的全长互补链； (c)由包含核苷酸序列的多核苷酸编码的多肽,所述核苷酸序列与SEQIDNO: I的成熟多肽编码序列具有至少90%同一性，或与SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5的成熟多肽编码序列具有至少80%同一性；和 (d)SEQID NO:2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入ー个或多个(几个)氨基酸的变体。2.权利要求I 的多肽，其包含 SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:4 或 SEQ ID NO:6 或 SEQ IDNO: 2,SEQ ID N0:4或SEQ ID NO:6的成熟多肽或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列，或者由 SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:4 或 SEQ ID NO:6 或 SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6的成熟多肽或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列組成。3.权利要求I的多肽，所述多肽由下述质粒中所含的多核苷酸编码分别包含在大肠杆菌 DSM 22656、DSM 22654 或 DSM 22657 中的质粒 pGEM-T_GH61a51486、pGEM-T_GH61DYF或 PGEM-T-GH61D14YH。4.分离的多核苷酸，其包含编码权利要求I的多肽的核苷酸序列。5.用于产生权利要求I的多肽的方法，其包括(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生所述多肽；和(b)回收所述多肽。6.用于产生具有纤维素分解增强活性的多肽的方法，其包括(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养包含权利要求4的多核苷酸的重组宿主...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤岚，刘晔，段俊欣，吴文平，R克雷默，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，诺维信公司，
类型：发明
国别省市：