本发明专利技术公开了一株烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌(Pseudomonas?putida)菌株，菌株代号为A3，该菌株于2011年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC?No.5231。该菌株能够抑制烟草普通花叶病毒(Tobacco?mosaic?virus)的侵染，生防实验表明能够防治烟草普通花叶病毒。同时本发明专利技术还提供了一种从该菌株中得到活性小分子物质的混合物，在烟草普通花叶病毒防治方面，具有很高的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一株烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌菌株，该菌株以及从该菌株中得到活性小分子物质的混合物在烟草普通花叶病毒防治方面的应用。
技术介绍
烟草病毒性病害是世界各烟区的主要病害之一，每年都要造成巨大的经济损失。我国的烟草病毒病害在建国初期已有文献记载，进入20世纪70年代以后，病毒病的危害 逐年加重。1989-1991年进行的国家烟草专卖局资助科研项目“全国烟草侵染性病害调查研究”，查明引起我国烟草病毒病的病毒共有16种，其中分布广泛、危害严重的有4种包括烟草普通花叶病毒(TMV)、烟草黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草蚀纹病毒(TEV)、马铃薯Y病毒(PVY)，其次还有烟草环斑病毒(TRsv)、马铃薯X病毒(PVX)、烟草坏死病毒(TNv)、烟草线条病毒(TSV)等。据估计，由于病毒病的危害，全世界每年仅由烟草花叶病毒病一项危害就造成约I亿多美元的经济损失。烟草普通花叶病毒的不同株系在混合侵入烟株时常常存在着基因水平和非基因水平的相互作用，而不同株系在先后侵入烟株时也会存在交互保护作用。烟草普通花叶病毒在侵染烟株后在烟株体内有细胞间转移和远距离转移两种，粒体在细胞间转移时主要通过胞间连丝，而远距离转移则通过筛管等，也有报道称病毒的转移速度与植物营养主流的移动速度有关。烟草普通花叶病毒的传播方式主要有汁液传播，如田间农事操作过程中人为的汁液摩擦传播、机械摩擦传播等，也可以通过土壤传播，田间病残的根、茎、叶在土壤中均可传毒。病毒一般通过微伤口侵染烟草，可引起一系列诸如坏死、畸形、矮化、花叶、变色等组织病变，另外还可以叶片细胞松散、胞核不正常、染色质块呈网络状等超微结构的变化。病毒侵染烟草后也会引起一些生理生化变化，如病毒烟草普通花叶病毒侵染植株后其外壳蛋白会对光合作用II的功能产生严重影响；另外随着病毒侵染时间的延长，植物叶绿素的含量也会相应降低，影响光合作用，降低抵抗力；也有报道称病毒侵染后，病株根际土壤中的磷酸酶、脲酶活性低于健株根际土，而其过氧化物酶活性高于健株根际土，通过这些指标可以在品种的抗病性鉴定中起指导作用。被称为“植物癌症”之一的烟草普通花叶病毒严重危害着我国乃至全世界的烟草生产，造成极大的经济损失。20世纪60年代以前我国各大烟区受TMV危害最严重，后来黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒与烟草普通花叶病毒两两之间或者三者复合侵染为害着烟草的生产。TMV在烟株生长过程中从苗期到大田整个生长发育期均可发生，主要造成烟叶的叶片厚薄不匀乃至畸形、皱缩且呈现黄绿斑驳，严重时可使花器变形，果实小而皱缩，种子不能发芽，还会使烤烟的色泽，吃味，品质不同程度的下降。烟草病毒病一旦发生很少有化学方法及时控制，对于病毒病的防治，应该加强病虫害的预测预报，及时掌握病毒病发生的动态，可以有针对性的采取防治措施。一般采用预防为主，综合防治结合的策略。培育抗病毒品种。这是治疗TMV最根本的有效方法。我国培育ー批抗病毒品种应用于实践中，如红花大金元、辽烟15号，NC89等抗TMV效果显著；还有引进的白肋21、柯克86等，还有方荣祥等通过转基因技术培育的抗TMV纯和品系均表现较强的抗性。加强苗床管理，培育无病壮苗。苗床的营养土要经过消毒处理，施用的肥料也不能混入病株残屑。实行轮作，加强田间管理。与非寄主植物(如小麦，花生、水稻等)轮作3年左右。注意烟田卫生环境，及时清理病株残体，深耕埋土，及时追肥，打顶抹杈时手用肥皂水清洗干净，器具及时消毒，进入烟田时不能抽烟。药剂防治。施用抗病毒剂虽然快捷简便但是目前仍然没有对TMV防治效果特别好 的药剂。因此从苗期施药防治来防止病毒的摩擦传播，以及提高抗病性，目前应用的抗病毒剂主要有宁南霉素、嘧肽霉素、毒消等，可以作为一种辅助治疗。半个多世纪以来，化学农药在农业生产中一直占据非常重要的地位，然而化学农药的不合理使用及其高毒、高残留的特性不仅对人畜的安全造成极大的威胁，还严重破坏了生态平衡。随着病虫害的抗药性逐年加强，农药的使用量和使用频率也相应加大，同时又对环境的污染和非靶标生物的杀伤カ造成更严重的恶性循环。而生物农药具有低毒、繁殖快、不伤害天敌且防治对象不易产生抗药性，被称为“无公害农药”。随着对緑色生态农业和循环可持续发展的追求，低毒、无残留的生物农药引起了各国政府和人民的高度重视，生物农药的研发和产业化也得到国家的大力支持。目前人们获得的天然产物化合物总量已经超过100万种，其中有2万多种为微生物代谢产物在这些微生物活性产物中直接使用的有150-160个。化学农药是通过组合化学的方法来得到的，合成速度快但不易得到先导化合物，而微生物源农药是从天然产物中分离纯化出来的，可以直接作用于病虫害防治，也可以作为先导化合物合成新的农药。这些农药既可以保留原有生物活性物质的低毒、低残留等优点，同时克服了某些天然产物的稳定性差、活性不高等不足，使得生物活性物质的潜力得到充分挖掘。生物农药与化学农药两者相比，其有效成分的来源、エ业化生产途径、防病机理和作用方式都不尽相同，利用微生物及其代谢产物来防治危害农作物的病虫害及诱导促进作物生长，可以通过以菌治虫、以菌治菌、以菌除草等方式进行。这些微生物农药包括真菌、细菌、放线菌或其代谢物，例如苏云金杆菌、白僵菌、核多角体病毒、井R霉素、C型肉毒梭菌外毒素等。化学农药主要通过人工合成，包括有机磷、有机氯、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类，其毒性强，作用专ー性強。相较而言，生物农药更适应于有害生物综合治理的应用。因此本试验将从生物防治方面进行探索，筛选防效促生效果好的拮抗菌株，并对其抗病毒机理进行研究，为将来通过常规和分子生物学途径，利用这些拮抗细菌及其拮抗物质防治烟草普通花叶病毒病提供研究基础和实验材料。在植物的根围、叶围及其它微生态区系中，拮抗细菌广泛存在，且由于培养方便、生长周期短、作为新拮抗菌来源具有很大的开发潜力。国内对烟草普通花叶病毒病生物防治已有报道，但多数仅限于对生防菌的筛选和盆栽试验阶段，而对其产生抗菌物质的提取、生理生化特性和生防菌的防病机制等诸多方面国内尚未深入研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术所存在的上述不足，而提供一株烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌菌株，用于烟草普通花叶病毒病的生物防治，为烟草普通花叶病毒病的防治提供了新的微生物资源。其技术方案为本专利技术所述菌株是从青岛即墨试验农场、烟田土样中分离获得的，鉴定A3菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。该菌株的培养条件为28°C,普通牛肉汁培养基， PH7.0。菌株代号为A3，该菌株于2011年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No. 5231。本专利技术所述方法包括以下步骤I)将活性菌株A3接种到NA培养基上纯化，挑取单菌落保存于试管中的培养基斜面上，挑取培养基平板上生长良好的单一菌落接种到液体NB培养基中，于28°C，180rpm/min,培养 64h ；2)用O. 5mol/L的草酸将发酵液pH值调至2. O 3. 0，静置2h，出现蛋清状沉淀，用灭菌纱布过滤，弃去渣滓；3)用3倍于发酵液体积的乙酸乙酯反复萃取三次，分别收集有机相和水相，在旋转蒸发仪上减压浓缩至浸膏，有机相浓缩温度控本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)菌株，菌株代号为A3，该菌株于2011年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No. 5231。2.权利要求I所述菌株A3在防治烟草普通花叶病毒中的应用。3.权利要求I所述菌株A3与吐温-20%混合后在防治烟草普通花叶病毒中的应用。4.一种用权利要求I所述的烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌菌株得到得到活性小分子物质的混合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 1)将活性菌株A3接种到NA培养基上纯化，挑取单菌落保存于试管中的培养基斜面上，挑取培养基平板上生长良好的单ー菌落接种到液体NB培养基中，于28°C，180rpm/min，培养 64h ； 2)用O...
【专利技术属性】
技术研发人员：王凤龙，孙惠青，钱玉梅，杨金广，郭丛，陈德鑫，申莉莉，王新伟，战徊旭，王秀芳，陈丹，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所，
类型：发明
国别省市：
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