本发明专利技术涉及一种大叶吊兰苷A的提纯方法，本发明专利技术的大叶吊兰苷A的提取方法首先采用水提、酶解，再用大孔树脂吸附，然后用反相色谱柱进行高效液相制备，以甲醇∶水或乙腈：水为流动相，同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A。本发明专利技术方法制备大叶吊兰苷A，药材提取完全，产率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药化学领域，涉及一种大叶吊兰苷A的提纯方法。
技术介绍
大叶吊兰苷A (Chloromaloside A)分子式为C5tlH8tlO23，分子量为1049. 17，为白色晶体，mp. 278-280°C。主要存在于百合科植物大叶吊兰及衫" malayense Ridley根莖中，亦在鹭鸶草major Hemsl.根中分离得到。药理研究发现，大叶吊兰苷可体外抑制人精子活力。目前对大叶吊兰研究较少，尚未检索到关于制备大叶吊兰苷A的方法报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种大叶吊兰苷A的提纯方法，可有效制备高纯度大叶吊兰苷A。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案 一种大叶吊兰苷A的提纯方法，其特征在于包括以下步骤 (I)将大叶吊兰根茎粉碎，水提取3次，每次加水量为药材量的4-6倍，第一次提取2h，第二次、第三次各lh，将提取液浓缩至药材重的3-4倍；(2)将浓缩液调pH至3. 3-3. 7，加入酶溶液浸泡，并充分搅拌，过滤，滤液即为上柱液；(3)将上柱液进大孔吸附树脂柱，用10%-90%乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部位，浓缩后分别进行薄层层析，用留体皂苷专用显色剂显色，收集合并含有留体皂苷的部位；(4)将留体皂苷部位用反相色谱柱进行高效液相制备，以体积40-60:60-40的甲醇水或25-50:75-50的乙腈水为流动相，同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A。所述步骤(2)中加入的酶为纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶或淀粉酶，加入量为药材重量的O. 02-0. 05%。。所述步骤(3)中的大孔树脂为弱极性或非极性大孔树脂。在步骤(4)后将大叶吊兰苷A用乙醇或乙酸乙酯重结晶，得到大叶吊兰苷白色晶体。本专利技术采用酶解除去了大量杂质，降低大量泡沫物质的影响，解决了过滤难的问题，纯化了大孔吸附树脂的进料液，延长了大孔树脂的使用寿命。使用本专利技术方法制备大叶吊兰苷A，药材提取完全，产率高，可达到含量测定用中药化学对照品的要求。下面将结合具体实施方式进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施例方式实施例I :将大叶吊兰根茎2kg粉碎后投入提取罐，用水加热提取3次，每次加水8kg，提取时间分别为2h、lh、lh，将三次提取液合并后浓缩至药材量的3倍，即6L，将浓缩液冷却至40°C，加柠檬酸调pH至3. 6，再加入药材量O. 025%的纤维素酶溶液，酶解lh，升温灭酶，抽滤，所得滤液即为上柱液。将上柱液进已经预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部位，浓缩后分别进行薄层层析，用留体皂苷专用显色剂显色，收集合并含有留体皂苷的部位；将留体皂苷的部位用微孔滤膜过滤后进行高效液相制备分离，色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件流动相为甲醇水=43:57 ;流速25ml/min，同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A收集液，将大叶吊兰苷A收集液浓缩挥干溶剂，加乙醇溶解，重结晶，过滤，干燥得到白色大叶吊兰苷A晶体，纯度为98. 7%。实施例2: 将大叶吊兰根茎2kg粉碎后投入提取罐，用水加热提取3次，每次加水10kg，提取时间分别为2h、lh、lh，将三次提取液合并后浓缩至药材量的4倍，即8L，将浓缩液冷却至40°C，加枸橼酸调pH至3. 3，再加入药材量O. 034%的果胶酶溶液，酶解lh，升温灭酶，抽滤，所得滤液即为上柱液。将上柱液进已经预处理好的DlOl大孔吸附树脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部位，浓缩后分别进行薄层层析，用留体皂苷专用显色剂显色，收集合并含有留体皂苷的部位；将留体皂苷的部位用微孔滤膜过滤后进行高效液相制备分离，色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件流动相为乙腈水=37:63 ;流速40ml/min,同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A收集液，将大叶吊兰苷A收集液浓缩挥干溶剂，加乙醇溶解，重结晶，过滤，干燥得到白色大叶吊兰苷A晶体，纯度为98. 2%。实施例3: 将大叶吊兰根茎2kg粉碎后投入提取罐，用水加热提取3次，每次加水12kg，提取时间分别为2h、lh、lh，将三次提取液合并后浓缩至药材量的3. 5倍，即7L，将浓缩液冷却至400C，加柠檬酸调pH至3. 7，再加入药材量O. 03%的半纤维素酶溶液，酶解lh，升温灭酶，抽滤，所得滤液即为上柱液。将上柱液进已经预处理好的HPD100大孔吸附树脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部位，浓缩后分别进行薄层层析，用留体皂苷专用显色剂显色，收集合并含有留体皂苷的部位；将留体皂苷的部位用微孔滤膜过滤后进行高效液相制备分离，色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件流动相为甲醇7jC =55:45 ;流速30ml/min，同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A收集液，将大叶吊兰苷A收集液浓缩挥干溶剂，加乙酸乙酯溶解，重结晶，过滤，干燥得到白色大叶吊兰苷A晶体，纯度为98. 4%。实施例4: 将大叶吊兰根茎2kg粉碎后投入提取罐，用水加热提取3次，每次加水8kg，提取时间分别为2h、lh、lh，将三次提取液合并后浓缩至药材量的4倍，即8L，将浓缩液冷却至40°C，力口枸橼酸调pH至3. 4，再加入药材量O. 05%的淀粉酶溶液，酶解lh，升温灭酶，抽滤，所得滤液即为上柱液。将上柱液进已经预处理好的DlOl大孔吸附树脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部位，浓缩后分别进行薄层层析，用留体皂苷专用显色剂显色，收集合并含有留体皂苷的部位；将留体皂苷的部位用微孔滤膜过滤后进行高效液相制备分离，色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件流动相为乙腈冰=31:69 ;流速20ml/min,同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A收集液，将大 叶吊兰苷A收集液浓缩挥干溶剂，加こ酸こ酯溶解，重结晶，过滤，干燥得到白色大叶吊兰苷A晶体，纯度为98. 8%。权利要求1.一种大叶吊兰苷A的提纯方法，其特征在于包括以下步骤(1)将大叶吊兰根茎粉碎，水提取3次，每次加水量为药材量的4-6倍，第一次提取2h，第二次、第三次各lh，将提取液浓缩至药材重的3-4倍；(2)将浓缩液调pH至3. 3-3. 7，加入酶溶液浸泡，并充分搅拌，过滤，滤液即为上柱液；(3)将上柱液进大孔吸附树脂柱，用10%-90%乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部位，浓缩后分别进行薄层层析，用留体皂苷专用显色剂显色，收集合并含有留体皂苷的部位；(4)将留体皂苷部位用反相色谱柱进行高效液相制备，以体积40-60:60-40的甲醇水或25-50:75-50的乙腈水为流动相，同步采用紫外检测器监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到大叶吊兰苷A。2.如权利要求I所述的一种大叶吊兰苷A的提纯方法，其特征在于所述步骤(2)中加入的酶为纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶或淀粉酶，加入量为药材重量的O. 02-0. 05%。3.如权利要求I所述的一种大叶吊兰苷A的提纯方法，其特征在于所述步骤(3)中的大孔树脂为弱极性或非本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，郭琴，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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