本发明专利技术涉及从紫花碎米荠中提取的黄酮苷及其制备方法，可有效解决从紫花碎米荠中提取黄酮苷的问题，该黄酮苷为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式是C43H48O24，提取方法是，将干燥紫花碎米荠地上部分用丙酮组织破碎提取，提取液减压回收，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂柱，依次用水、甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集洗脱液，减压回收，真空干燥后得到干粉，用水溶解，离心，上清液上凝胶柱，用水冲柱，经薄层色谱检识合并含有目标成分的流份，得到组分A，分离纯化，即得，本发明专利技术化合物促进脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，制备方法先进、科学，操作方便，可靠性强。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，特别是一种。
技术介绍
紫花碎米莽是碎米莽属(Cardamine)植物紫花碎米莽(Cardamine tangutorum)的干燥地上部分，分布于河北、山西、陕西、甘肃、青海、四川、云南等省。生于海拔2100-4400米的高山山沟草地及林下阴湿处。紫花碎米荠在民间以全草食用；亦供药用，其味辛，性温，具有清热利湿，平肝潜阳的功效，可用于治疗黄水疮；花治筋骨疼痛。紫花碎米荠在我国分布广泛，资源十分丰富，并且具有显著和多样的临床作用和药理活性。紫花碎米荠为何具有药用价值，其活性成分如何提取，至今未见有公开报导。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种，可有效解决从紫花碎米荠中提取黄酮苷，并通过采用MTT法检测该化合物对Con A刺激后的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖的影响，以观察该化合物的免疫调节作用，为进一步的研究奠定基础的问题。本专利技术解决的技术方案是，该提取的黄酮苷为山柰酚-3-0--β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式是C43H48O24，结构式如图I所示；其比旋光度为D2°-17(c，0. 12，MeOH)，其制备方法是将干燥紫花碎米荠地上部分，室温(15-25°C)下在闪式提取器中用紫花碎米荠重量10-12倍的体积浓度为50%丙酮组织破碎提取三次，每次15-20分钟，合并提取液，于45°C减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂(Diaion HP-20)柱，用水冲柱至洗脱液流出无色、用体积浓度10%甲醇冲柱至洗脱液流出无色、用体积浓度20%甲醇冲柱至洗脱液流出无色、最后用体积浓度30%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集30%甲醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，用水充分溶解，离心，上清液上凝胶(Toyopearl HW-40C)柱，用水冲柱，经薄层色谱检识合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶ToyopearlHW-40C 柱、凝胶 Sephadex LH-20 柱、娃胶柱、MCI Gel CHP-20 柱,反复分离纯化，得到黄色固体，然后，采用MTT法检测该化合物对Con A刺激后的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖活性的影响，发现具有较强的促增殖作用。本专利技术是一种从紫花碎米荠中提取的化合物，具有免疫调节作用，其制备方法新颖独特，先进、科学，操作方便，经对河南、河北、山西的紫花碎米荠样品按上述方法经反复应用制备，并通过MTT法检测促增殖活性，均取得了相同或相近似的结果，表明本专利技术可靠性强，有效解决了对各地从紫花碎米荠中提取山柰酚-3-0--β-D-吡喃葡萄糖苷，为紫花碎米荠的应用提供了有利的技术手段和药用价值，经济和社会效益巨大。附图说明图I为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的结构图。图2为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的主要HMBC相关图。图3为山柰酚-3-0--i3-D-吡喃葡萄糖苷的1H-NMR图谱。图4为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的13C-NMR图谱。 图5为山柰酚-3-0-_ β -D-吡喃葡萄糖苷的HSQC图谱。图6为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的HMBC图谱。图7为山柰酚-3-0--β-D-吡喃葡萄糖苷的1H-1H COSY图谱。图8为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的TOCSY图谱。图9为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的IR图谱。图10为山柰酚-3-0--β -D-吡喃葡萄糖苷的HR-ESI-MS图谱。图11为山柰酚-3-0-_β -D-吡喃葡萄糖苷对ConA刺激的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖的影响。具体实施例方式以下结合实施例及相关试验对本专利技术的具体实施方式作详细说明。本专利技术所用的紫花碎米莽经鉴定为十字花科(Cruciferae)碎米莽属(Cardamine)植物紫花碎米莽(Cardamine tangutorum)。柱层析填料 Diaion HP-20 > MCIGel CHP-20为日本三菱化学公司生产，Toyopearl HW-40为日本TOSOH公司生产，S^hadexLH-20为Parmacia Biotech公司生产，柱层析所用硅胶H由青岛海洋化工厂生产(160-200目)，薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产(颗粒范围10-40 μ m)，以0. 5%CMC-Na制板，阴干，105°C活化 0. 5h。RPMI-1640 培养基购自 Gibco Invitrogen 公司，MTT、DMS0 为 Amresco公司产品。核磁共振由DPX-400 (400MHz for IH-NMR and 100MHz for 13C-NMR)核磁共振仪测定，TMS为内标，由郑州大学分析测试中心代测。质谱仪型号为APEX II，红外分光光度计型号为Shimadzu FTIR-8201，均由河南省科学院化学研究所代测。N-1000型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，SHB-95B型循环水式多用真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，DFZ-3型真空干燥箱(上海医用恒温设备厂)，闪式提取器由北京金鼐科技发展有限公司提供。二氧化碳培养箱(REVCO)，倒置显微镜(NIKON ECLIPSE TS100)，超净工作台(江苏苏净集团)，酶标仪(BIO-RAD Model 680)，微量加样器(Nichipet EXPLUS)。实验动物清洁级Balb/c小鼠，雄性，8_10周龄，体重(20±2) g。实施例1将河南产干燥紫花碎米荠地上部分2. 5kg，室温20°C下在闪式提取器中用紫花碎米荠重量10倍的体积浓度为50%丙酮组织破碎提取三次，每次18分钟，合并提取液，于45°C减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂Diaion HP-20柱，用水冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度10%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度20%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，最后用体积浓度30%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集30%甲醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉8. 9g，用水充分溶解，离心，上清液上凝胶Toyopearl HW-40C柱，用水冲柱，经薄层色谱检识合并含有目标成分的流份，得到组分A,组分A依次通过凝胶Toyopearl HW-40C柱、凝胶Sephadex LH-20柱、娃胶柱、MCI Gel CHP-20柱，最后反复分离纯化，得到山柰酚-3-0--i3-D-吡喃葡萄糖苷llmg。取实施例I所得的化合物，经试验证明，可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，有关试验情况如下称取0. Img该化合物，力卩入RPMI-1640完全培养液(FBS : 10%，5. 5 X lCr3mg · ml/1 β - 二巯基乙醇，100U · ml/1青霉素和100 μ g · ml/1链霉素)超声溶解，0. 22 μ m孔径滤膜过滤除菌，4°C冰箱保存备用；各组均分为空白组；ConA(终浓度为5μ g · mL-1)刺激组；低、中、高剂量组；配成的药物终浓度为0. UUlOyg-mL—1，将Balb/c小鼠颈椎脱白致死，无菌取出胸腺、脾脏分别放入盛有含青霉素(IOOU^mL-1)和链霉素(本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯卫生，张秋博，郑晓珂，王小兰，董诚明，
申请(专利权)人：河南中医学院，
类型：发明
国别省市：
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