一种预防和治疗肿瘤的效应细胞组合及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种预防和治疗肿瘤的效应细胞组合，包括依次以细胞悬液形式注射入肿瘤患者体内的CIK细胞和MSC细胞，所述CIK细胞和MSC是从非肿瘤患者的外源健康人的外周血中提取制备而来。本发明专利技术还公开了一种该效应细胞组合的制备方法，包括血液单核细胞采集、CIK细胞培养和MSC培养。本发明专利技术的方案采用非肿瘤患者的外源健康人的外周血中提取制备而来的CIK细胞和MSC细胞，打破了自体CIK细胞的治疗常规，提高肿瘤生物治疗，特别是CIK细胞治疗的临床疗效，同时解决了移植物抗宿主反应（GVHD）的难题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药生物
，特别涉及。
技术介绍
恶性肿瘤是严重危害人类健康的常见病和多发病，世界恶性肿瘤的发病率逐年迅速增高，2005年国家卫生部公布癌症的死亡人数已跃居中国城乡居民的十大死因之首，而肿瘤的治疗却任重而道远。美国政府把“向癌症宣战”作为基本国策之一，15年中投资25亿美元。但是肿瘤的防治结果并不令人满意，20年后，美国总统委员会总结“向癌症宣战”的结果是肿瘤的5年生存率提高了 4%，但是肿瘤的发病率却提高了 7%。所以恶性肿瘤的临床治疗仍是世界各国医务工作者的艰巨任务。国内外均以手术、放疗和化疗作为肿瘤治疗的主要手段，但总体疗效不尽人意。临床上70%的恶性肿瘤患者是死于肿瘤的复发和转移。要彻底清除三大常规治疗后机体内残存的少量肿瘤细胞，才是防止肿瘤复发和转移的关键。要彻底清除体内残留的肿瘤细胞，只有靠机体的免疫系统，也就是说要消灭掉体内最后一个肿瘤细胞要靠病人自己。近年来，肿瘤生物治疗已成为肿瘤综合治疗中第四种模式，而且越来越受到人们的重视。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer, CIK)已成为恶性肿瘤过继免疫治疗的研究热点。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预防和治疗肿瘤的效应细胞组合，其特征在于，所述效应细胞组合包括依次以细胞悬液形式注射入肿瘤患者体内的CIK细胞和MSC细胞，所述CIK细胞和MSC是从非肿瘤患者的外源健康人的外周血中提取制备而来。2.如权利要求I所述的效应细胞组合，其特征在于，所述CIK细胞是通过以下方法获取的 (1)血液单核细胞采集通过血细胞分离机采集健康供者外周血单个核细胞，用淋巴细胞分离液分离出PBMC，收集血浆56°C水浴灭活，离心后备用； (2)CIK细胞培养用无血清培养基调细胞浓度为4-6XIO6 / ml，加入RetroNectin和 ⑶3抗体事先包被的T75培养瓶；置于37°C、5% C02培养箱培养；4天后细胞转移至细胞培养袋，同时加入IFN-y 1000U/ml, IL-2 500_1000U/ml，自体血浆3%，继续培养，至12-14天收集CIK细胞； 其中，CIK细胞培养到12-13天时，检测细胞数量，流式细胞仪细胞表型；CD3和CD56双阳性细胞达25%以上，台盼蓝染色细胞活度90%以上，红白血病癌细胞K562为靶细胞，杀伤能力达80%以上，细菌和热源检测合格后方可使用。3.如权利要求I所述的效应细胞组合，其特征在于，所述MSC细胞是通过以下方法获取的 (1)血液单核细胞采集通过血细胞分离机采集健康供者外周血单个核细胞，用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离出PBMC，收集血浆56°C水浴灭活，离心后备用； (2)MSC培养取部分上述分离的PBMC加入IXPBS的离心管中洗涤一次，1500rpm离心5分钟；离心好后尽量去除上清，加入间质干细胞完全培养基，按照I XlO6 / cm2的密度接种于75cm 2培养瓶中进行原代培养，培养瓶中加入20ml培养液，原代三天之后换液，吸去旧的间质干细胞的完全培养液，加入足量的新鲜的预热至37°C的间质干细胞完全培养液，此后每三天如上换液，至12-...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁岩超，
申请(专利权)人：祁岩超，
类型：发明
国别省市：