本发明专利技术公开了一种测定脱水蒜制品中致病微生物菌落总数的方法。该方法包括如下操作步骤：取蒜粉样品加入灭菌稀释液均质，经带滤膜的均质袋过滤；吸取清液，分装于2只离心管中；加入聚丙烯酰胺阳离子树脂作助凝剂，离心分离，除去上清液，在沉淀物中加无菌蒸馏水混匀，按国标GB4789.2-2010对沉淀物中的细菌量进行计数。本发明专利技术检测快速、步骤简单，能在3个小时准确检测出脱水大蒜一类含抑菌物质样品中的菌落总数。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物检测
，具体涉及一种采用高速离心法分离和。
技术介绍
食品卫生与安全问题同每个人的身体健康息息相关，历来被世界各国政府和主流传媒所关注。近年来随着人们对食品安全的关注度越来越高，特别是在近年来我国食品安全事故频发，与中国出口产品有关的食品质量安全事件时常见诸报端的大背景下，进口国对来自中国的食品检测越来越严格。我国是世界上最大的大蒜(Allium sativum L.)及其制品生产与出口国，已成为我国首位出口换汇蔬菜，其出口逐年增加。其中脱水蒜制品就是安徽省传统大宗出口农产品，产品主要出口日韩、欧美市场，出口量一直稳居全国前列。加强出口脱水蒜制品卫生检验监管不仅关系到单一产品出口，更是保护农产品全行业贸易正常进行。然而脱水蒜制品至今没有相关微生物检验标准出台，长期借用食品微生物GB4789 系列标准检验，但因为脱水蒜制品具有独特的产品特性，实际检测中暴露出大量问题，表现出明显的不适宜。没有合适检验标准对确保产品质量，消费者安全、保障农产品出口贸易顺畅构成很大隐患。因此开展脱水蒜制品的安全卫生检测技术的研发对于确保农产品贸易安全和消费者食用安全都有着重要的意义。脱水蒜制品主要为蒜粉、蒜粒和蒜片，是上好的调味品和保健食品原料，该广品选用优质大蒜，经过去皮、清洗、烘干、精选、磨粉、包装等多道工序加工而成。水分含量低于 6%，不添加任何食品添加剂，不添加防腐剂。研究表明作为保健食品，对于消化不良、感冒、 呼吸道感染、消化道溃疡、血脂偏高、血管硬化、患癌症的成年人和中老年人心脏病、心脑血管疾病者；免疫力低下者均有辅助治疗的效果。蒜粉具有广谱抗菌和抑菌、杀菌作用，可有效抑制大肠杆菌、沙门氏等有害菌类的生长、繁殖，对畜禽因革兰氏阴性及阳性菌感染引起的呼吸道、消化道疾病及其并发症显著疗效。大蒜素可有效刺激动物体内产生香味的氨基酸的形成，增加肉蛋中的香味成分，使肉蛋鲜味更美。加入饲料中可提高畜禽及鱼虾抗病能力，加快生长速度。有清瘟、解毒、活血化瘀的功能，可显著降低饲料中有效物质的毒性。脱水蒜制品蒜味浓烈、纯正、不产生抗药性、无毒无害、体内无残留。正是因为脱水蒜制品的优良品性，被越来越广泛的运用和消费，加强对其卫生安全研究才显得越发重要。脱水蒜制品的生产要经过多个环节，其中很多环节都存在微生物污染与繁殖的可能。那么为什么现行GB4789系列标准不适合脱水蒜制品的安全卫生检测呢？因为大蒜中含有一种天然植物抑菌剂大蒜素，大蒜素是大蒜瓣和蒜精油中含硫化合物的总称，具有不同程度的杀(抑)菌作用，被誉为天然杀菌剂，有报道称它杀菌的能力几乎是青霉素的100倍。 1/80000的大蒜素能抑制或杀灭葡萄球菌、链球菌、伤寒、痢疾杆菌等。大蒜鳞茎提取液对青霉、根霉、曲霉、木霉有明显的抑制作用
技术实现思路
为了确保农产品贸易安全和消费者食用安全，本专利技术提供一种快速、有效地分离和。本专利技术的具体操作步骤如下(1)取蒜粉25g，加入225mL灭菌稀释液混合均匀，得混合液；所述灭菌稀释液的配置称取34. Og的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用浓度Imol/ L的175mL氢氧化钠溶液调节pH值为7. 2，用蒸馏水稀释至IOOOmL定容，得母液；取I. 25mL 母液，用蒸馏水稀释至IOOOmL,温度121°C高压灭菌15分钟，得灭菌稀释液；(2)将混合液经带滤膜的均质袋过滤，所述滤膜孔径为330μ m、直径50mm，吸取清液， 将I. 5mL清液分装于2只2mL离心管中，每只离心管中装有O. 75mL清液；(3)在装有清液的每只离心管中加入聚丙烯酰胺阳离子树脂的助凝剂，清液中助凝剂的浓度为O. Ippm ;温度4°C、转速20000转/分钟条件下离心40分钟，除去上清液，在沉淀物中加入I. 5mL无菌蒸馏水混匀，得到被测液，按国标GB 4789. 2-2010对被测液进行细菌量计数。本专利技术的有益技术效果离心分离法很好地解决了脱水蒜制品中大蒜素抑菌作用对菌落总数计数的影响，计数与标准方法相比更准确、有效。本专利技术检测快速、步骤简单，能在3个小时准确检测出脱水大蒜一类含抑菌物质样品中的菌落总数。具体实施例方式下面结合实施例，对本专利技术作进一步地说明。实施例I I材料与仪器 I. I材料沙门氏菌菌种(5^7^9/76^773)由北京兰波瑞公司提供,各种培养基由北京路桥公司提供，Ciba系列食用级聚丙烯酰胺阳离子树脂，样品来自安徽东乾食品有限公司送检样品留样；I.2仪器台式高速冷冻离心机(BECKMAN 64R)，立式高速冷冻离心机(BECKMAN J30I )，微量加样器0. 5 ul IOul, 10 ul IOOul,高压灭菌锅。2除菌率实验称取25g脱水蒜制品样品(辐照灭菌)，人工定量添加一个麦氏单位(3. 5 X IO8个/g) 沙门氏菌菌种，加入225mL灭菌稀释液均质，带滤膜的均质袋过滤，滤膜孔径为330 μ m、直径50mm ;吸取清液，将I. 5mL清液分装于2只2mL离心管中，每只离心管中装有O. 75mL清液；在装有清液的每只离心管中加入少量聚丙烯酰胺阳离子树脂作助凝剂，清液中助凝剂的浓度为O. Ippm ;温度4°C、转速20000转/分钟条件下离心分离，吸取上清液，按国标GB 4789. 2-2010测定上清液中残留细菌数。灭菌稀释液的配置称取34. Og的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用浓度Imol/ L的175mL氢氧化钠溶液调节pH值为7. 2，用蒸馏水稀释至IOOOmL定容，得母液；取I. 25mL 母液，用蒸馏水稀释至IOOOmL,温度121°C高压灭菌15分钟，得灭菌稀释液。表I高速离心法除菌率实验结果离心时间(min.)清液细菌量除菌率O3. 5X107/204. 3X10598. 77403. 6X10598. 97602. IXlO599. 4808. 9X10499. 751003. 8X10499. 89由上表I中高速离心分离细菌效果实验结果可以看出，样液中菌体经过20000转/分钟、40分钟以上高速离心后，99%以上的菌体可以从样液分离。可用于菌落总数的测定，完全可以满足食品卫生检测的需求。实施例2I材料与仪器与实施例I相同 2高速离心法用于菌落总数测定与传统方法对比取蒜粉样品25g，加入225mL灭菌稀释液，均质后经带滤膜的均质袋过滤，吸取清液，分装I. 5mL于2只2mL离心管中；在装有清液的每只离心管中加入少量聚丙烯酰胺阳离子树脂作为助凝剂，清液中助凝剂的浓度为O. Ippm ;温度4°C、转速20000转/分钟条件下离心 40分钟，除去上清液，在沉淀物中加I. 5mL无菌蒸馏水混匀，按国标GB 4789. 2-2010测定沉淀物中的细菌量，同时使用标准方法对照；其它条件同实施例I。表2高速离心法用于菌落总数测定与传统方法结果比对隱度高逢离心法(cfu/g)稱訪法(cfu/g)IO'5多不可计多不可It1315多不可计多不可it354110—5137142ioe99I cr14121513由上表2中可见，从实际运用该方法与标准方法比对，同时测定实际脱水蒜制品中菌落总数的结果可以看出，在1000倍稀释以下，蒜粉样液中的抑菌成分的明显干扰了标准方法的可靠使用，国标方法本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：余晓峰，郑海松，宗凯，孙娟娟，陈雪娇，李云飞，姚剑，严轶，
申请(专利权)人：安徽出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：
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