β2-微球蛋白检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种β2-微球蛋白检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2，试剂R1包括缓冲液、防腐剂、稳定剂、电解质、表面活性剂，其余为纯化水，试剂R2包括用β2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒、缓冲液、防腐剂、稳定剂，其余为纯化水。β2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒采用定向偶联的方法，制备步骤包括：聚苯乙烯胶乳颗粒的激活；β2-微球蛋白抗体的氧化；β2-微球蛋白抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的偶联。该试剂盒灵敏度高、特异性好、准确性好、抗干扰能力强、生产成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学免疫学领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步地，本专利技术涉及一种 β 2-微球蛋白检测试剂盒。
技术介绍
β 2-微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11. 8KD，它是细胞表面人类淋巴细胞抗原(HLA)的β链(轻链)部分(为一条单链多肽)，广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中，含量很低。正常人β2-微球蛋白的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，β 2-微球蛋白可以从肾小球自由滤过， 99. 9%在近端肾小管吸收，因此测定血液β 2-微球蛋白可以作为反映肾小球滤过率的指标。目前常用的测定β2-微球蛋白的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法、酶联免疫法、胶乳增强免疫透射比浊法。其中应用最多的就是胶乳增强免疫透射比浊法，其基本原理是将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。目前将 β 2-微球蛋白抗体包被到胶乳颗粒上的常用方法是物理吸附法，该方法稳定性较差，抗体容易从胶乳颗粒上脱落下来；而且容易受类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，IgM、 IgG型RF或者嗜异性抗体可以与包被在胶乳上的抗体的Fe段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假性升高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述
技术介绍
的不足，提供一种灵敏度高、特异性好、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的β 2-微球蛋白检测试剂盒。本专利技术所采用的技术方案为一种β 2-微球蛋白检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述试剂Rl包括缓冲液、防腐剂、稳定剂、电解质、表面活性剂，其余为纯化水；所述试剂R2包括用β2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒、缓冲液、防腐剂、稳定剂，其余为纯化水。本专利技术上述试剂盒中试剂Rl与试剂R2的体积比为4 : I。本专利技术试剂I和试剂2中的缓冲液包括但不限于PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、 2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液、氯化铵缓冲液以及其他具有相似性质的缓冲液中的一种或几种。试剂Rl所用的缓冲液与试剂R2所用的缓冲液只要为上面的缓冲液中的一种任意搭配均可。本专利技术试剂I和试剂2中的防腐剂包括但不限于山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠、Proclin 300以及其他具有相似性质的防腐剂中的一种或几种。本专利技术试剂I和试剂2中的稳定剂包括但不限于聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA以及其他具有相似性质的稳定剂中的一种或者几种。本专利技术试剂I中的电解质包括但不限于氯化钠、氯化钾、氯化钙以及其他具有相似性质的电解质中的一种或几种。本专利技术试剂I中的表面活性剂包括但不限于TWEEN系列表面活性剂、SPAN系列表面活性剂、TRITON系列表面活性剂以及其他具有相似性质的表面活性剂中的一种或几种。本专利技术所述的聚苯乙烯胶乳颗粒(该聚苯乙烯胶乳颗粒为市售常规产品)，其平均粒径在O. 01 I. 5 μ m之间，粒径小于O. 01 μ m时，胶乳颗粒聚集产生的光密度变化太小，结果很难达到试验敏感度要求，在制备试剂的时候，需要花费过多的离心时间，延长了试剂生产的时间，增加了试剂成本且不利于重复性。而粒径大于I. 5μπι的胶乳颗粒在测量高浓度检测物时，其聚集产生的光密度变化超过了检测限，结果很难获得对应于分析物浓度的光密度变化，而且颗粒太大会加速自聚集，导致分散性降低。胶乳颗粒粒径随着试验方法和设备的改变而改变，因此所选择的颗粒粒径最好是介于O. 05 O. 5 μ m之间。本专利技术所述抗体包括但不限于多克隆抗体(羊、兔肩)及单克隆抗体。本专利技术β 2-微球蛋白检测试剂盒除包括试剂I与试剂2之外，还包括β 2-微球蛋白校准品；进一步的，所述的β 2-微球蛋白校准品中β2-微球蛋白含量为O 18mg/L。本专利技术所述的试剂R2是用β 2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适当的缓冲液中组成，该试剂R2制备步骤包括(I)聚苯乙烯胶乳颗粒的激活在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺(EDAC)，混合反应后加入己二酸二酰肼，继续混合反应，得到激活的聚苯乙烯胶乳颗粒；(2) β 2-微球蛋白抗体的氧化用高碘酸钠将β 2-微球蛋白抗体非结合活性区域 Fe端羟基氧化成醛基；(3) β 2-微球蛋白抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的偶联将步骤(I)激活的聚苯乙烯胶乳颗粒和步骤(2)氧化的β2-微球蛋白抗体混合反应，待反应结束后，再加入葡萄糖封闭聚苯乙烯胶乳微球上未反应的基团，得到偶联β 2-微球蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳微球。本专利技术上述制备方法各个步骤中物料配比为步骤⑴中乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺聚苯乙烯胶乳颗粒=0.2 I 100 (重量比)；己二酸二酰肼聚苯乙烯胶乳颗粒=20 50 100(重量比)；步骤⑵中高碘酸钠β 2-微球蛋白抗体=I 2(重量比)；步骤(3)中抗体激活的聚苯乙烯胶乳颗粒=10 20 100(重量比)，葡萄糖 激活的聚苯乙烯胶乳颗粒=25 50 100。本专利技术所用检测β 2-微球蛋白的方法为胶乳增强免疫透射比浊法，其原理是包被了抗原或抗体的胶乳微粒，与标本中相应抗体或抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物形成所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。在本专利技术中，血清中的β 2-微球蛋白与结合在聚苯乙烯胶乳颗粒表面的抗人β2-微球蛋白抗体结合，产生抗原抗体反应，使聚苯乙烯胶乳颗粒形成聚集；在546nm, 700nm波长处测定吸光度，对照标准曲线可求出β2-微球蛋白的含量。本专利技术的优点I.本专利技术通过改进胶乳颗粒包被方法，使该试剂盒灵敏度高、特异性好、准确性高、抗干扰能力强、生产成本低。2.本专利技术试剂盒中的试剂R2制备是一种抗原抗体反应试验方法，特别之处在于，本专利技术采用定向偶联法将β2-微球蛋白抗体包被到聚苯乙烯胶乳颗粒上；本专利技术将 β 2-微球蛋白抗体的非结合活性区域的Fe端定向偶联到聚苯乙烯胶乳颗粒上，不会发生类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰所导致的检测结果假阳性或假性升高，该方法定向偶联的β 2-微球蛋白抗体偶联到聚苯乙烯胶乳颗粒上后，其抗原结合位点指向流动相， 抗体偶联部位为Fe片段，因此不会发生抗体结合力损失的情况，保持了抗体的活力，大大减少了抗体的用量，降低了生产成本。3.本专利技术试剂盒中的R2制备采用定向化学偶联法，得到的致敏胶乳颗粒稳定性较好，抗体不会从胶乳颗粒上脱落，而且由于化学偶联过程中，Fe段发生了结构上的改变， 因此不会受到类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，大大提升了检测结果的准确性和可信性。具体实施例方式下面通过实施例进一步详细描述本专利技术，但本专利技术不仅仅局限于以下实施例。实施例I β 2-微球蛋白检测试剂盒的制备本专利技术的试剂盒涉及试剂的主要原材料如下I. β 2-微球蛋白抗体采用间接ELISA法测定效价为I : 100000。2.胶乳本专利技术仅示例性的采用直径为200 300nm带羧基基团的聚苯乙烯胶乳颗粒进行实验。本实施例的主要试剂的配制如下试剂Rl :含 I. O % PEG6000(聚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹炳德，邹继华，石春林，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：