一种试纸条及其制备方法与在尿微量白蛋白和β2微球蛋白联合检测中的应用技术

本发明专利技术涉及生物化学检测技术领域，尤其涉及一种试纸条及其制备方法与在尿微量白蛋白和β2微球蛋白联合检测中的应用。本发明专利技术提供的试纸条，在底板上依次设置有的样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸；其中，金标垫、层析膜上包被有特定含量的抗体或抗原，从而使得良好的控制试纸条的检测限恰为白蛋白和β2微球蛋白的cut off值。并且，本发明专利技术提供的试纸条采用的抗体浓度使得白蛋白与β2微球蛋白的检测能够同时进行而不互相干扰。因此，采用本发明专利技术的试纸条能够实现对尿液样本的直接检测，节省了前处理的步骤，且其检测更加快速、可靠。实验表明，本发明专利技术提供的试纸条准确率较高，且该试纸条的制备方法十分简单。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物化学检测
，尤其涉及一种试纸条及其制备方法与在尿微量白蛋白和β2微球蛋白联合检测中的应用。
技术介绍
尿微量白蛋白(MAU)是指在尿中出现微量的白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，人体代谢正常情况下，尿中的白蛋白极少，每升尿液中白蛋白不超过20μg(<20μg/mL)。当肾脏血管发生病变，改变了肾脏滤过蛋白质(尤其是白蛋白)的功能，尿液中白蛋白的量就会升高至20μg/mL以上。因此，临床上通常应用尿微量白蛋白来监测肾病的发生，并将其作为检测糖尿病、高血压、心血管疾病、肾病血管损伤的重要指标。β2微球蛋白(β2-MG)是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，由99个氨基酸组成的单链多肽。β2-MG广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。正常人β2-MG的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，β2-MG可以从肾小球自由滤过，99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏；故而正常情况下，β2-MG的排出是很微量的，通常不会超过0.2μg/mL。当近曲小管轻度受损时，尿β2-MG明显增加。糖尿病、高血压病人早期尿β2-MG与其肾功能损害程度显著相关。可见，准确的检测尿液中白蛋白和β2-MG的含量对多种疾病的早期诊断、早期治疗有重要的参考价值和临床意义。且如能实现对尿微量白蛋白和尿β2微球蛋白联合检测，则能够提高糖尿病早期肾功能损害的检出率，可以有效的为临床诊断高血压和糖尿病引起的早期肾功能损伤提供重要的参考依据。目前，市售β2-MG的检测试纸的检测原理多采用双抗体夹心法。在对其它待测物检测时，双抗体夹心法的高灵敏性能够对检测结果起到更积极意义。但是，实验表明，采用双抗体夹心法检测，其对白蛋白的最低检测限可达200ng/mL，对β2-MG的检测限为2ng/ml。该检测限比MAU和β2-MG在正常人体内的含量还要低上百倍。试纸条判别待测物含量是否超过正常值是通过是否产生条带实现的，产生条带则提示待测物含量超过阈值。然而，双抗体夹心法过低的检测限却给MAU和β2-MG的检测带来了困扰。检测限过低，导致该试纸在使用前，需要采用特定的稀释液对尿液样品进行稀释，否则健康人的检测结果也会呈现阳性。而稀释必须按照特定的倍数进行，不仅增加了操作的复杂程度，稀释过程中操作误差也容易对检测结果产生影响。如果能够提供适宜检测限的试纸条，则可更有效的为临床诊断高血压和糖尿病引起的早期肾功能损伤提供重要的参考依据。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种试纸条及其制备方法与在尿微量白蛋白和β2微球蛋白联合检测中的应用。本专利技术提供的试纸条检测限合理。本专利技术提供的试纸条，在底板上依次设置有的样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸；金标垫担载胶体金标记的白蛋白抗体和胶体金标记的β2微球蛋白抗体；胶体金标记的白蛋白抗体的量以白蛋白抗体的量计为0.33μg/cm2；胶体金标记的β2微球蛋白抗体的量以β2微球蛋白抗体的量计为0.11μg/cm2；层析膜设置T1线和T2线，T1线划有白蛋白；T2线划有β2微球蛋白；白蛋白的量以白蛋白计为3.5μg/cm；β2微球蛋白的量以β2微球蛋白计为1.17μg/cm。C线为质控线，本专利技术提供的试纸条的层析膜上还设置C线；所述C线划有羊抗鼠。层析膜上延层析方向依次设置T2线、T1线、C线。本专利技术中，底板的材质为PVC；样品垫的材质为玻璃纤维；金标垫的材质为玻璃纤维；层析膜的材质为硝酸纤维素。本专利技术提供的试纸条的宽度为3.5mm。本专利技术提供的试纸条的原理为通过竞争法对尿液中白蛋白和β2微球蛋白同时进行检测。通过调整试纸条上负载的抗体、抗原和样品垫上样品稀释液的浓度，从而良好的控制试纸条的检测限恰为白蛋白和β2微球蛋白的cutoff值。进而实现对尿液样品直接检测而不需进行特殊的前处理(稀释或浓缩)。并且，本专利技术提供的试纸条采用的抗体浓度使得白蛋白与β2微球蛋白的检测能够同时进行而不互相干扰。因此，本专利技术提供的试纸条能够提高对白蛋白和β2微球蛋白检测的准确性，更有效的判断尿液样本内的白蛋白和β2微球蛋白是否超过正常含量。其操作简便、反应快速、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。本专利技术所述试纸条的制备方法，包括：步骤1：以含有酪蛋白的PB溶液处理样品垫；步骤2：将胶体金标记的白蛋白抗体和胶体金标记的β2微球蛋白抗体铺至金标垫；步骤3：将白蛋白和β2微球蛋白分别划线至层析膜；步骤4：步骤1～3获得的所述样品垫、金标垫、层析膜依次铺设至底板上，再铺设吸水纸后，经切割制得试纸条；胶体金标记的白蛋白抗体的量以白蛋白抗体的量计为0.33μg/cm2；胶体金标记的β2微球蛋白抗体的量以β2微球蛋白抗体的量计为0.11μg/cm2；白蛋白的量为3.5μg/cm；β2微球蛋白的量为1.17μg/cm。本专利技术中，步骤1包括：将样品稀释液铺至样品垫；样品稀释液为包含酪蛋白的PB溶液，其中酪蛋白的质量分数为0.5％，PB的浓度为0.02mol/L；样品稀释液的用量为5mL/90cm2。所述样品稀释液的pH值为7.4。PB溶液为磷酸盐缓冲液，由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠与水配制而成。所述铺至样品垫具体为，使样品垫与样品稀释液接触反应5min，沥干后，37℃反应16h。本专利技术中，步骤2包括：步骤A：将白蛋白以含有海藻糖的PB溶液溶解至白蛋白的浓度为3mg/ml；制得A液；步骤B：将β2微球蛋白以含有海藻糖的PB溶液溶解至β2微球蛋白的浓度为1mg/ml；制得B液；步骤C：将所述A液、B液划线至层析膜；所述A液的使用量为35μL/30cm；所述B液的使用量为35μL/30cm。所述含有海藻糖的PB溶液中PB的浓度为0.01mol/L；海藻糖的质量分数为3％。所述划至为采用划膜仪进行划膜后42℃反应2h。步骤2还包括划C线的步骤，具体为：将羊抗鼠以含有海藻糖的PB溶液溶解至羊抗鼠的浓度为1mg/ml；以35μL/30cm的用量划线至层析膜；所述含有海藻糖的PB溶液中PB的浓度为0.01mol/L；海藻糖的质量分数为3％。本专利技术中，步骤3包括：步骤a：制备胶体金溶液；步骤b：将所述胶体金溶液、白蛋白抗体、β2微球蛋白抗体与碳酸钾溶液混合后静置20min；制得溶液a；步骤c：所述溶液a与稳定剂混合，静置10min后，经离心、弃除上清液后，与悬浮液混合，制得溶液b；步骤d：将所述溶液b铺至金标膜上，37℃反应4h。所述溶液a中白蛋白抗体的浓度为5μg/mL；β2微球蛋白抗体的浓度为3μg/mL；所述悬浮液与溶液a的体积比为1:1；所述溶液b铺至金标膜的用量为5mL/90cm2。胶体金溶液的制备采用柠檬酸三钠还原法。具体的，胶体金溶液的制备方法为：将15mL～20mL质量分数为1％的柠檬酸三钠水溶液与1L水混合煮沸2min后，加入10mL质量分数为2％～4％的氯金酸水溶液，加热沸腾反应10min，冷却后定容至1L。所述碳酸钾溶液中碳酸钾的浓度为0.2mol/L。所述胶体金溶液与碳酸钾溶液的体积比为5:0.03。步骤c中所述稳定剂为PEG20000溶液，其中PEG20000的质量分数为1％。稳定剂与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试纸条，其特征在于，包括底板和依次设置在所述底板上的样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸；所述金标垫担载有胶体金标记的白蛋白抗体和胶体金标记的β2微球蛋白抗体；所述胶体金标记的白蛋白抗体的量以白蛋白抗体的量计为0.33μg/cm2；所述胶体金标记的β2微球蛋白抗体的量以β2微球蛋白抗体的量计为0.11μg/cm2；所述层析膜上设置有T1线和T2线，所述T1线划有白蛋白；所述T2线划有β2微球蛋白；所述白蛋白的量为3.5μg/cm；所述β2微球蛋白的量为1.17μg/cm。

【技术特征摘要】
1.一种试纸条，其特征在于，包括底板和依次设置在所述底板上的样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸；所述金标垫担载有胶体金标记的白蛋白抗体和胶体金标记的β2微球蛋白抗体；所述胶体金标记的白蛋白抗体的量以白蛋白抗体的量计为0.33μg/cm2；所述胶体金标记的β2微球蛋白抗体的量以β2微球蛋白抗体的量计为0.11μg/cm2；所述层析膜上设置有T1线和T2线，所述T1线划有白蛋白；所述T2线划有β2微球蛋白；所述白蛋白的量为3.5μg/cm；所述β2微球蛋白的量为1.17μg/cm。2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述层析膜上还设置有C线；所述C线划有羊抗鼠。3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述底板的材质为PVC；所述样品垫的材质为玻璃纤维；所述金标垫的材质为玻璃纤维；所述层析膜的材质为硝酸纤维素。4.权利要求1～3任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于，包括：步骤1：以含有酪蛋白的PB溶液处理样品垫；步骤2：将胶体金标记的白蛋白抗体和胶体金标记的β2微球蛋白抗体铺至金标垫；步骤3：将白蛋白和β2微球蛋白分别划线至层析膜；步骤4：步骤1～3获得的所述样品垫、金标垫、层析膜依次铺设至底板上，再铺设吸水纸后，经切割制得试纸条；所述胶体金标记的白蛋白抗体的量以白蛋白抗体的量计为0.33μg/cm2；所述胶体金标记的β2微球蛋白抗体的量以β2微球蛋白抗体的量计为0.11μg/cm2；所述白蛋白的量为3.5μg/cm；所述β2微球蛋白的量为1.17μg/cm。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1包括：将样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，齐晶，
申请(专利权)人：三诺生物传感股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43