白菜TT8基因家族及其应用制造技术

本发明专利技术公开了白菜TT8基因家族，包括BrTT8-1基因(全长cDNA序列如SEQ?ID?No.2所示)和BrTT8-2基因(全长cDNA序列如SEQ?ID?No.4所示)二个成员，该基因家族可应用于芸薹属作物种皮颜色和种子大小等种子性状的分子育种。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程
，特别涉及甘蓝型油菜(Brassica napus)及其亲本物种白菜(Brassica rapa)和甘蓝(Brassica οleracea) ΤΤ8 (TRANSPARENT TESTA 8，透明种皮8 ；又称bHLH42，BASIC HELIX-LOOP-HELIX 42，碱性螺旋-环-螺旋42)基因家族及其应用。
技术介绍
十字花科(Brassicaceae)的芸薹属(Brassica)包括很多油料作物、蔬菜和观赏植物品种，为人类提供营养价值丰富的食用油、蔬菜和观赏植物，并为畜牧业提供饲料，具有重要的经济价值。在芸薹属物种中，异源四倍体物种甘蓝型油菜是由2个二倍体物种白菜和甘蓝通过种间杂交后再加倍而形成的。甘蓝型油菜是世界第二大油料作物，在全世界广泛种植，栽培面积和产量仅次于大豆。白菜和甘蓝也是重要的油料、蔬菜和观赏作物。对甘蓝型油菜及其亲本物种白菜和甘蓝功能基因的比较基因组学研究将为揭示它们之间的遗传进化关系提供理论基础，并为芸薹属作物的性状改良提供应用基础。籽粒颜色是甘蓝型油菜的重要性状之一。甘蓝型油菜黄籽品系具有种皮薄、皮壳率低、粗纤维含量低、含油量高、饼粕蛋白含量高等优点，与黑籽品系相比，饼粕的经济价值和油的品质都有所提高。虽然白菜和甘蓝中均存在表型稳定的天然黄籽基因型，但自然界中不存在天然的甘蓝型油菜黄籽基因型。已有的甘蓝型油菜黄籽材料主要通过远缘杂交等方式而创造，存在黄籽率和黄籽度不高，表型不稳定，易受环境影响而变异，选育效率低，育种周期长，负相关性状难以克服等缺点，远远不能满足生产要求。因此，获得稳定遗传的甘蓝型油菜黄籽性状成为甘蓝型油菜育种的重要目标。长期以来，全世界众多研究者对该性状进行了广泛研究，但到目前为止对于黄籽性状形成的分子机理仍不清楚，更没有通过转基因分子育种创造黄籽性状的任何报道。类黄酮是植物的重要次生代谢物质，具有多种生物学功能，其中花青素苷(anthocyanin, AN)、原花青素(proanthocyanidin，PA)和黄酮醇是十字花科等植物器官表面着色的重要成分。芸薹属和拟南芥(Arabidopsis thaliana)同属十字花科，具有较近的亲缘关系。在拟南芥种皮中，原花青素主要积累在内种皮和有颜色的合点区域，是种皮色素的核心成分。拟南芥TT8 (AtTT8)基因编码一个bHLH型正调控转录因子(AtbHLH42)，在积累有花青素苷和原花青素的细胞中被诱导表达，TT2、TT8和TTGl形成一个转录因子复合物，调控黄酮合成途径的“晚期”结构基因如DFR、BAN等的表达，从而调控原花青素、花青素苷、种皮粘液的积累。拟南芥《8突变体的种子显示透明种皮即黄籽性状。因此，在芸薹属中对TT8基因进行同源克隆和功能鉴定，是筛选甘蓝型油菜黄籽位点的重要途径，也可用于芸薹属物种中与原花青素、花青素苷、种皮粘液相关性状的分子育种。芸薹属和拟南芥起源于同一祖先，约在1700 1800万年前发生分离，芸薹族植物发生了基因组水平的三倍化，即芸薹属基本种白菜(AA组，5^Mbp)、甘蓝(CC组，696Mbp)和黑芥(BB组，632Mbp)等的基因组约相当于拟南芥基因组(157Mbp)的3倍，而甘蓝型油菜(AACC组，1132Mbp)的基因组相当于甘蓝和白菜两个基因组之和，约相当于拟南芥基因组的6倍，也就是说，在拟南芥中为单拷贝的基因在甘蓝和白菜中可能分别有3个对应的拷贝，而在甘蓝型油菜中可能有6个拷贝。目前，TT8基因在甘蓝型油菜、白菜、甘蓝等芸薹属物种中的成员数、蛋白特征、进化关系、表达的组织特异性、黄籽等性状的关系以及转基因分子育种等都未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供甘蓝型油菜及其亲本物种白菜和甘蓝TT8基因家族。为达到上述目的，本专利技术采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术，分别克隆了甘蓝型油菜及其亲本物种白菜和甘蓝TT8基因家族成员的全长cDNA和对应的基因组序列，并对其进行了系统分析。结果显示所述白菜TT8 (BrTTO)基因家族包括以下2个成员BrTT8_l基因和BrTT8_2基因；所述BrTT8-l基因的全长cDNA序列如SEQ ID No. 2所示，BrTT8_2基因的全长cDNA序列如 SEQ ID No. 4 所示；所述甘蓝TT8(BoTT8)基因家族包括以下2个成员BoTT8_l基因和BoTT8_2基因；所述BoTT8-l基因的全长cDNA序列如SEQ ID No. 6所示，BoTT8_2基因的全长cDNA序列如 SEQ ID No. 8 所示；所述甘蓝型油菜ΤΤ8(&ιΤΤ8)基因家族包括以下2个成员ΒηΤΤ8-1基因和ΒηΤΤ8-2基因；所述ΒηΤΤ8-1基因的全长cDNA序列如SEQ ID No. 10所示，BnTT8_2基因的全长cDNA序列如SEQ ID No. 12所示。进一步，所述BrTT8-l基因的基因组序列如SEQ ID No. 1所示，BrTT8_2基因的基因组序列如SEQ ID No. 3所示；所述BoTT8-l基因的基因组序列如SEQ ID No. 5所示，BoTT8-2基因的基因组序列如SEQ ID No. 7所示；所述&ιΤΤ8_1基因的基因组序列如SEQID No. 9所示，ΒηΤΤ8-2基因的基因组序列如SEQ IDNo. 11所示。上述3个物种的6条ΤΤ8基因之间具有很高的同源性，基因组序列的一致性为69. 7 99. 9%，mRNA —致性为85. 8% 99. 8%，编码区的一致性为93. 2% 99. 9%，其中BnTT8-l基因与ΒοΤΤ8-1基因的一致性高达99. 9%，ΒηΤΤ8_2基因与BrTT8_l基因的一致性高达99. 1%。它们与AtTTS基因也具有很高的同源性，基因组序列的一致性为44. 2 52. 4%,mRNA的一致性为78. 0% 82. 1%，编码区的一致性为80. 83. 6%。6个TT8基因编码的蛋白之间具有很高的同源性，一致性为89. 6% 100%，相似性为90. 6% 100%，其中&1TT8-1蛋白与BoTT8-l蛋白的相似性和一致性均为99. 6%，BnTT8_2蛋白与BrTT8-l蛋白的相似性和一致性均为100%。它们与AtTT8蛋白也具有很高的同源性，一致性为71. 5 % 77. 2 %，相似性为77. 4 % 84. 1 %。系统进化分析表明，AtTT8先与BrTT8_2聚在一起，BnTT8-2先与BrTT8-l聚在一起，然后这两个小类聚在一起；BnTT8_l与ΒοΤΤ8_1聚在一起，ΒοΤΤ8-2虽然单独，但与ΒηΤΤ8-1与ΒοΤΤ8_1也很近。从基因结构、蛋白结构、核酸序列同源性、氨基酸序列同源性、系统进化等方面均表明，BnTTS-I基因起源于BoTTS-I基因，BnTT8-2基因起源于BrTT8-l基因，且这6个TT8基因都是AtTT8基因的垂直同源基因。TT8基因家族主要在白菜、甘蓝、甘蓝型油菜的生殖器官中表达，以发育中的种子表达最高，并随着种子的发育进程而逐渐下降。此外，TT8基因家族在白菜和甘蓝型油菜的黑、黄籽材料间的总体表达存在着较明显的差异，且不同的基因成员表现出不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白菜TT8基因家族，其特征在于，包括以下2个成员BrTT8-l基因和BrTT8-2基因；所述BrTT8-l基因的全长cDNA序列如SEQ ID No. 2所示，BrTT8_2基因的全长cDNA序列如 SEQ ID No. 4 所示。2.根据权利要求1所述的白菜TT8基因家族，其特征在于，所述BrTTS-I基因的基因组序列如SEQ ID No. 1所示，BrTT8-2基因的基因组序列如SEQ ID No. 3所示。3.含有权利要求1或2所述的白菜TT8基因家族中任一种或多种基因或基因保守片段的重组表达载体。4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于所述重组表达载体为正义植物表达载体，是将白菜TT8...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴友荣，殷家明，赵文军，谢伶俐，肖霞，李加纳，林呐，张瑞熙，许本波，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：