本发明专利技术涉及免疫学测定分析领域，具体涉及采用吖啶酯标记技术结合通用型磁颗粒进行免疫学检测的方法，以及用本方法制备的免疫学测定(定量\定性)试剂盒。本发明专利技术以吖啶酯或吖啶磺酰胺类物质标记检测抗原或抗体，以生物素标记捕获抗原或抗体，结合通用的(链酶)亲和素标记磁颗粒，进行生物分子的免疫学测定，该方法灵敏度高、检测范围宽、易于实现自动化，在免疫学检测领域应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学测定分析领域，具体涉及采用吖啶酯标记技术结合通用型磁颗粒进行免疫学检测的方法，以及用本方法制备的免疫学测定(定量\定性)试剂盒。本专利技术结合了吖啶酯化学发光技术，生物素标记技术以及(链酶)亲和素偶联的通用磁颗粒技术。
技术介绍
目前常见的化学发光体系有多种，最主要的有HRP-鲁米诺系统(或异鲁米诺及其衍生物)，AP-螺旋金刚烷-1，2- 二氧乙烷及其衍生物系统，吖啶酯或吖啶磺酰胺系统， 以及电化学发光体系等；其它见诸文献资料但商品化应用尚未普遍推广的还有咪唑类化合物、葡萄糖氧化酶、芳香草酸酯、黄嘌呤类化合物等等。目前，目前相对成熟的商品化化学发光免疫分析试剂所采用的体系主要是前四种，而在这四种体系中，鲁米诺(或异鲁米诺及其衍生物)体系的灵敏度相对后三种低且稳定性差，后三种发光体系的灵敏度都很高。这其中吖啶酯(或吖啶磺酰胺)发光体系相对于其他体系而言具有其特殊的优点首先、对于发光标记物来说，吖啶酯或亚丁磺酰胺类物质的标记相对简单，且标记物发光稳定，试剂盒有效期长，成本相对也较低；且发光为闪光型，发光快速集中且强度大，方便实现快速检测，检测的灵敏度和精密度都很高，并且对于仪器的要求相对简单，便于实现全自动化操作；其次、对于发光体系来说，吖啶酯(或吖啶磺酰胺)相对于其他系统也是最为简单的，在碱性-过氧化氢溶液中就可以直接发光，不需要增强剂或催化剂；干扰因素少， 本底极低，信噪比很高。基于吖啶酯发光体系具有的这些优点，研制开发吖啶酯类化学发光免疫分析系列试剂盒及配套仪器，从理论与实际意义上讲是切实可行的，本专利技术即是利用吖啶酯((或吖啶磺酰胺)系统的这些优势进行免疫试剂盒的开发。生物素_(链酶)亲和素系统(biotin-(Strept)avidin system, BAS)因为一个 (链酶)亲和素分子可以结合四个生物素分子的特性而产生的多级信号放大作用，可以显著提高反应灵敏度，且因为生物素(链酶)亲和素系统所具有的良好适应性标记方法简单且对于不同环境的抗性极佳，一经问世，即受到广泛应用，但长期以来，多数文献及实际应用所涉及的都是生物(链酶)亲和素系统的信号放大，基本都在利用这一系统提高反应体系的灵敏度，却忽略了这一系统的另一大优势借助(链酶)亲和素和生物素之间的强亲和力，以(链酶)亲和素偶联其他诸如聚苯乙烯微孔板、纳米颗粒以及其他适合的载体物质作为通用载体，便可以很容易的连接任何被生物素化的分子，进而参与进一步的反应，这一应用并不以信号放大为目的，而是提供一种通用的载体，因此在规模化生产和自动化应用领域具有很好的应用前景。本专利技术即利用(链酶)亲和素偶联超顺磁颗粒形成一种通用的载体结构，进而用于结合不同的生物素化抗原或抗体，开发出检测不同生物大分子的试剂盒。超顺磁微粒用于免疫分析检测中是近几年的事情，作为一种固相分离方法，相较于传统的微孔板式免疫类反应可以大大提高分离的效率，并且非常便于实现自动化，磁颗粒相较于微孔板大大提高的表面积显著增加了有效的结合位点，结合免疫学液相反应，可以大大拓宽免疫学检测的线性范围，更好的适应临床需求，而磁颗粒良好的环境抗性使得它可以适应从酸到碱的苛刻反应环境，从而使得反应体系具有更大的包容性。但是长久以来，人们利用磁颗粒作为固相载体，只是简单的利用了磁颗粒易于分离的特点，多数应用都只是将不同分子直接标记在磁颗粒上进而参与免疫反应，每一个项目都需要将不同的抗原 /抗体标记于磁颗粒上，对于规模化生产来说，这将耗费很多的人力物力，会严重影响生产效率，本专利技术旨在创造性的将生物素(链酶)亲和素系统的通用性和超顺磁颗粒体系易于分离的特性完美结合在一起，将(链酶)亲和素同超顺磁颗粒偶联形成通用载体，可以结合任何生物素化的分子，并利用吖啶酯检测系统的高灵敏度和高稳定性，开发不同的免疫学检测试剂盒。本专利技术的新颖之处有(1)利用(链酶)亲和素偶联的超顺磁颗粒作为通用的固相载体，既保留了磁颗粒的易于分离特性，有保留了(链酶)亲和素良好的通用性；(2) 选择吖啶酯(或吖啶磺酰胺)作为发光体系，具有高灵敏度和高稳定性；(3)使用单克隆抗体或基因重组的抗原，大大提高了反应的特异性。以(链酶)亲和素偶联的超顺磁颗粒作为通用的固相载体，以不同生物素化抗原 /抗体分子作为捕获试剂，以吖啶酯(或吖啶磺酰胺)标记的抗原/抗体分子作为检测试剂，以NaOH-H2A作为底物系统来进行免疫学检测试剂盒的开发是一种先进而有效的方法， 必将极大的促进化学发光产业的应用与发展。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种以(链酶)亲和素偶联的超顺磁颗粒作为通用的固相载体，以不同生物素化抗原/抗体分子作为捕获试剂，以吖啶酯(或吖啶磺酰胺)标记的抗原 /抗体分子作为检测试剂，以NaOH-H2A作为底物系统的通用技术平台。本专利技术的另一目的是以此技术平台为基础开发不同的免疫学检测试剂盒。根据本专利技术的通用技术平台包含以下技术1)以亲和素偶联的超顺磁颗粒作为通用的固相载体技术；2)以不同生物素偶联不同捕获抗原/抗体分子各种活性基团的标记技术；3)以不同吖啶酯或吖啶磺酰胺联通过不同偶联剂偶联不同检测抗原/抗体分子各种活性基团的标记技术；4)以NaOH-H2A为基础、以酸和表面活性剂为增强剂的底物系统。具体的，本专利技术所述的(链酶)亲和素包括亲和素(Avidin)，链酶亲和素 (Streptavidin)以及中性亲和素(Neutravidin)以及其他可以结合生物素分子的类亲和素分子。本专利技术所述的超顺磁颗粒是指以四氧化三铁为内核、表面包裹带有诸如氨基 (NH2-)、羧基(-C00H)、羟基(-0H)、巯基(-SH)或其他易于偶联的活性基团的聚合物，颗粒直径在5nm-5 μ m的超顺磁颗粒。本专利技术所述的生物素是指以,权利要求1.，特征在于，所述方法融合了以下技术方法1)以亲和素偶联的超顺磁颗粒作为通用的固相载体技术；2)以不同生物素偶联不同捕获抗原/抗体分子各种活性基团的标记技术；3)以不同吖啶酯或吖啶磺酰胺联通过不同偶联剂偶联不同检测抗原/抗体分子各种活性基团的标记技术；4)以NaOH-H2A为基础、以酸和表面活性剂为增强剂的底物系统。2.根据权利要求1所述的，特征在于1)所述“亲和素”选自亲和素、链酶亲和素、中性亲和素或可以结合生物素分子的类亲和素分子；2)所述“超顺磁颗粒”为以四氧化三铁为内核、表面包裹带有各种活性基团的聚合物， 颗粒直径在50nm-5 μ m的超顺磁颗粒。3.根据权利要求1所述的一种用吖啶酯标记技术结合通用型磁颗粒进行免疫学检测 的方法，特征在于选用的生物素是指以4.根据权利要求ι 3任一所述的，特征在于，所述各种活性基团为氨基、羧基、羟基、巯基；所述不同偶联剂为二甲基亚胺、戊二醛、N, N' - 二环己基碳二亚胺、SATA, SMCC。5.根据权利要求1所述的，特征在于，所述底物系统为以NaOH-H2A为基础、以酸和表面活性剂作为增强剂进行不同配比组合的适用于吖啶酯或吖啶磺酰胺体系的发光底物系统。6.根据权利要求1或5所述的，特征在于，所述酸为硝酸、硫酸、盐酸；所述表面活性剂为SDS、Tween, Triton-X, Brij，CTAC。7.一种利用权利要求1 6任一项所述的方法进行检测的甲胎蛋白化学发光检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚洪涛，
申请(专利权)人：苏州长光华医生物试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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