一种真假蜂胶的鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种真假蜂胶的鉴别方法，所述鉴别方法是通过鉴定生物酶蛋白的含量来进行的，具体步骤包括：(1)配制蜂胶溶液；(2)配制显色液；(3)进行显色反应；(4)比色判定，所述鉴定方法是通过蛋白显色反应进行的。本方法是一种灵敏、简易、低成本、准确可信的真假蜂胶的鉴别方法，可以广泛推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，特别涉及一种利用生物酶蛋白显色法鉴别真假蜂胶的方法，属于生物医药领域。
技术介绍
蜂胶(Propolis)是蜜蜂将采自胶源植物的枝条、叶芽及愈伤组织的脂类分泌物与密封本身的上颚腺、蜡腺等的分泌物同少量花粉釀制后形成的粘性物质。味苦辛，性寒， 归脾、胃经，呈棕黄色或黄褐色固体块状，遇热变软具粘性，特有芳香气味。内服蜂胶能补虚弱、化浊脂、止消渴，用于体虚早衰、高脂血症、消渴；外用蜂胶能解毒消肿，用于皮肤皲裂、 烧烫伤。另外，蜂胶作为保健食品主要有免疫调节的功效，还可辅助抗氧化、调节血脂、血压、血糖、辅助保护胃粘膜等保健功能。但是，大约IOOg左右的蜂胶需要5万只蜜蜂采集1 年才能得到，非常珍贵，因此蜂胶有“紫黄金”之称。据中国蜂产品协会统计，我国蜂胶每年产量约300吨。然而据业内人士透露，我国蜂胶每年的实际销量却将近1000吨。那么这些多出来的蜂胶又是从哪冒出来的呢？中国蜂产品协会给出的结果是目前市场上有一半以上蜂胶产品是假的。假蜂胶一般是指杨树芽胶或掺了杨树芽胶的蜂胶。杨树芽胶是由人工采集杨树芽，经高温蒸煮熬出芽孢的胶状物质，再经乙醇浸泡提取和浓缩得到的黑色胶状物质。《蜂胶国家标准》明确规定，非蜜蜂采集，人工加工而成的任何树脂胶状物不能称之为蜂胶，更不允许添加到真正的蜂胶里面。与蜂胶相比，假蜂胶价格低廉，生理活性物质含量得不到保证，更无法保证安全。所以对真假蜂胶的辨别关乎人们的食品安全，非常重要。目前，现有的鉴别真假蜂胶的方法包括感官辨别和仪器检测。现有的感官辨别方法有很多，例如(1)外观在常温下，蜂胶是不透明的固体，块状蜂胶表面光滑或粗糙，折断面呈沙粒状，似大理石；国产蜂胶原料颜色呈棕褐色、棕红色或灰褐色，少数为黄绿色，也有黑色；(2) 口感嚼开尝，好的蜂胶在嚼服入口的那一瞬间， 虽然会感到辛辣，但是一下子便会自然消失，随之而来的是清爽的感觉；而劣质蜂胶在嚼开后则会让人有想呕吐的感觉。但是感官辨别方法主观性大，鉴定结果不可靠。现有的仪器检测主要有指纹图谱法、分光光度比色测定总黄酮评价法、有机酸含量判断法、GC-MS鉴定成分法、热分析法、肉桂酸与对-香豆酸以及黄酮类含量法、癸烯酸含量法、糖类成分法等。目前的仪器检测大都基于对蜂胶中黄酮的检测。所谓的“黄酮”，在 《蜂胶国家标准》中统称为“总黄酮”。按照国家标准规定，“总黄酮”含量是检验蜂胶的一项重要指标。蜂胶之所以有良好的保健效果是因为蜂胶中含有大量的黄酮类物质，但这种物质在人体内不能合成，只能从饮食中摄取。但是中央电视台在2010年11月份曝光了“销售假蜂胶”的节目，引起了社会轰动，其中提到，造假者为了产品能够检测合格，会偷偷往假蜂胶里加一些神秘的原料，其中一种黄色的粉末是槲皮素，此外还有芦丁。这是因为，槲皮素和芦丁都是人工提取的黄酮类物质，添加在“假蜂胶”中，用以提高其总黄酮的含量，以次充好，蒙混过关。由此看，仅仅对蜂胶中黄酮的量进行检测难以将假蜂胶鉴别出来。另外，仪器检测的方法虽然较感官辨别更客观，但是所用仪器设备昂贵，一个色谱动辄几十万甚至上百万，而且步骤复杂，人力、物力和时间成本非常昂贵。另外，浙江大学动物科学学院的章彬佳、胡福良(《蜂胶中酶活力的测定》，中国蜂业，2008年第59卷第6期)认为蜜蜂在采胶过程中可能添加进了腺体分泌物，尝试对蜂胶中的α-淀粉酶、蔗糖酶、蛋白酶的活力进行了研究，以期从特征组分酶的角度探讨蜂胶真伪鉴别问题。但实验结果表明不同地区的蜂胶及混合蜂胶反应时间小于45min时，检测不到三种酶；当混合蜂胶、新鲜蜂胶反应时间达池以上，未检测到α-淀粉酶，而在检测蔗糖酶和蛋白酶时测试管与阴性对照管出现明显色差，证明两种酶的存在，但活力较小，结果表明要从这3种酶活力的角度来鉴别蜂胶真伪有很大的难度。综上，目前急需开发一种灵敏、简易、低成本、准确可信的假蜂胶的鉴别方法，以保证市场的正常秩序和消费者的权益。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供。蜂胶的形成过程非常复杂，是蜜蜂以胶源植物的新生枝芽处采集的树脂类物质， 经过蜜蜂混入其上颚腺、蜡腺分泌物反复咀嚼加工而成的胶状物质。因此，蜂胶中除了含有黄酮类化合物之外，生物酶也是组成蜂胶广泛生物活性的重要物质。而假蜂胶是采用植物的枝条、叶芽及愈伤组织直接提炼熬制，没有经过与蜜蜂上颚腺、蜡腺等的分泌物同少量花粉酿制的生化过程。因此生物酶蛋白的存在与否，存量水平是区别真假蜂胶的特征指标。 本专利技术虽然以生物酶为检测目标物，但是并不检测其活性，而是以组成生物酶的蛋白质和多肽为目标物，即通过显色反应对蜂胶中的生物酶蛋白的含量进行显色从而鉴别蜂胶的真假。本专利技术通过如下技术方案实现，具体步骤包括(1)配制蜂胶溶液；⑵配制显色液；(3)进行显色反应；⑷比色判定。本专利技术的优选技术方案为，具体步骤包括(1)将蜂胶溶于水得到蜂胶的水溶液；(2)配制蛋白显色液；(3)将步骤(2)得到的显色液滴加到步骤(1)得到的蜂胶水溶液中，进行显色反应；(4)观察显色反应，比色判定蜂胶的真假。本专利技术的进一步优选技术方案为，具体步骤包括(1)配制蜂胶溶液准确称取1. 8000 2. 2000g的6_10批已知的真蜂胶和1_6批待测蜂胶，分别置于IOOml烧杯中，向各烧杯中准确加入去离子水10. 00ml，得到蜂胶和去离子水的混合液；将所得混合液超声溶解，过滤得到蜂胶的去离子水溶液；(2)配制显色液配置缩二脲显色液；配置茚三酮显色液；配置考马斯亮蓝G250 显色液；(3)进行显色反应吸取步骤(1)得到的蜂胶的去离子水溶液2. 0ml，移入纳氏比色管中，滴加步骤( 配置的显色液8-12滴，观测颜色变化；(4)比色判定a、缩二脲比色反应中，真蜂胶的显色为黄绿色，显色不是黄绿色判定为假蜂胶，显色与黄绿色深浅不一致的蜂胶判定为掺假蜂胶；b、茚三酮比色反应中，真蜂胶的显色为紫红色，显色不是紫红色判定为假蜂胶，显色与紫红色深浅不一致判定为掺假蜂胶；C、考马斯亮蓝G250比色反应中，真蜂胶的显色为墨绿色，显色不是墨绿色判定为假蜂胶，显色与墨绿色深浅不一致判定为掺假蜂胶。本专利技术采用超声的方法将蜂胶完全溶于水中，一方面能够缩短溶解的时间，另一方面因超声温度不高，避免了高温对蜂胶中酶活性的破坏。优选地，本专利技术所述的超声功率为 200W-500W，例如 200W、201W、230W、300W、400W、490W、498W、500W，优选 300W-400W, 特别优选:350W ；温度为 40 V -80 V，例如 40 °C >41 °C >45 °C >50 °C >70 °C >78 °C >80 V，优选 500C _70°C，特别优选 60°C;超声时间为 20-50min，例如 20min、21min、28min、35min、46min、 49min、50min，优选 20_40min，特别优选 30min。双缩脲反应(Biuret Reaction)是在强碱性溶液中，双缩脲(NH3C0NHC0NH3)与铜离子(Cu2+)形成有络合物的显色反应。所生产的显色溶液在MOnm波长处有最大吸收，是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应。双缩脲显色反应的所显颜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李育强，李楠，刘俊熙，沃丽娜，李强，黄冀东，何丽琼，
申请(专利权)人：北京知蜂堂蜂产品有限公司，
类型：发明
国别省市：