用于分枝杆菌的增强的检测的方法和培养基技术

本发明专利技术涉及用于分枝杆菌(Mycobacterium)生长的增强的生长和检测的改良的培养基和方法。本发明专利技术还涉及可用于分枝杆菌的增强的生长和检测的改良的分枝杆菌试剂系统或试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及用于分枝杆菌的增强的检测的培养基和方法。更具体地，本专利技术涉及针对用于改良或减少培养基中的分枝杆菌生长的检出时间(TTD)的培养基和方法的各种改良。
技术介绍
分枝杆菌是细菌的一个属，其特征为抗酸性的、非运动性的、革兰氏阳性杆菌。该属包括许多种，包括非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、鸟分枝杆菌(M. avium)、牛分枝杆菌(M. bovis)、牛分枝杆菌卡介苗(M. bovis-BCG)、龟分枝杆菌 (M. che lonae)、偶发分枝杆菌(M. fortuitum)、戈登分枝杆菌(M. gordonae)、胞内分枝杆菌(M. intracellulare)、堪萨斯分枝杆菌(M. kansasii)、麻风分枝杆菌(M. leprae)、 田鼠分枝杆菌(M. microti)、瘰疬分枝杆菌(M. scrofulaceum)、副结核分枝杆菌 (M. paratuberculosis)和结核分枝杆菌(M. tuberculosis)。分枝杆菌中的一些对于人和动物是致病的，尤其是结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和牛分枝杆菌。其他的分枝杆菌属物种 (mycobacterial species)通常不是致病的，但在诸如AIDS患者的无免疫应答的个体中导致机会感染。例如，在免疫系统受抑制或免疫系统受损的受试者中，堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌的感染可导致严重的肺病。事实上，自1953年首次报道后，所报道的分枝杆菌感染的病例在美国逐渐增加；这些病例中的许多与AIDS流行有关。在临床物种中检测分枝杆菌属物种作为临床诊断工具是重要的。历史上，认为结核分枝杆菌是该属中唯一的临床上重要的病原体。结核分枝杆菌的药物抗性菌株的发病率的增高已进一步地加强了检测该物种的需求。结核病表现出全球流行病的所有主要特性。目前，世界范围中超过三千五百万的个体罹患结核病，并导致每年四百万以上的死亡。 因此，结核病是全世界主要关心的问题。结核病可由结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌(分枝杆菌科的抗酸性的、革兰氏阳性的结核杆菌)导致。在印度的马德拉斯(Madras)和其他城市中还已从患者中分离了结核分枝杆菌的一些地方性致病菌株，其在某些方面不同于强毒株结核分枝杆菌H37Rv。然而，其他分枝杆菌属物种在临床上也是重要的。这些分枝杆菌属物种有时被称作“Μ0ΤΤ”，即非结核分枝杆菌，通常包括鸟分枝杆菌/胞内分枝杆菌复合物生物体(鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌，常称作MAIC)、戈登分枝杆菌、偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、产粘液分枝杆菌(M.mUCOgeniCUm)和临床样本中分枝杆菌属物种的混合物。例如，已显示通过鸟分枝杆菌复合物(MAC)细菌的快速生长机会感染频繁发生于AIDS个体和其他的无免疫应答的个体中。在此类感染的个体中，已发现每毫升痰沉淀物至少IO6MAC细胞。因此，可检测许多分枝杆菌属物种的检测测定在临床上是重要的。用于检测和鉴定样品中的分枝杆菌属物种的许多临床方法需要分析细菌的物理特性(例如，抗酸细菌染色法和杆菌的显微镜检测)、生理特性(例如，在确定的培养基上的生长)或生化特性(例如，膜脂组成)。这些方法需要待检测的样品中相对高浓度的细菌， 根据临床技术人员的经验和专业知识不同可能是主观的，且是费时的。因为分枝杆菌属物种通常难以在体外生长，且可能需要几周来达到有用的培养密度，所以这些方法还可能导致延迟的患者治疗和诊断完成之前与隔离感染的个体有关的花费。一般分枝杆菌是生长非常缓慢的苛求菌，尤其是结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。使这些生物体在常用的培养基上生长可能需要2至3周。已作出许多努力来寻找可增强生长并降低时间因素的培养基或物质。例如，美国专利第3，935，073号，其通过引用并入本文，公开了用于培养分枝杆菌的生长培养基，其含有指定水平的以下营养物7H9肉汤基质 0. 47% (含有获自 Cockeysville, Maryland 的 BBL Microbiology Systems 的磷酸钾和磷酸钠、谷氨酸钠、柠檬酸钠、硫酸铵、吡哆素、柠檬酸铁铵、硫酸镁、硫酸锌、硫酸铜、生物素和氯化钙)、牛血清白蛋白0. 5%、酪蛋白水解物0. 1%、过氧化氢酶96单位/小瓶、wC标记的底物2uCi/小瓶，去离子水平衡至anl，最终pH 6.8士0.1。白蛋白可用作用于分枝杆菌的生长的培养基中的解毒剂。白蛋白是发现于几乎每种动物中和许多植物组织中的单纯蛋白质。白蛋白的特征是在水中是可溶的并通过加热可凝固。它们含有碳、氢、氮、氧和硫。对于本专利技术的生长培养基，优选的白蛋白是牛血清白蛋白。白蛋白通常以按重量计约0. 至按重量计约10%的水平存在于生长培养基中。然而，因为缓慢的生长速率和对用于培养中分枝杆菌生长的富集培养基的需求， 从临床样品(例如，痰、肺液、组织或排泄物)中检测分枝杆菌仍代表着重要的生物学挑战。 该挑战中的一个因素起因于以下事实更快速地生长的细菌可能过度生长而抑制感兴趣的缓慢生长的分枝杆菌生物体，因此阻止了或显著阻碍了分枝杆菌检测。数十年以来，已开发了一些技术来使提交分枝杆菌鉴定的诊断样品脱去杂质(即，杀灭或抑制非分枝杆菌生物体)。这些技术杀灭可能的污染物或将其损害至其生长受到抑制或完全阻止的程度。常规地，分枝杆菌的实验室诊断基于抗酸细菌染色法和生物体的培养，然后进行生化测定。由于分枝杆菌的缓慢生长和长的增代时间，通过常规技术对分枝杆菌进行精确的实验室诊断可能需要长达6周。诸如BacT/ALERT 系统(bi0M6rieux，he.)的自动化培养系统可以将鉴定分枝杆菌的时间减少长达两周。本专利受让人，bioMerieux, Inc.提供了在BacT/ALERT 微生物检测系统中用作其基于培养的系统的塑料BacT/ALERT MP培养瓶，以用于检测除血液外的临床样品中的分枝杆菌。该BacT/ALERT 微生物检测系统利用了比色传感器和反射光以监测溶解于培养基中的二氧化碳(CO2)的存在和产生。如果检验样品中存在分枝杆菌，则二氧化碳随微生物代谢培养基中的底物而产生。当分枝杆菌的生长产生(X)2时，安装在每个培养瓶底部的透气性传感器的颜色从蓝绿色变为黄色。BacT/ALERT MP 试剂系统包括 BacT/ALERT MP 培养瓶、重构液体(RF)和 MB BacT 抗生素补充物(MAS)(下文称作常规或旧RF(或常规/旧RF)和常规或旧MAS (或常规/旧 MAS))。BacT/ALERT MP培养瓶是含有培养基的一些组分的塑料瓶。重构液体(RF)含有用于分枝杆菌生长的其余营养物并用来重构MAS。MAS是由阻抑来自痰样品的不想要的呼吸5道菌群的6种抗微生物剂组成的冻干的粉末。RF和MAS被包装为MAS试剂盒。尽管如此， 本领域中仍存在进一步减少精确诊断分枝杆菌所需时间的需求。因此，本专利技术的主要目的是提供用于可能存在于临床样品中的分枝杆菌属物种的增强的生长和检测的培养基和方法。本专利技术的另一个目的是提供适用于体外培养分枝杆菌的新颖的分枝杆菌培养基。本专利技术的又一个目的是提供根据前述目的的分枝杆菌培养基， 其中抑制了污染生物体的生长。因此，我们在本文描述了新型培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕拉姆帕尔·多尔，莱蒂西亚·巴顿，约安尼·波尔蒂拉，道格拉斯·劳沃恩，
申请(专利权)人：生物梅里埃有限公司，
类型：发明
国别省市：