侧向流动分析时的信号放大方法技术

在用于以高敏感方式探测分析物的侧向流动式分析的背景下，参考三明治分析方法，本发明专利技术涉及一种高敏感性侧向流动分析中的信号放大方法，其中所述信号是通过使用纳米粒子作为种子加入金属离子和还原剂引发反应而放大。本发明专利技术还涉及一种使用该方法的侧向流动分析装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及以高灵敏度检测分析物的侧向流动(Lateral flow)方式的分析过程中的信号放大方法及利用上述方法的侧向流动分析装置。尤其涉及在三明治(sandwich) 分析法中将金纳米粒子作为种子并添加金离子及还原剂进行反应，以放大信号的高灵敏度侧向流动分析中的信号放大方法及利用上述方法的侧向流动分析装置。
技术介绍
免疫色谱分析法是利用生物学物质或化学物质相互特异性附着的性质，在短时间内对分析物质进行定性及定量分析的方法，尤其是，三明治型免疫分析法是广为利用的方法，其在作为存在与否及浓度调查对象的分析物的第一抗原决定部位(印itope)的固体支撑体中，固定可特异性结合的第一抗体并在分析物的第二抗原决定部位利用特异性第二抗体。进行上述分析的装置有分析带或将上述分析带设置于壳体内部进行组装的分析装置。此时，若将包含分析物的流体施加于多孔性带的一面，则流体通过毛细管现象流动， 从而使分析对象物与包含标识体的抗体及固定抗体结合并完成分析。更具体而言，在侧向流动装置中，在可使液体试料通过毛细管现象流动的多孔薄膜上固定抗体，且在薄膜的上游一侧具有样品片和接合片，而在下游一侧连接有吸收片。上述样品片吸收包含分析物的液体试料并保证均勻的流动，而接合片上干燥有附着有可选择性地与分析物结合的抗体的标识体。在上述薄膜上，可与分析物现则性结合的固定抗体及可与固定于标志的抗体结合的物质固定在各个不同的位置，以形成检测部及控制部。可与上述分析物选择性结合的固定于薄膜的抗体和固定于标识体的抗体，可与分析物以三明治形式结合。上述吸收片由可吸收液体试料的物质构成。在上述免疫色谱分析装置中，若将包含分析物的液体试料滴加于样品片，则对分析物具有选择性的抗体_标识体和固定于薄膜的抗体以三明治形式结合，从而在固定上述抗体的薄膜位置形成可用肉眼观察的带。在现有技术中，有在第一接合体和抗原结合之后追加接合第二接合体，并最终与固定于薄膜的抗体结合的免疫色谱的信号放大方法，但因利用现有技术的免疫色谱法测量的灵敏度太低，因此，若需要更高灵敏度的试料的情况下，难以进行测量。另外，将金离子和还原剂进行反应生成金纳米粒子的方法，也可参考其他研究人员的报告(Angew.Chem. Int. Ed. 2002,41,2176-2179 ；Colloids and Surfaces B =Biointerfaces,2005,44,99-103) M 是，还未曾公开将金纳米粒子的生成用作免疫色谱传感器中的信号放大方法，尤其是，将包含金离子及还原剂的单独的分离片设置于免疫色谱中容易放大信号的技术。因此，本专利技术的专利技术人在侧向流动提供一种侧向流动分析中，在结合第一抗体或第一特异性结合物质结合于金纳米粒子的接合体和分析物，并使其通过三明治反应与固定的抗体或固定的特异性结合物质结合之后，后续使金离子及还原剂进行反应以还原金离子，并以上述金纳米粒子为种子形成金纳米粒子，以提高信号放大的灵敏度，从而完成本专利技术的方法及利用上述方法的侧向流动分析。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种侧向流动分析中的信号放大方法。本专利技术的另一目的在于，利用上述信号放大方法提供灵敏度得到提高的侧向流动分析装置。根据本 专利技术的一方面，提供侧向流动分析中的信号放大方法，包括如下步骤结合可特异性结合于分析物(analyte)的第一抗原决定部位或第一结合部位(配位体)的第一抗体或第一特异性结合物质结合于金纳米粒子的接合体和分析物；结合上述结合接合体的分析物和可特异性结合于上述分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位(配位体)的固定的第二抗体或第二特异性物质；及添加金离子及还原剂进行反应。根据本专利技术的另一方面，提供侧向流动分析装置，包括接合片，包括可特异性结合于分析物的第一抗原决定部位或第一结合部位(配位体)的第一抗体或第一特异性结合物质结合于金纳米粒子的接合体；薄膜，包括检测部，而固定有可特异性结合于结合上述接合体的分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位(配位体)的第二抗体或第二特异性物质；信号放大片，包含金离子及还原剂。根据本专利技术的信号放大方法，接合体与分析物一起固定于捕获抗体或特异性结合物质之后，后续添加包含金离子和还原剂的反应液进行反应，从而提供优秀的信号放大效果，而且，可利用上述放大方法制造灵敏度得到提高的侧向流动分析装置。附图说明图1为利用本专利技术的方法分析抗原时发生信号放大的过程的模式图，其中，1为第一抗体、2为金纳米粒子、3为接合体、4为分析物、5为第二抗体、6为还原金离子所形成金纳米粒子；图2(a)为本专利技术的免疫色谱装置内各片的概略模式图，其中，10为样品片、11为接合片、12为薄膜、13为检测部、14为控制部、15为吸收片、16为信号放大片；图2(b)为本专利技术的免疫色谱装置内安装各片之后的结构概略模式图；图2(c)为在未接触信号放大片16的状态下将本专利技术的免疫色谱组装于壳体内的示例剖面图；图3及图4为利用肌红蛋白实验随金离子还原的信号放大效果的结果示意图；图5及图6为利用肌红蛋白实验本专利技术的免疫色谱分析中的信号放大效果的结果示意图。具体实施例方式本专利技术的信号放大方法，在免疫色谱分析法中，由第一抗体及金纳米粒子构成的接合体与抗原结合之后，与作为固定的捕获抗体的第二抗体通过三明治反应结合，后续添加金离子及还原剂，其在侧向流动中，由第一抗体或第一特异性结合物质及金纳米粒子构成的接合体与分析物结合之后，结合于作为固定的捕获抗体的第二抗体或固定的第二特异性结合物质，后续添加金离子及还原剂进行反应，以金纳米粒子为种子在金纳米粒子周围还原Au(III)离子并显示很强的颜色，从而放大信号。本专利技术的信号放大方法可适用于侧向流动方式的分析法，而上述侧向流动方式包括垂直流动(vertical flow)或通过流通(flow though)方式。在上述垂直流动方式的情况下，试料垂直叠加于并列设置的多孔膜等。另外，上述侧向流动方式不限于抗体-抗原反应，本说明书中的“结合部位(配位体)”包括各种分析物中的蛋白质配位体(Ligand)、核酸(DNA或RAN)分析序列的结合部位等，而“特异性结合物质”是包括可选择性地、特异性地结合于上述结合部位的蛋白质、病毒噬菌体、核酸分子适体(Aptamer)、半抗原(hap ten ；DNP)等在内的生命体分子，而且，不限于上述记载事项。本说明书中的“接合体”由第一抗体或第一特异性结合物质及金纳米粒子构成，而上述接合体在与分析物结合之后，在分析带上流动的过程中固定于捕获第二抗体或第二特异性结合物质。若参考图1更详细了解本专利技术的侧向流动分析中的信号放大方法，则图1表示在侧向流动分析中利用抗原-抗体反应的情况。如图1所示，可特异性结合于分析物的第一抗原决定部位的第一抗体1结合于金纳米粒子2的接合体3与分析物4结合，而与上述接合体结合的分析物在分析带上流动的过程中，与可与上述分析物的第二抗原决定部位结合的固定的第二抗体5结合，而且，作为上述三明治结合的后续过程，使金离子与还原剂进行反应，从而通过以上述金纳米粒子2作为种子形成的金纳米粒子6，放大侧向流动分析中的信号。可用于本专利技术的上述金离子可用作金纳米粒子的前体，只要是可利用Au(III)离子的形式则没有特别的限制，而较佳地本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴柄宇，李星东，金珉坤，慎容范，张晋姬，申志勋，李硕起，
申请(专利权)人：英佛皮亚有限公司，
类型：发明
国别省市：