一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法。调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3~7%（g/ml）；牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理，然后按每10000ml牛胆汁接种100~500ml菌液的比例，将大肠杆菌、变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中，进行发酵处理；发酵完成后利用蒸汽对发酵液进行灭活处理。本方法可以大大提高了生产效率，满足大规模的工业化生产要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于制药
，涉及一种中药原料药的中间体的制造方法，尤其涉及。
技术介绍
牛胆结石即牛黄，是珍贵的中药材。它具有清心、豁痰、开窍、凉肝、息风、解毒等功效。上世纪70年代初，武汉同济医科大学附属同济医院肝胆外科蔡红娇医师在对人类胆结石形成的原因和机理进行研究，并获得成功的基础上，进一步用此原理进行牛胆囊胆汁内培育牛胆结石的研究，取得了成功并于1989年申报了 “一种人工体外制作牛胆结石的方法”的专利技术专利(申请号89100505. 6)。利用该方法制作的牛胆结石，限于当时的条件，其制成的牛胆结石的胆红素、胆酸等含量较低。2000年，由武汉大鹏药业有限公司组织科研人员在ZL89100505. 6专利技术专利的基础上，根据1990年版《中国药典》要求，研制了一种新的在牛体外制备牛胆结石的方法。该方法既适应规模化生产要求，生产出的产品能满足新的《中国药典》要求。并于2001年申报了专利(申请号01133550. 5)。该方法是在牛胆汁加入一定量的大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或其组合菌液，对牛胆汁进行细菌发酵处理。再利用发酵牛胆汁和澄清饱和钙盐溶液制取有效成份的沉淀物，然后根据药用要求加入适量的胆红素、胆酸、去氧胆酸和无机盐后，制作复合胆红素钙。再利用复合胆红素钙和发酵牛胆汁在体外培育牛胆结石。发酵牛胆汁为复合胆红素钙的主要组成成份，现有技术中，常规的生产方法是先调节牛胆汁中的牛磺酸含量，使其达到药用要求。然后将大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中，对牛胆汁进行细菌发酵处理。在应用上述技术生产的实践中，发现发酵前牛胆汁中一般含有杂菌，对后面的发酵有一定抑制作用。发酵完成时期发酵液内的营养成份已基本消耗完，菌体会消耗发酵产物产生废物，降低产物的产量。
技术实现思路
本专利技术是在ZL01133550. 5专利技术专利的基础上，提供一种新的利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法，可以大大提高了生产效率，满足大规模的工业化生产要求。本专利技术的技术方案如下1、调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3 7%(g/ml)，使其达到药用要求；2、牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理，然后按每10000ml牛胆汁接种10(T5(K)ml菌液的比例，将大肠杆菌、变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中，进行发酵处理；3、发酵完成后利用蒸汽对发酵液进行灭活处理。发酵前的灭菌过程中，将牛胆汁置于发酵罐，开蒸汽，升温至105-110°C灭菌15分钟后关蒸汽。开启冷却水降低温度，待温度降至室温时打开接种口盖，进行无菌处理后，按常规接种方法接种广5%的大肠杆菌、变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液到牛胆汁中，盖紧接种口盖。开启搅拌，调节蒸汽量，使料液温度稳定至37°C _45°C发酵。接种发酵前牛胆汁中含有杂菌，对后面发酵菌种的生长繁殖有一定抑制作用。对发酵前的牛胆汁进行灭菌处理可以有效杀灭牛胆汁和发酵罐中的杂菌，发酵母液得到了纯化，使发酵菌种在其中有足够的营养而旺盛生长，大大提高了生产效率。发酵48-72小时后，开搅拌，调节蒸汽量升温至105-110°c，温度维持15分钟，对发酵液进行灭活，开启冷却水降温，待温度降到室温后停止降温。发酵完成后菌体会产出废物，经过灭活处理后能防止菌体代谢的后期废物的产出，保证了产品质量。附图说明图1利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的工艺流程图。具体实施例方式实施例1(1)取出新鲜牛胆汁，调节牛磺酸含量使其达到3% (g/ml)，低温保存备用。(2)将牛胆汁置于发酵罐中，开启蒸汽使发酵罐内液温升至105°C后灭菌15分钟后关蒸汽。开启冷却水降低温度，待温度降到室温时打开接种口盖，进行无菌处理后，按每 10000ml牛胆汁接种IOOml菌体溶液的比例，将大肠杆菌和变形杆菌的组合菌液接种至牛胆汁中，盖紧接种口。开启搅拌，调节蒸汽量，使料液温度稳定至42°C发酵。(3 )发酵72小时后，开搅拌，调节蒸汽量升温至105 °C，温度维持105 °C，对发酵液进行灭菌15分钟，开启冷却水降低温度，待温度降到室温后停止降温。实施例2(1)取出新鲜牛胆汁，调节牛磺酸含量使其达到5% (g/ml)，低温保存备用。(2)将牛胆汁置于发酵罐中，开启蒸汽使发酵罐内液温升至108°C后灭菌15分钟后关蒸汽。开启冷却水降低温度，待温度降到室温时打开接种口盖，进行无菌处理后，按每 10000ml牛胆汁接种300ml菌体溶液的比例，将大肠杆菌接种至牛胆汁中，盖紧接种口。开启搅拌，调节蒸汽量，使料液温度稳定至40°C发酵。(3 )发酵60小时后，开搅拌，调节蒸汽量升温至108 °C，温度维持108 °C，对发酵液进行灭菌15分钟，开启冷却水降低温度，待温度降到室温后停止降温。实施例3(1)取出新鲜牛胆汁，调节牛磺酸含量使其达到7% (g/ml)，低温保存备用。(2)将牛胆汁置于发酵罐，开启蒸汽使发酵罐内液温升至110°C后灭菌15分钟后关蒸汽。开启冷却水降低温度，待温度降到室温时打开接种口盖，进行无菌处理后，按每 10000ml牛胆汁接种500ml菌体溶液的比例，将肠球菌接种至牛胆汁中，盖紧接种口。开启搅拌，调节蒸汽量，使料液温度稳定至37°C发酵。 (3)发酵48小时后，开搅拌，调节蒸汽量升温至110°C，温度维持110°C，对发酵液进行灭菌15分钟，开启冷却水降低温度，待温度降到室温后停止降温。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法，其特征在于，包括如下步骤1)调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3 7%(g/ml)；2)牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理，然后按每10000ml牛胆汁接种10(T500ml菌液的比例，将大肠杆菌、变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中，进行发酵处理；3)发酵完成后利用蒸汽对发酵液...

【专利技术属性】
技术研发人员：李幼鹤，蔡红娇，罗张龙，
申请(专利权)人：武汉健民大鹏药业有限公司，
类型：发明
国别省市：