本发明专利技术公开了一种可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白及制备方法及用途，该蛋白包括与癌细胞作用的肽和共刺激分子B7.2，所述与癌细胞作用的肽选自转化生长因子-α、表皮生长因子、血管内皮细胞生长因子、促性腺激素释放激素或促胃液素释放肽，本发明专利技术的融合蛋白具有癌靶向作用，一方面可分别与VEGFR、EGFR、GnRH-R、或GRP-R作用，另一方面又与T细胞上表达的相应受体CD28和CTLA-4相互作用，这样就将T细胞靶向性定位到大量表达VEGFR、EGFR、GnRH-R、或GRP-R的癌细胞周围，实验证明，本发明专利技术的融合蛋白能够抑制肿瘤生长和引起癌细胞的凋亡。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种融合蛋白及制备方法及用途，属于生物医药领域。
技术介绍
表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF)、血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelial cell growth factor, VEGF)、促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasinghormone, GnRH)禾口促胃液素释放妝(gastrin-releasingpeptide, GRP)等的受体在各种肿瘤组织中大量表达，例如在肠黏膜肿瘤中的EGF受体比正常组织高出300倍(Gastroenterology，98，961-967，1990)。所以，异常高表达的EGF受体、VEGF受体、GnRH受体、GRP受体等成为引人注目的癌治疗靶点。转化生长因子-a (Transforming growth factor- α , TGF- α )的受体与 EGF 的受体相同。上面这些细胞因子以及激素和多肽等可以与癌细胞上的相对应的受体(Receptor)相互作用。所以在它们的后面连接一个效应物例如毒素蛋白而形成融合蛋白，就可以靴向性攻击癌细胞(J Biol Chem, 267, 24034-24040,1992 ；Proc Natl AcadSci USA,99,7866-7871,2002 ；Cancer Res，54，5154-5159，1994；J Biol Chem,272,11597-11603，1997 ；Cancer Res，57，290-294，1997)。T细胞的有效活化需要两个信号的参与，即需要抗原肽-MHC复合物与T细胞上的TCR-CD3结合提供第1信号，以及共刺激分子(Costimulatory molecules) B7介导的第2信号。最基本的共刺激信号由抗原递呈细胞表达的B7. 1(⑶80)、B7. 2(^86)分子与T细胞上表达的相应受体(C^8*CTLA-4)提供(Amj Respir Crit Care Med，162，5164-5168，2000 ；Immunol CellBiol,77,304-311,1999 ；Clin Cancer Res,13,5271-5279, 2007 ；TrendsImmunol，24，313-318，2003)。B7. 1表达在活化的DC、B细胞和单核细胞上，B7. 2在B细胞、T细胞、DC和巨噬细胞上呈低水平表达，但B7. 2可被诱导快速上调，而B7. 1被诱导上调表达时间比B7. 2晚。初始T细胞上的⑶观与APC上的B7. 1/B7. 2结合，可以促进IL-2转录，同时使IL-2受体在T细胞上表达增加，从而促进T细胞增殖，还可以通过增加Bcl-xl的表达途径使T细胞免于凋亡。作为药物的应用，B7. I-Fc和B7. 2-Fc可以诱导和激活抗癌的T细胞，显示出抗肿瘤的生物活性(Cancer Res, 59,4964-4972,1999 ；Clin Cancer Res，11，8492-8502，2005 ；JImmunol,172，1347-1354,2004 ；Cancer Res，62，5727-5735，2002)。在抗癌的靶向性药物中，抗体是很流行的手段，但是抗体只是封闭癌细胞，与T淋巴细胞无关。肿瘤组织富含大血管和毛细血管，这些血管不仅给肿瘤输送营养，而且血管中有大量的淋巴细胞，其中70-80%是T淋巴细胞，但是这些T细胞是没有癌细胞特异性，是不会攻击肿瘤的。利用这些没有癌细胞特异性的T细胞来靶向性攻击癌细胞，是一种抗癌领域中的新的强有力的手段，这样的药物是不同于抗体的，现在没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，提供一种可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白。本专利技术的第二个目的是提供一种含有可诱导和激活癌靶向T细胞的编码融合蛋白的核苷酸序列的重组载体。本专利技术的第三个目的是提供一种可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白的制备方法。本专利技术的第四个目的是提供一种可诱导和激活癌靶向T细胞的用途。本专利技术的技术方案概述如下一种可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白，包括与癌细胞作用的肽和共刺激分子B7. 2 (又名CD86)，所述与癌细胞作用的肽选自缩写为TGF- α的转化生长因子_ α、缩写为EGF的表皮生长因子、缩写为VEGF的血管内皮细胞生长因子、缩写为&iRH的促性腺激素释放激素或缩写为GRP的促胃液素释放肽，TGF-α -Β7. 2由SEQ ID Νο4所示；EGF-B7. 2由SEQ ID Νο6 所示；VEGF-B7. 2 由 SEQ ID Νο8 所示；GnRH_B7. 2 由 SEQ ID NolO 所示；GRP-B7. 2由 SEQ IDNo 12 所示。一种重组载体，含有编码上面所述融合蛋白的核苷酸序列，编码SEQ ID No4的核苷酸序列为SEQ ID No3所示；编码SEQ ID No6的核苷酸序列为SEQ ID No5所示；编码SEQID No8的核苷酸序列为SEQ ID No7所示；编码SEQ ID NolO的核苷酸序列为SEQ ID No9所示；编码SEQ ID Nol2的核苷酸序列为SEQ ID Noll所示。一种可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白的变异体或人为改造的突变序列。一种宿主细胞，该宿主细胞含有上面所述的重组载体。可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白的制备方法，培养上面所述宿主细胞，收集表达的相应的融合蛋白 TGF-α -B7. 2 ；EGF-B7. 2 ；VEGF-B7. 2 ；GnRH_B7. 2 ；GRP-B7. 2。上面所述可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白与癌症有关。上面所述可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白能够诱导和激活T细胞。上面所述可诱导和激活癌靶向T细胞的融合蛋白在制备治疗癌症和抗实体肿瘤的药物的应用。本专利技术的优点本专利技术的融合蛋白具有癌靶向作用，一方面可分别与VEGF的受体VEGFR、EGF和TGF-α的受体EGFR、GnRH的受体GnRH-R、或GRP的受体GRP-R作用，另一方面又与T细胞上表达的相应受体⑶观和CTLA-4相互作用，这样就将T细胞靶向性定位到大量表达VEGFR、EGFR、GnRH-R、或GRP-R的癌细胞周围，从而诱导T细胞攻击癌细胞。T细胞可分泌的细胞因子例如干扰素-Y (Interferon- γ，IFN- y )、穿孔素和颗粒酶并诱导靶细胞产生Fas等导致癌细胞凋亡，所以上面的融合蛋白对于实体肿瘤有着很明显的杀伤作用。实验证明，本专利技术的融合蛋白能够抑制肿瘤生长和引起癌细胞的凋亡。附图说明图1表示三种本专利技术的融合蛋白抑制肉瘤肿瘤SarCOma(S180)生长，图中表示的是小鼠的肿瘤重量。图2利用常规免疫组化检测到的T细胞，棕色小点是T细胞。(图中2-1为对照；2-2为 B7. 2 ； 2-3 为 TGF- α -Β7. 2 ；2-4 为 EGF-B7. 2 ； 2-5 为 VEGF-B7. 2)图3利用常规免疫组化检查3种本专利技术的融合蛋白与肿瘤的结合能力。(图中3-1为 TGF- α -Β7. 2 ;3_2 为 EGF-B7. 2 ；3-3 为 VEGF-B7. 2)图4利用常规免疫组化检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙嘉琳，
申请(专利权)人：孙嘉琳，
类型：发明
国别省市：
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