类胡萝卜素类的定量方法技术

在对样品中的β-隐黄素定量的方法中进行的β-隐黄素的提取步骤中，使用含有选自番茄红素或视黄醛的内标物质的二乙基醚溶液作为提取液，将所述样品与所述提取液进行混合，由此从二乙基醚层抽取柑橘类果实等中含有的β-隐黄素，该方法可使提取作业变得容易并且可降低测定值的误差。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及，更加详细地说，涉及对柑橘类果实、含有果汁的饮料等中含有的类胡萝卜素类进行定量的方法。
技术介绍
类胡萝卜素是广泛分布于动植物界的色素，被分类为以异戊间二烯C5H8为结构单元的四萜(c4(l)。作为类胡萝卜素类，例如可例举α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、Y-胡萝卜素、番茄红素、隐黄素、叶黄素、玉米黄素、角黄素、褐藻素、百合黄素、紫黄素等。在类胡萝卜素类中含有在动物体内可转换为维生素A的物质(维生素A原)，并且还知道具有高的抗氧化作用的物质。已经证明在这些类胡萝卜素类中，温州蜜桔、瓦伦西亚橙等柑橘类果实、枇杷、柿子、桃子、红柿子椒、番木瓜等中含有的隐黄素不仅具有作为维生素A原的特性，而且还具有高的抗致癌作用、高的抗氧化作用，所以近年来已受到关注。HaCCHsβ -隐黄素β -隐黄素为在光、热的作用下容易发生异构化(顺异构化)，而且通过氧化使聚烯发生断裂等容易受光、热、氧气影响的物质，所以讨论对果汁等中含有的隐黄素量进行简便且准确的测定的方法的例子还很少。在非专利文献1中记载了温州蜜桔汁中的β -隐黄素的定量法。非专利文献1中记载的方法，详细地说，首先在果汁IOg中加入Ig硅藻土和IOml的乙醇后进行搅拌，注入到铺有薄薄的硅藻土的玻璃过滤器上，用乙醇洗涤提取至残渣的着色变无为止。接着将得到的乙醇提取液(约60ml)在分液漏斗中洗涤并转移，加入相同量的乙醚和蒸馏水，将气层置换为氮气后进行振荡使类胡萝卜素分配到乙醚中。将该乙醚溶液在减压下进行浓缩， 加入等量的10% KOH甲醇溶液后在20°C下、在暗处、在氮气气氛下放置1小时进行皂化处理。用乙醚从皂化处理过的溶液中分离出非皂化物，用蒸馏水洗涤直至除去碱为止。接着用无水硫酸钠脱水，在氮气气氛下将溶剂减压留出后，加入流动相溶剂并定容至10ml，将用 0. 45 μ m的膜过滤器过滤后的溶液用装有C3tl分析色谱柱的HPLC装置进行分析。利用使用 β -隐黄素标准品而同样制备的试样制作标准曲线，对果汁中的β -隐黄素量进行定量。现有技术文献非专利文献1隅田孝司等4人“利用C3tl色谱柱的温州蜜桔汁中的β -隐黄素定量法”、日本食品科学工学会志(日语原名隅田孝司、他4名、「C30力，幻二 J:易温州^力 >果汁中Θ β- ^ -J 卜—寸>定量法」、日本食品科学工学会誌)、1999年7月、第46 卷、第 7 号、p. 467-472非专利文献1中记载的方法为对开始精确称量的温州蜜桔汁中含有的β -隐黄素的总量进行测定的方法，例如在从某一容器向另一容器转移样品时等情况下，如在原来的容器上有残留量则成为产生误差的原因。此时，通常要重复洗涤数次等，以期回收β-隐黄素的全部量，但其结果使样品的容积增大，产生浓缩时需要花费时间等的问题。关于非专利文献1中记载的方法，在加入与用于洗涤玻璃过滤器上的残渣的乙醇相同量的乙醚及蒸馏水后，在减压下将乙醚溶液进行浓缩，因此如果洗涤时使用的乙醇的量越多，浓缩时的乙醚量也增多，所以进行浓缩时需要花费时间。此外，由于乙醚有可能发生突沸或引火，因此操作过程中不能转移视线，进行作业时比较费事。此外，操作时间延长时作为测定对象物的 β -隐黄素受光、氧气的影响而发生劣化，并且会引起误差。本专利技术的目的为，克服上述现有方法的缺点，提供简便且更加准确的定量方法。本专利技术者发现，通过在果汁等试样中添加内标物质，可减少使用的溶剂量，削减进行浓缩操作所花费的时间、工夫、成本，进而可减少测定值的误差。此外还对此时使用的内标物质的种类进行了讨论。进而发现通过在皂化反应之前添加脱水剂，可降低测定值的偏差，于是完成了本专利技术。即本专利技术涉及以下内容1. 一种方法，其为试样中的隐黄素的定量方法，其特征在于，包括以下步骤将含有选自番茄红素或视黄醛的内标物质的二乙基醚溶液与所述试样进行混合，抽取二乙基醚层，在得到的二乙基醚层中加入脱水剂进行干燥，干燥后加入碱溶液进行皂化反应，反应后加入酸并静置后抽取二乙基醚层，将得到的二乙基醚层供给高效液相色谱仪，使用内标法对β -隐黄素进行定量。2.根据上述1所述的方法，其特征在于，内标物质为视黄醛。3.根据上述1所述的方法，其特征在于，脱水剂为硫酸钠。4.根据上述1 3中任一项所述的方法，其特征在于，试样为含有果汁或蔬菜汁的液体。5.根据上述4所述的方法，其特征在于，含有果汁或蔬菜汁的液体为含有柑橘类果实的果汁的液体。6.根据上述4所述的方法，其特征在于，含有果汁或蔬菜汁的液体为含有果汁的饮料。7.根据上述1 6中任一项所述的方法，其特征在于，皂化反应在5 60°C下、在暗处进行1 3小时。根据本专利技术的方法，如果能够在开始准确地称取试样和内标物质，那么其后的操作中就不要求那么高的精密度，对于不熟悉作业的人员来说作业也比较容易。此外，由于洗涤操作中不大量使用溶剂，所以可降低溶剂的成本，并且也不需要浓缩操作。此外，因为可缩短制备样品的时间，所以也可减少因测定对象物的结构变化而引起的误差，进而，通过简单的操作也可抑制测定值的偏差。附图说明图1使用内标时与不使用内标时的标准曲线的对比。图2检测波长381nm及451nm处的β -隐黄素、视黄醛以及番茄红素的HPLC色谱图。具体实施例方式本专利技术的方法是将果汁等试样与含有内标物质的有机溶剂的溶液混合，抽取有机溶剂，加入脱水剂进行干燥后再加入碱溶液进行皂化反应，接着加入酸静置后抽取有机溶剂层，利用高效液相色谱仪(HPLC)进行定量的方法。本专利技术的方法特别适合于隐黄素的定量，但也可应用于隐黄素以外的类胡萝卜素类的定量。(试样)本专利技术的方法可对果汁、蔬菜汁、饮料等试样中含有的类胡萝卜素类进行定量。特别是可将大量含有β -隐黄素的果实的果汁、特别是柑橘类果实的果汁或含有果汁的液体作为试样而优选使用。作为大量含有隐黄素的果实，可例举温州蜜桔、瓦伦西亚橙等柑橘类果实、枇杷、柿子、桃子、番木瓜等果实。此外也可以用红柿子椒等的蔬菜汁。将这些果实及蔬菜适当洗涤，使用h Line榨汁机、Chopper pulper榨汁机、布朗榨汁机等通常使用的榨汁机进行榨汁，根据需要通过进行过滤处理等，可作为果汁或蔬菜汁试样来使用。此外，也可将在含有果汁或蔬菜汁的液体中加入常用的添加剂等而制成饮料的含有果汁或蔬菜汁的饮料、从外部添加隐黄素的饮料作为试样使用。在这些饮料中可含有水、酒精、碳酸气体等，此外，也可含有甜味剂、着色剂、增粘剂、稳定剂、抗氧化剂、香料、 酸味剂、保存剂、凝胶化剂、糊剂、乳化剂、PH调节剂等这样的添加剂。此外，即使为类似果冻等的固体食品，通过用公知的方法形成液体，也可作为本专利技术的试样使用。因试样的粘度、Brix (糖度)高不适合制备样品时，用常用的方法进行适当稀释等后也可作为试样。(标准溶液与试样的混合)在本专利技术的方法中，首先在精确称量的试样中混合含有精确称量的内标物质的有机溶剂的溶液(标准溶液)。精确称量可通过使用定量移液管等来简单地进行。作为有机溶剂，可使用二乙基醚、石油醚、正己烷、环己烷、氯仿、乙酸乙酯等。其中，从提取效率方面来看，优选二乙基醚。作为添加在标准溶液中的内标物质，优选使用以下物质不含与试样(果汁等)中同样的成分，在制备样品时稳定、溶解动态、物性、特性等与测定对象物质本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种方法，其为试样中的β－隐黄素的定量方法，其特征在于，包括以下步骤：将含有选自番茄红素或视黄醛的内标物质的二乙基醚溶液与所述试样进行混合，抽取二乙基醚层，在得到的二乙基醚层中加入脱水剂进行干燥，干燥后加入碱溶液进行皂化反应，反应后加入酸并静置后抽取二乙基醚层，将得到的二乙基醚层供给高效液相色谱仪，使用内标法对β－隐黄素进行定量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：笠岛直树，
申请(专利权)人：三得利控股株式会社，
类型：发明
国别省市：JP