纤维样变性易感基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了纤维样变性易感基因座——ＣＴＧＦ基因座的鉴定，其可用于检测纤维样变性的易感性、纤维样变性的诊断和预后以及治疗活性药物的筛选。具体来说，本发明专利技术涉及的方法包含在来自对象的样品中检测ＣＴＧＦ基因座中是否存在变异，所述变异的存在表明纤维样变性的存在或易感性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
总的来说，本专利技术涉及遗传学和医学领域。具体来说，本专利技术公开了人类纤维样变性易感基因的鉴定，其可用于肝病、肝硬化、皮肤瘢痕疙瘩、肥胖症和任何纤维样变性疾病中发生的纤维样变性的诊断或预后，或用于纤维样变性易感性的诊断。更具体来说，本专利技术公开了 6号染色体上CTGF基因的某些等位基因，其与纤维样变性的易感性相关，并代表了用于筛选治疗活性药物的新靶点。更具体来说，本专利技术涉及CTGF基因和表达产物中的特定突变以及基于这些突变的诊断工具和试剂盒。本专利技术还可用于在所有人类纤维样变性疾病中发生的纤维样变性的预防和/或治疗。
技术介绍
纤维样变性是在器官、其任何部分或组织中，例如在肝脏、其任何部分或组织中， 尤其是对损伤做出响应而发生的纤维结缔组织的过度生长。异常纤维样变性发生在各种不同病因的慢性肝脏炎症中，例如在肝炎病毒和血吸虫感染中。以前显示，某些被血吸虫感染的对象缓慢形成纤维样变性，而其他对象快速形成纤维样变性，这部分取决于位于Chr 6q22-q23上的主要基因(Dessein等，1999 ； Mohamed-Ali 等，1999)。血吸虫病由在其宿主的血管系统中发育并产卵的蠕虫引起，一些蠕虫被载运到肝脏，它们在那里引发门静脉周间隙中的炎症。因为蠕虫在其人类宿主中生活数年，因此在被感染对象中常见慢性肝脏炎症并伴有大量组织破坏。组织修复需要在受损组织中沉积细胞外基质蛋白(ECMP)，它们晚些时候被正常肝细胞更新代替。在一些患者中，ECMP积累在门静脉周间隙中，形成纤维样变性沉积物，其减少血流，引起静脉曲张、腹水。在慢性或重复损伤数月或数年后，纤维样变性变得永久和不可逆。对象死于纤维样变性的结果。在南方国家，据估计3. 5亿被感染对象中的5至10 %可能发展严重肝纤维样变性。 在血吸虫感染的对象中没有良好的标志物允许对肝纤维样变性的进展进行预测和跟踪。肝纤维样变性的诊断主要基于肝脏活检、弹性测定法(Boursier等，2008 ；Macias 等，2008)以及超声波分析(Richter 等，2001 ；Lambertucci 等，2004 ；King 等，2003)。取决于临床背景，活检样品通过经皮、经颈静脉的放射照相引导的细针或腹腔镜途径获得。组织病理学检查能够使临床医生对坏死性炎症的严重性进行评级并对纤维样变性程度进行分级。Metavir评分系统在如下的1_4量级上对纤维样变性的阶段进行评分F0 =无纤维样变性，Fl =不具有隔膜的门静脉纤维样变性，F2 =门静脉纤维样变性并具有少量隔，F3 =具有大量隔而没有肝硬化，F4 =肝硬化(Bedossa等，1996)。肝脏活检是侵入性和高花费的操作，并且只对肝脏的一小部分取样。因此，它不能提供肝纤维样变性的全面评估，并易受取样变动和观察者间和观察者内误差的影响。此外，肝脏活检伴有3%的显著发病率和0.03%的死亡率(Garcia-Tsao等，199；3)。潜在的并发症包括与活检相关的局部血肿、感染和疼痛。非侵入性测试(例如血清学标志物、组织弹性测定法、超声波分析)也被使用，但是尚未准备好用于常规临床使用。已经在主要是患有慢性丙型肝炎或由丙肝病毒引起的肝硬化的患者中对血液标志物组进行了测试。这些研究表明，这些血清标志物能够在约35%的患者中判断出或排除纤维样变性(Sebastiani等，2006)。然而，当对患者个体进行考察时，这些标志物不能可靠地区分纤维样变性的各种不同阶段。更近的研究将三组血清标志物合并以设计改进诊断精确度的算法(Parkes等，2006)。被评估的三个组是APRI (天冬氨酸转氨酶与血小板比率指数)、FornS指数(血小板、Y-谷氨酰转肽酶、胆固醇)和Fibrotest (GGT、触珠蛋白、胆红素、载脂蛋白Α、α -2-巨球蛋白)。由APRI继之以Fibrotest所构成的算法将纤维样变性的诊断精确度提高至超过90%。该研究组估计，使用这种算法能够避免高达50%的肝脏活检需要。然而，使用这种算法不能辨别纤维样变性的各个阶段。这些血清标志物的限制是当存在高度活动的肝脏炎症时假阳性的可能性。Fibroscan是用于对肝纤维样变性进行分级的另一项革新方法，其基于弹性成像， 提供了肝组织平均刚度的快速测量(Ziol等，200 。使用探头将低频低振幅的振动传送到肝脏中。该振动波触发弹性剪切波，其通过肝脏的速度与以千帕斯卡(kPa)计的组织刚度成正比。与肝脏活检相比，Fibroscan技术的灵敏度在79至95%的范围内，特异性为78至 95%。然而，该技术的限制与弹性波在流体或脂肪组织中的衰减相关，这种衰减将损害患者中纤维样变性的评估。此外，Fibroscan是极其昂贵的仪器。然而，不存在对纤维样变性的发展和治疗效果进行预后的有效方法。已经测试了大量分子用于肝纤维样变性治疗。例如，已使用皮质类固醇在自体免疫和酒精性肝炎中抑制肝脏炎症(Czaja等，2003)。已证明，熊去氧胆酸通过结合胆酸从而也降低肝脏炎性在PBC患者中增加存活率(Poupon等，1997)。使用特异性受体拮抗剂 (TNF-α、IL-I受体拮抗剂)和前列腺素E中和炎性细胞因子，已经在鼠类模型中测试，但尚未在人类中测试(Bruck等，1997)。缩减肝纤维样变性的另一个有吸引力的靶点是肝脏星形细胞活化的下调。将 Y-干扰素与病毒唑组合使用来治疗丙肝感染。据推断，干扰素的抗纤维样变性效应可能部分与星形细胞活化的下调相关。该机制能够解释在患有病毒性丙型肝炎、对α-干扰素没有病毒学响应的患者中所描述的纤维样变性的改善(Poynard等，1998)。目前正在人类中进行抗氧化剂(N-乙酰半胱氨酸、a -生育酚)试验。血管紧张肽 II受体在星形细胞活化中上调，因此血管紧张肽转化酶抑制剂和血管紧张肽受体抑制剂已在体外和动物中被证明具有抗纤维样变性活性。这一点还没有在人类中重复(Jonsson等， 2001)。通过基质金属蛋白酶促进基质降解，是在鼠类模型中显示出有益的抗纤维样变性策略(Iimuro等，200 。肝脏星形细胞的特异性凋亡是另一个有趣的理论想法，但是还没有被调查(Gressner等，1998)。旨在逆转纤维样变性的治疗通常对于长期使用来说毒性太强 (即皮质类固醇、青霉胺)或没有证实过的效果(即秋水仙素)。总而言之，目前缺乏有效且良好耐受的抗纤维样变性药物，并且当前的纤维样变性治疗限于有毒因子的去除。以前已经报道，纤维样变性发展受到Chr 6q23上主要基因座的显著影响 (Dessein等，1999)。还已提出，CTGF基因通过与各种前纤维形成生长因子包括P⑶F、VEGF 和主要纤维形成分子TGF-β的协同增效作用，造成纤维样变性增加(Leask等，2006)。更具体来说，CTGF起到TGF- β下游调节剂的作用(Leask等，2006 ；Leask等，2003)。它增加TGF-β与其受体的结合，干扰对TGF-β的Smad-7负反馈回路(Wahab等，2005)；它抑制主要的TGF-β拮抗剂ΒΡΜ-7的受体结合(Abreu等，2002)。CTGF对TGF-β作用的重要结果是刺激肝脏星形细胞和其他实质细胞转移分化到参与进行性纤维样变性过程的产ECMP的肌成纤维细胞中(Kallur本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种检测对象中发生纤维样变性的易感性或对纤维样变性进行诊断和／或预后的体外方法，所述方法包含在所述对象的生物样品中检测ＣＴＧＦ基因座中是否存在变异。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿莱恩·德赛因，
申请(专利权)人：地中海大学，
类型：发明
国别省市：FR