用于治疗胰腺肿瘤的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用于制备适用于治疗癌症的抗原结合化合物的方法、抗原结合化合物以及它们的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来自胰腺结构的糖肽、抗体以及其在诊断和治疗中的应用。
技术介绍
外分泌胰腺的癌症(其占超过20%的消化道癌)是癌症的最具侵袭性形式之一。 在法国，例如，每年诊断4， 000个新病例。另外，它的频率在世界的许多地区正显著上升。存 活率不超过20% (1年)和3% (5年)，并且在诊断以后平均生存期为3至4个月。这种低 存活率源自许多原因，包括以下事实肿瘤的深层解剖位置、缺少敏感和特异性早期生物标 志物、以及其无症状性导致几乎总是较晚得到诊断。此外，胰腺癌进展非常快速，主要通过 腹腔和肝脏转移瘤的形成。目前，并没有充分的治疗选择来治疗胰腺癌。 已探索了两种不同的方式来治疗胰腺癌化学放疗和免疫疗法。化学放疗临床试 验包括将吉西他滨(gemcitabine)加入到标准化学放疗方案中；这已显示可以稍微改善患 者的总生存。将埃罗替尼(erlotinib)加入到吉西他滨中仅提供适度的改善。通常，化学 放疗，虽然显示某些积极结果，但仍然呈现较差的治疗选择。 免疫疗法临床试验已包括直接接种疫苗，其中使用整体胰腺癌细胞、可溶性VEGF 或EGFR、来自MUC1的肽、胃泌素、以及间皮素。也已尝试间接免疫疗法方式，例如通过缔合 抗体于VEGF(阿瓦斯汀(Bevacizumab))或EGFR(西妥昔单抗(Cetuximab))，其中借助于药 物如吉西他滨、酪氨酸激酶抑制剂(埃罗替尼)、微管去稳定剂(泰索帝(Taxotere))、或环 磷酰胺(环磷酰胺制剂(Cytoxan))。这样的试验正在进行中。 虽然在鉴定有用的诊断和治疗标志物的努力中相对于恶性胰腺上皮细胞已产生 了许多单克隆抗体(例如，Span-l、 Du-Pan-2、 CA 19-9、 CAR-3、 CA242、以及C0-TL1)，但几 乎没有对胰腺肿瘤细胞真正具有特异性，并且它们的反应性经常取决于患者的基因型(参 见，例如，Kawa et al. (1994)Pancreas ;9 :692-7)。因此，这种类型的大多数标志物不能为 外分泌胰腺癌的有效诊断或治疗提供显著的益处。 在先前的研究中，已经表明，人胰腺肿瘤细胞过度表达胚胰腺泡蛋白(FAPP)，胆盐 依赖性脂肪酶(BSDL)的一种癌胚形式，其伴随糖基化改变，而糖基化改变导致许多糖表位 (glycotope，一种包括碳水化合物的表位。表位又是抗原决定簇，通常是通过免疫系统，特 别地通过抗体、B细胞或T细胞识别的高分子)的特异性表达，如16D10和J28糖表位。研 究还表明，在胰腺肿瘤S0J-6细胞的表膜上存在32kDa肽，其伴随由单克隆抗体mAbl6D10 识别的糖表位。 因此本领域非常需要新的方式和工具，用于治疗外分泌胰腺和其它形式的癌症。 本专利技术解决了这些和其它需要。
技术实现思路
本专利技术尤其来自以下惊人的发现结合BSDL或FAPP多肽的抗原结合化合物能够 诱导细胞凋亡和/或减慢表达BSDL或FAPP多肽的肿瘤细胞的增殖(应当明了 ，如在本文中使用的，短语BSDL或FAPP不是排他性的，S卩，它还可以指BSDL和/或FAPP或BSDL和 FAPP)，从而导致细胞死亡或停止它们的生长和增殖。当通过结合至BSDL或FAPP的抗体 来触发细胞凋亡时，所形成的程序性细胞死亡由至少半胱天冬酶(胱冬裂酶，半胱天冬蛋 白酶，caspase)-3、半胱天冬酶_9、半胱天冬酶_8活化和/或多聚ADP核糖聚合酶(PARP) 切割加以介导。另外，抗凋亡蛋白Bcl-2的减少伴随Bax蛋白的增加，这表明半胱天冬酶活 化受Bcl-2蛋白家族的控制。因此，本专利技术的化合物特别可用于诱导癌细胞的凋亡，或用于 治疗患有癌症的患者(包括癌细胞)，其表达BSDL或FAPP并且其易感于细胞凋亡(例如， 它们表达半胱天冬酶_3、半胱天冬酶_9、半胱天冬酶-8、 PARP等)。当本专利技术的化合物抑 制细胞增殖时，它至少通过封闭在Gl/S处的细胞来进行，例如通过增加p53活性和降低细 胞周期蛋白Dl水平，例如通过激活GSK-3P 。因此，本专利技术的化合物特别可用于停止癌细 胞的增殖，或用于治疗患有癌症的患者(包括癌细胞)，其表达BSDL或FAPP并且其易感于 p53或GSK-3P介导的G1/S细胞周期阻滞。 重要的是，本专利技术的化合物能够直接靶向肿瘤细胞，尤其是表达BSDL或FAPP的胰 腺肿瘤细胞，并引起它们的死亡(经由细胞凋亡)和/或停止它们的增殖。显著地，由于这 些效应仅取决于化合物与BSDL或FAPP多肽的相互作用，所以它们甚至可以用裸化合物 (尤其是抗体)进行，即没有被有毒化合物修饰或衍生化的化合物。另外，当化合物是抗体 时，它们可以有效地靶向肿瘤细胞，甚至不依靠肿瘤细胞的免疫细胞介导杀伤(ADCC)(但 应该强调的是，ADCC还可以在许多情况下发生，进一步增强治疗效力)。因此，本专利技术的化 合物特别可用于具有受损免疫系统的患者，例如患有AIDS的患者、接受化疗的患者、或接 受免疫抑制药物疗法的患者。 虽然本专利技术的化合物可以是任何类型的分子实体(例如，多肽、小分子)，其可以 特异性地结合至表达BSDL或FAPP的细胞并从而诱导它们的凋亡或抑制它们的生长和增 殖，但本专利技术的优选化合物是抗体。特别优选的抗体是二价IgG抗体，因为它们通常可以不 仅直接减少靶细胞数目(通过细胞凋亡或通过抑制细胞增殖)，而且包含Fc尾部并具有足 够的结合亲和力以诱导通过ADCC来杀伤细胞。另外，已发现，某些抗BSDL或抗FAPP抗体， 尤其是多聚抗体如IgM抗体，倾向于被表达BSDL或FAPP的细胞快速内化，因而不能有效地 诱导ADCC。因此，通过选择适当的抗体(二价IgG抗体，其耙向BSDL或FAPP，最优选由抗 体16D10识别的FAPP表位)，可以通过两种独立的机制(细胞凋亡诱导/细胞周期抑制和 ADCC)来耙向表达BSDL或FAPP的肿瘤细胞。因此这些发现一起提供了意想不到的方式来 产生特别有效的抗原结合化合物，最优选抗体，其尤其具有所期望的促凋亡或抗细胞增殖 特性以及通常地ADCC诱导效应。描述了制备和使用这样的抗原结合化合物的方法，以及示 例性的抗原结合化合物。 本专利技术提供了使用抗原结合化合物的方法；例如，本专利技术提供了一种用于诱导细 胞死亡或抑制细胞增殖的方法，包括将细胞如表达BSDL或FAPP多肽的癌细胞暴露于抗原 结合化合物，其以有效量结合BSDL或FAPP多肽，以诱导细胞死亡或抑制细胞增殖。应当明 了，对于本专利技术来说，细胞增殖可以指细胞生长或增殖的任何方面，例如，细胞生长、细胞 分裂、或细胞周期的任何方面。细胞可以处于细胞培养物中或在哺乳动物中，例如患有癌症 的哺乳动物。本专利技术还提供了一种用于诱导表达BSDL或FAPP多肽的细胞的凋亡或抑制其 增殖的方法，包括将细胞暴露于抗原结合化合物(例如，外源性抗体)，其以有效量结合如本文描述的BSDL或FAPP多肽，以诱导细胞凋亡或抑制细胞的增殖。因此，本专利技术提供了一 种用于治疗患有病症(特征在于BSDL或FAPP多肽的表达，例如，胰腺癌)的哺乳动物的方 法，包括将药物有效量的本文披露的抗原结合化合物给予哺乳动物。在优选的实施方式中， 化合物是抗体，例如二价IgG抗体，其并没有显著地被表达BSDL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产适用于治疗癌症的抗原结合化合物的方法，所述方法包括：　　ｉ）提供特异性地结合于ＢＳＤＬ或ＦＡＰＰ多肽的抗原结合化合物；　　ｉｉ）测试所述抗原结合化合物对表达ＢＳＤＬ或ＦＡＰＰ的细胞的促凋亡活性；　　ｉｉｉ）如果确定所述抗原结合化合物对表达ＢＳＤＬ或ＦＡＰＰ的细胞具有促凋亡活性，则选择所述抗原结合化合物；以及　　ｉｖ）产生一些所选择的抗原结合化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-6-8 60/942,777一种生产适用于治疗癌症的抗原结合化合物的方法，所述方法包括i)提供特异性地结合于BSDL或FAPP多肽的抗原结合化合物；ii)测试所述抗原结合化合物对表达BSDL或FAPP的细胞的促凋亡活性；iii)如果确定所述抗原结合化合物对表达BSDL或FAPP的细胞具有促凋亡活性，则选择所述抗原结合化合物；以及iv)产生一些所选择的抗原结合化合物。2. 根据权利要求1所述的方法，进一步包括这样的步骤，所述步骤包括测试所述抗原 结合化合物对于诱导表达BSDL或FAPP的细胞的ADCC活性的能力，并且如果确定所述抗原 结合化合物具有诱导表达BSDL或FAPP的细胞的ADCC活性的能力，则选择所述抗原结合化 合物。3. 根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括其中制备所述抗原结合化合物以用于 给予人的步骤。4. 根据权利要求3所述的方法，其中，所述用于给予人的制备包括将所述化合物与药 用载体一起配制。5. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述表达BSDL或FAPP的细胞是肿瘤细胞。6. 根据权利要求5所述的方法，其中，所述肿瘤细胞获自 一位或多位患有癌症的患者。7. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述细胞在脂筏中表达BSDL和/或FAPP。8. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述细胞是使得能表达BSDL或FAPP的重组 细胞。9. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述细胞是S0J-6细胞。10. 根据权利要求1所述的方法，其中，在没有免疫效应细胞的情况下进行步骤ii)。11. 根据权利要求10所述的方法，其中，所述免疫效应细胞是NK细胞。12. 根据权利要求l所述的方法，其中，步骤ii)包括确定所述抗原结合化合物是否在 所述表达BSDL或FAPP的细胞中调节凋亡或细胞增殖调节蛋白的活性或水平。13. 根据权利要求12所述的方法，其中，所述调节蛋白是半胱天冬酶或Bcl-2家族成员。14. 根据权利要求1所述的方法，其中，步骤iv)包括在适宜的培养基中培养产生所述 抗原结合化合物的宿主细胞并回收所述抗原结合化合物。15. 根据权利要求14所述的方法，其中，所述抗原结合化合物是抗体，而所述宿主细胞 是产生所述抗体的杂交瘤。16. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原结合化合物并不包括细胞毒性剂如放 射性同位素、毒性多肽、或毒性小分子。17. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原结合化合物是特异性地结合BSDL或 FAPP多肽的抗体。18. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原结合化合物与抗体16D10竞争结合于 BSDL或FAPP多肽。19. 根据权利要求17所述的方法，其中，所述抗体具有IgG同种型的重链恒定区。20. 根据权利要求19所述的方法，其中，所述IgG同种型是人IgGl同种型。21. 根据权利要求17所述的方法，其中，所述抗体是嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。22. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述抗体包括抗体16D10或另一种抗体的可变 区，其中所述另一种抗体与抗体16D10竞争结合于BSDL或FAPP多肽。23. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述抗体是抗体16D10的嵌合重组形式，其中 重链恒定区的Cii2、Cii3、以及Cii4结构域已被人IgGl序列替换。24. 根据权利要求19所述的方法，其中，所述抗体是二价抗体。25. 根据权利要求19所述的方法，其中，所述抗体基本上没有被表达BSDL或FAPP的细 胞内化。26. 根据权利要求19所述的方法，其中，所述抗体能够诱导表达BSDL或FAPP的细胞的 细胞介导杀伤(ADCC)。27. 根据权利要求19所述的方法，进一步包括另外的步骤，其中评估了通过所述表达 BSDL或FAPP的细胞进行的所述抗体的内化，其中所述抗体基本上没有被所述细胞内化的 发现证实了所述抗体适用于治疗癌症。28. 根据权利要求19所述的方法，进一步包括另外的步骤，其中评估了所述抗体诱导 表达BSDL或FAPP的细胞的细胞介导杀伤(ADCC)的能力，其中所述抗体能够诱导所述细胞 的所述细胞介导杀伤的发现证实了所述抗体适用于治疗癌症。29. —种根据权利要求1至28中任一项所述的方法生产的抗原结合化合物。30. 根据权利要求29所述的抗原结合化合物，其中，所述抗原结合化合物与抗体16D10 竞争结合于BSDL或FAPP多肽。31. 根据权利要求29所述的抗原结合化合物，其中，所述化合物是不同于抗体16D10的 抗体。32. —种药物组合物，包括根据权利要求29所述的抗原结合化合物、以及药用载体。33. —种抗体，结合于BSDL或FAPP多肽并且能够诱导表达BSDL或FAPP多肽的细胞的 凋亡或抑制其增殖，其中所述抗体与抗体16D10竞争结合于BSDL或FAPP多肽，并且其中所 述抗体是不同于16D10的抗体。34. 根据权利要求33所述的抗体，其中，所述抗体是二价的。35. 根据权利要求33-34所述的抗体，其中，所述抗体具有IgG同种型的重链恒定区。36. 根据权利要求35所述的抗体，其中，所述抗体具有人IgG同种型的重链恒定区。37. 根据权利要求35-36所述的抗体，其中，所述抗体具有能够结合于Fc受体的重链恒 定区。38. 根据权利要求37所述的抗体，其中，所述抗体能够诱导表达BSDL或FAPP的细胞的 细胞介导杀伤(ADCC)。39. —种由两个重链和两个轻链构成的二价抗体，其中所述重链包括能够结合于Fc受 体的IgG重链恒定区，并且其中所述抗体(a) 能够诱导表达BSDL或FAPP多肽的细胞的凋亡或抑制其增殖；(b) 能够诱导表达BSDL或FAPP的细胞的细胞介导杀伤(ADCC);以及(c) 与抗体16D10竞争结合于BSDL或FAPP多肽。40. —种二价抗体，包括(a)包括可变区的重链，其中所述可变区包括来自SEQ ID NO :7的氨基酸序列、融合于人IgG链恒定区的一个或多个CDR ;以及(b)包括可变区的轻 链，其中所述可变区包括来自SEQ ID N0:8的氨基酸序列、可选地融合于人卡巴链恒定区的一个或多个CDR。41. 根据权利要求33至40所述的抗体，其中，所述重链包括来自SEQ ID NO :7的氨基 酸序列的CDR1、CDR2以及CDR3，而所述轻链包括来自SEQ ID NO :8的氨基酸序列的CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：莉迪克雷申切，劳伦特戈捷，多米尼克隆巴尔多，埃里克马斯，本杰明罗西，
申请(专利权)人：地中海大学，法国国家健康与医疗研究院，依奈特制药公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]