本发明专利技术提供一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒，包含：无菌去离子水、PCR反应液、TaqDNA聚合酶、GoldViewDNA染料、溴酚蓝上样缓冲液、标准品、对照品。本发明专利技术提供的检测试剂盒，只需一个反应即可快速、准确地检测出被检标本中的猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫DNA，也可用于猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫感染的分子流行病学调查及疗效监测。本方法制备步骤简单费用低，操作简单，不仅省时省力而且节省了大量的试剂和耗材，提高了工作效率。本方法检测敏感性高、特异性强，准确率高，降低假阳性率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术，尤其涉及一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫3种食源性寄生虫的试剂盒，可以同时对单个或多个混合感染猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的标本进行鉴别检测。
技术介绍
目前我国养宠物的人越来越多，人群流动性越来越大，生食海鲜、喜好野味的人也越来越多，各种动物源性疾病开始在非流行区播散，食源性寄生虫病已对公共卫生构成巨大的威胁。旋毛虫病是由旋毛虫ijrichinella spiralis)成虫寄生于哺乳动物肠道及其幼虫寄生于肌肉组织而引起的疾病，是一种严重危害公共卫生安全的人畜共患病。旋毛虫可以感染大多数哺乳动物，家畜中除猫和犬等肉食动物之外，猪患病率最高，但患病猪往往没有临床症状，人因生食入半熟或生的含有旋毛虫的猪肉而感染，常导致出现胃肠道症状、发热、水肿和血液嗜酸粒细胞增多，原因不明的常年肌肉酸痛，重者丧失劳动能力，甚至致人死亡。囊尾蚴病是由猪带绦虫(Taenia sodium)的幼虫囊尾蚴(Cysticercus)寄生在中间宿主而引起的一种重要的人畜共患寄生虫病，是我国重点防治的寄生虫病之一；猪囊尾蚴病不仅造成养猪业的巨大损失，而且也给人体的生命安全带来严重危害。弓形虫 {Toxoplasma gondii)主要侵犯脑、眼、心、肝、淋巴结等，孕妇受染后病原通过胎盘感染胎儿，直接影响胎儿发育，致畸严重；据研究表明，婴儿出生时出现症状或发生畸形者病死率为12%，而存活中80%有精神发育障碍，50%有视力障碍，该病成为人类先天性感染中最严重的疾病之一。人类大多是通过食用生的或未经彻底加热的感染有这些寄生虫的肉食而感染这些疾病。因此，要控制这类寄生虫病的流行必须首先从源头抓起，控制食源性寄生虫病在畜禽中流行，把好屠宰检疫关。目前，食品安全卫生问题非常严峻，但屠宰检疫技术却非常落后。一些在屠宰检疫中的必检项目如旋毛虫和囊尾蚴等的检测仅仅是依靠肉眼观察来诊断，极易造成漏检，严重影响肉品质量，同时也给消费者的健康构成巨大威胁。因此，对这些严重影响人类健康的疾病建立一种操作简单、快速、敏感、特异的检测方法势在必行。PCR方法是一种操作简单、 敏感性高、特异性强的分子生物学检测方法，多重PCR方法除具有普通PCR的优点之外，还可以在一个反应体系中同时扩增两份或者多份DNA样本的不同目的基因片段，特别适合用于混合感染的大量临床样本的快速诊断。因此建立这三种食源性人畜共患寄生虫的PCR快速检测方法，可以为临床上这三种病的防治提供科学依据，而且对提高动物疫病的检测、监控水平，保障动物源性食品安全具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒，该试剂盒包含无菌去离子水、PCR反应液、7 DNA聚合酶、GoIdView DNA染料、溴酚蓝上样缓冲液、 标准品、对照品。其中标准品猪囊尾蚴σ. WhTffl )标准品的核苷酸序列如SEQ ID No :7，猪旋毛虫(7 ■spirals)标准品的核苷酸序列如SEQ ID No :8，猪弓形虫(7卯fli/ii)标准品的核苷酸序列如SEQ ID No :9，具体序列见序列表；对照品分为阳性对照品和阴性对照品，阳性对照为有猪囊尾蚴、猪旋毛虫和猪弓形虫 DNA片段的DNA样品，阴性对照为无猪囊尾蚴、猪旋毛虫和猪弓形虫DNA的DNA样品； PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、检测用引物， 其中检测用引物分别为检测3种寄生虫的上游引物和下游引物共6条(表1)表权利要求1. 一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒，该试剂盒包含无菌去离子水、 PCR反应液、Taq DNA聚合酶、GoldView DNA染料、溴酚蓝上样缓冲液、标准品、对照品，其中，标准品猪囊尾蚴标准品的核苷酸序列如SEQ ID No :7，猪旋毛虫标准品的核苷酸序列如SEQ ID No :8，猪弓形虫标准品的核苷酸序列如SEQ ID No 9,对照品分为阳性对照品和阴性对照品，阳性对照为有猪囊尾蚴、猪旋毛虫和猪弓形虫 DNA片段的DNA样品，阴性对照为无猪囊尾蚴、猪旋毛虫和猪弓形虫DNA的DNA样品， PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、检测用引物， 检测用引物分别为囊尾蚴上游引物囊尾蚴下游引物旋毛虫上游引物旋毛虫下游引物弓形虫上游引物弓形虫下游引物2.根据权利要求1所述的一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒，其特征在5’-GCCTCAGACTGTCTTGATTCTGGAG-3’ 5’-CGATGACAGCAGCAGCCATTACAC-3’ 5’-CTGAGCCCTCTTAGCAATCATCGCAC-3’ 5’-GGCTCTTTTAGTCTAAGGGACGTCG-3’ 5’-AAACAGGGGTATGAAGTGAGGAACGGTC-3’ 5’-GAGGCATTCTCAAAACCTTCGCCCATTG-3’于，试剂盒保存于-20 °C，尽量减少反复冻融。3.根据权利要求1所述的试剂盒在检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫J 生虫中的应用。种食源性寄全文摘要本专利技术提供一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒，包含无菌去离子水、PCR反应液、TaqDNA聚合酶、GoldViewDNA染料、溴酚蓝上样缓冲液、标准品、对照品。本专利技术提供的检测试剂盒，只需一个反应即可快速、准确地检测出被检标本中的猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫DNA，也可用于猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫感染的分子流行病学调查及疗效监测。本方法制备步骤简单费用低，操作简单，不仅省时省力而且节省了大量的试剂和耗材，提高了工作效率。本方法检测敏感性高、特异性强，准确率高，降低假阳性率。文档编号C12Q1/04GK102304578SQ20111025087公开日2012年1月4日 申请日期2011年8月29日 优先权日2011年8月29日专利技术者周前进, 张德福, 杜爱芳, 王素华 申请人:浙江大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒，该试剂盒包含：无菌去离子水、ＰＣＲ反应液、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶、ＧｏｌｄＶｉｅｗ ＤＮＡ染料、溴酚蓝上样缓冲液、标准品、对照品，其中，标准品：猪囊尾蚴标准品的核苷酸序列如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：７，猪旋毛虫标准品的核苷酸序列如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：８，猪弓形虫标准品的核苷酸序列如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：９，对照品分为阳性对照品和阴性对照品，阳性对照为有猪囊尾蚴、猪旋毛虫和猪弓形虫ＤＮＡ片段的ＤＮＡ样品，阴性对照为无猪囊尾蚴、猪旋毛虫和猪弓形虫ＤＮＡ的ＤＮＡ样品，ＰＣＲ反应液含有ＰＣＲ缓冲液、ＭｇＣｌ２、ｄＮＴＰｓ、检测用引物，检测用引物分别为：囊尾蚴上游引物： ５＇－ＧＣＣＴＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＡＴＴＣＴＧＧＡＧ－３＇囊尾蚴下游引物： ５＇－ＣＧＡＴＧＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＡＣＡＣ－３＇旋毛虫上游引物： ５＇－ＣＴＧＡＧＣＣＣＴＣＴＴＡＧＣＡＡＴＣＡＴＣＧＣＡＣ－３＇旋毛虫下游引物： ５＇－ＧＧＣＴＣＴＴＴＴＡＧＴＣＴＡＡＧＧＧＡＣＧＴＣＧ－３＇弓形虫上游引物： ５＇－ＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＡＴＧＡＡＧＴＧＡＧＧＡＡＣＧＧＴＣ－３＇弓形虫下游引物： ５＇－ＧＡＧＧＣＡＴＴＣＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＣＧＣＣＣＡＴＴＧ－３＇ 。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杜爱芳，张德福，周前进，王素华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86
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