本发明专利技术公开了一种分离、纯化中药整体效应分子组的生物模拟集成技术，其特征在于包括下述模块中的至少2种：模块1、模拟胃部消化作用的胃酶转化模块；模块2、模拟十二指肠消化作用的胰酶转化模块；模块3、模拟小肠的肠内菌转化模块；模块4、模拟肠壁吸收作用的膜滤纯化模块。本发明专利技术制备的提取物具有更明显的药效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种分离、纯化中药效应成分的方法，特别涉及一种利用酶解、微生物转化、超滤等若干生物模拟技术的集成，用于分离、纯化中药整体效应分子组的方法。
技术介绍
中药是在中医理论指导下，以辨证论治为依据，针对证候确定的治则治法，依据那些经过特殊方法炮制加工而成的各种不同药材的性味、归经、功效等，按照君、臣、佐、使原则配伍，主要用于对“证”治疗的药物。因此，中药是特指的，它与天然药物、动植物及矿物药等有着本质上的不同。中药现代化必须植根于中医现代化的土壤才能有生命力。应当在遵循中医药基本理论和传统用药原则的前提下，合理采用恰当的现代科技手段，较传统分离方法更合理、有效地分离、纯化中药，达到提高药效，创建具有自主知识产权的新型中药复方制剂的目的。整体调节是几千年来中医辨证论治的精髓，坚持标本兼治原则，追求的是机体的阴阳平衡和协调。中药的“君、臣、佐、使”配伍就是以实现此种整体平衡的调节效应为目标， 这里我们将这种中药方剂的整体调节效应简称为中药的整体效应。本专利技术认为在目前尚难对中药化学成分及其药性等准确定位的情况下，方剂的整体效应只能依靠尽可能多的保持其中能被吸收的化学物质来实现，尤其不能忽视的是其中大量低丰度的化学物质及微量元素，他们很可能是方剂整体效应中具有四两拨千斤的重要效应成分或减毒增效成分。胃肠道的消化、吸收作用对中药方剂疗效有着重要影响，对于这一关键环节必须充分重视。本专利技术认为除部分胃肠道药物外，中药方剂中真正的药物分子或前体即效应分子应是存在于通过消化道吸收后进入血液循环前(即进入门静脉)的那些物质之中，它们才是中药方剂整体效应的物质基础或方剂的效应物质。在此将某一中药或中药方剂中能被吸收的全部效应分子称之为该中药或中药方剂的整体效应分子组。基于以上思考，本研究从中药传统用药习惯和整体效应理论出发，通过体外模拟中药汤剂经酶及菌群作用并吸收入血的整个过程，将酶解、微生物转化及超滤等若干生物工程技术模块进行集成，建立一套以纯化中药、提高药效、改变传统给药方式为主要目的的标准化分离纯化中药整体效应分子组的技术模块集成，为建立中药制剂原料生产、制备药效研究样品的通用技术平台提供基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种更加有效、合理的分离、纯化中药的方法，该方法较传统分离方法有更的药效。本专利技术的目的通过如下技术方案实现本专利技术提供一种分离、纯化中药整体效应分子组的生物模拟集成技术(一种提取中药有效成分的方法)，包括下述至少2种模块1、模拟胃部消化作用的胃酶转化模块；2、模拟十二指肠消化作用的胰酶转化模块；3、模拟小肠的肠内菌转化模块；4、模拟肠壁吸收作用的膜滤纯化模块；所述模块1的方法为将中药提取物或提取液加入水，调节水溶液PH值为 1. 7士0. 5后加入适量胃酶，在35-50°C常压状态搅拌反应0. 5-4小时；所述模块2的方法为模块1完成后，调节药液PH值为7. 5士0. 5后加入适量胰酶，在35-50°C常压状态搅拌0. 5-4小时；所述模块3的方法为模块2完成后，调节药液pH值为7. 5 士0. 5后加入适量肠内菌酶，在35-50°C常压状态搅拌0. 5-36小时；所述模块4的方法为模块3完成后，过滤，滤液摄氏4度存放过夜，吸取上层清液进一步采用超滤分离纯化，收集超滤液，即得中药整体效应分子组；上述4个模块可以根据中药的组成及胃肠道对其的作用特点进行灵活组合。上述模块1中的胃酶可以由其他酶代替，如胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、凝乳酶、组织蛋白酶等。上述模块2中的胰酶可以由其他酶代替，如糜蛋白酶、羧肽酶、肠激酶、麦芽糖酶、 乳糖酶、淀粉酶、脂酶等。上述模块3中肠内菌酶可由人肠道中混合菌群或其他具有转化中药成份功能的细菌中的一种或几种细菌的混合物替换，包括但不限于普通拟杆菌、青春双歧杆菌、单形拟杆菌、颊拟杆菌、消化拟杆菌、两歧双歧杆菌、双歧杆菌、消化球菌。上述模块3中分离(制备)肠内菌酶所用的肠内菌为人肠道中混合菌群或其他具有转化中药成份功能的细菌中的一种或几种细菌的混合物，包括但不限于普通拟杆菌、青春双歧杆菌、单形拟杆菌、颊拟杆菌、消化拟杆菌、两歧双歧杆菌、双歧杆菌、消化球菌等。上述模块3中分离肠内菌酶所用的肠内菌培养基根据细菌生长需要选择合适的培养基，包括但不限于胰蛋白胨2-15g、消化血清粉5-20g、酵母浸膏l-10g、牛肉膏1 一 5g、 牛肝浸出粉0. l_2g、葡萄糖l_5g、磷酸二氢钾l_5g、氯化钠l_5g、可溶性淀粉l-10g、L-2半胱氨酸盐酸盐0. I-Ig或硫代乙醇酸钠0. Ι-lg，加蒸馏水至1L，调PH至7. 2 士0. 5配方中的一种或几种。上述模块3中肠内菌酶的分离方法为菌液在3000-15000rpm、0-25°C条件下离心 5-20min，倾去上清液，即得肠内菌酶。上述模块4中过滤优选常规过滤，包括但不限于离心除杂或常压过滤中的板框过滤器或纱布过滤；离心除杂优选500-7000r/min。上述模块4中超滤技术包括超滤或反渗透，利用其不同孔径或截流分子量的各种材料和装置对药液进行纯化；超滤膜孔径优选5，000-500, 000分子量。上述模块4中中药整体效应分子组为超滤液，也可将其经常规浓缩、干燥处理后的浓缩液或浸膏，也可以将浓缩液或浸膏加入常规辅料，按照常规工艺进一步制成临床可接受的制剂，包括但不限于口服液、片剂、胶囊、注射剂等。上述模块1中优选加入5-50倍浸膏重量的水，调节水溶液pH值为1. 7士0. 5(或所用酶的最适PH)后加入0. 005-0. 02倍浸膏重量份的胃酶，在35-50°C常压状态搅拌0. 5-4小时；上述模块2中优选调节药液pH值优选为7. 5士0. 5(或所用酶的最适pH)后加入 0. 005-0. 02倍浸膏重量的胰酶，在35-50°C常压状态搅拌0. 5-4小时；上述模块3中优选加水至25-250倍浸膏重量，调节药液pH值为7. 5 士0. 5后加入0. 02-0. 10倍浸膏重量份的肠内菌酶，在35-50°C搅拌0. 5-36小时；上述模块4中优选用5，000-500, 000分子量孔径的超滤膜柱纯化转化产物。本专利技术具体提供一种桂枝汤生物提取方法，该方法包括如下步骤步骤1 桂枝汤用常规方法提取，得浸膏。步骤2 取Ig浸膏，加入IOmL水，调pH值至1. 7，加入胃酶10mg，36_45°C水浴，振摇反应l-2h ；步骤3 反应完成后，调pH值至7. 5，加入胰酶10mg，36_45°C水浴，时时振摇反应 l-2h ；步骤4 反应完成后，加水至50mL，调pH值至7. 5，加入蛋白质含量为65mg的肠内菌酶，42 °C水浴，振摇反应12-24h ；步骤5 反应完成后，3000rpm离心或者滤纸过滤，将滤液用分子量为100，000的中空纤维超滤柱超滤，超滤产物即所得桂枝汤汤剂整体效应分子组。本专利技术从传统中药汤剂口服方式出发，按照中医药整体效应理论，模拟胃肠道消化吸收过程，综合利用酶解、微生物转化、超滤等若干生物工程技术模块进行集成，建立了一套系统的分离、纯化中药整体效应分子组的技术集成平台。本专利技术充分体现了中医辨证施治及中药复方配伍的科学内涵，可基本上改变现有绝大部分传统中药制剂技术的落后状态，也为实现大规模筛选中药方剂配伍本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种分离、纯化中药整体效应分子组的生物模拟集成技术，其特征在于包括下述模块中的至少２种：模块１、模拟胃部消化作用的胃酶转化模块；模块２、模拟十二指肠消化作用的胰酶转化模块；模块３、模拟小肠的肠内菌转化模块；模块４、模拟肠壁吸收作用的膜滤纯化模块；所述模块１的方法为：调节药液ｐＨ值为１．７±０．５后加入适量胃酶，在３５－５０℃常压状态搅拌反应０．５－４小时；所述模块２的方法为：调节药液ｐＨ值为７．５±０．５后加入适量胰酶，在３５－５０℃常压状态搅拌０．５－４小时。所述模块３的方法为：调节药液ｐＨ值为７．５±０．５后加入适量肠内菌酶，在３５－５０℃常压状态搅拌０．５－３６小时。所述模块４的方法为：转化药液过滤，滤液摄氏４℃存放，吸取上层清液采用超滤分离纯化，收集超滤液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：宋剑南，柏冬，
申请(专利权)人：中国中医科学院中医基础理论研究所，
类型：发明
国别省市：11
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