一种含有β-1,3-D-葡聚糖的提取物，在28-30℃条件下，采用β-1,3葡聚糖苷酶，对绣球菌水解3小时，使其中所含有的葡聚糖部分水解而得，所含的β-1,3-D-葡聚糖的分子量为20万-50万道尔顿。本发明专利技术制得的提取物具有显著抑制肿瘤、防癌抗癌功能，能调节血糖、辅助治疗糖尿病，降低血脂和胆固醇、改善心脑血管疾病，具有抗疲劳、延缓衰老、抗感染、抗过敏及嫩肤、祛斑、美白的作用，可用于制成各种功能性保健食品或药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种采用定向控制酶解技术获得的提取物，尤其涉及一种利用β -1，3 葡聚糖苷酶，对绣球菌中所含有的葡聚糖进行部分水解后而获得的含有β -1，3-D-葡聚糖的提取物，及其在抗肿瘤、免疫调节及辅助治疗糖尿病、心脑血管疾病等方面的应用。
技术介绍
绣球菌(Sparassis crispa(ffulf. )Fr.)，又名绣球菇，绣球蕈，花椰菜菇，花瓣茸， 是一种珍稀名贵的食用菌。绣球菌在分类上属无隔担子菌亚纲(Holobasidiomycetidae)、 无裙菌巨(Aphyllophorales)、绣球菌禾斗(Sparassidaceae)、绣球菌属(Sparassis crispa Fr.)。绣球菌品种很多，从目前调查发现，绣球菌科至少有7个属，在我国野生绣球菌品种大约有10多个品种，由于产地不同，气候条件不一样，各品种的颜色、外观和营养成分各有差异。它在食用菌中，其价值仅次于冬虫夏草、羊肚菌和块菌等珍品。绣球菌子实体一年生，初肉质，后期稍带韧性，老时脆硬，近白色或浅黄色，从粗短的柄上多次分支，直立，末端枝扁平，花瓣状酷似银杏叶相互交错、扭曲、密集成丛，很像绣球花，故而得名。直径15-30cm 或更大，最大的超过20kg。绣球菌一般生于夏秋季松树等针叶林中的地上，生长季节为 7-10月，着生于树干基部的腐朽树根或树桩上，绝大部分生长在地上，喜欢温差刺激、喜欢阳光，生长速度比较缓慢，成熟期较长。绣球菌分布在黑龙江、吉林、河北、云南、陕西、四川、 甘肃、西藏、广东、福建等省，海拔一般在2500-3700m范围生长。绣球菌原为野生珍稀药食用菌，20世纪90年代在日本首获栽培成功，并进入商业性生产，韩国为绣球菌人工栽培成功的第2个国家，国内学者经过20多年的研究，也获人工栽培成功，成为第3个人工栽培成功的国家。绣球菌的主要化学成分为葡聚糖，这也是其主要活性成分。一般绣球菌中葡聚糖的含量可达到40%以上，高的甚至可达到50%，其结构大多为β-1，6糖苷键分支的 β -1，3-D-葡聚糖，绣球菌中的葡聚糖70%以上是β -1，3-D-葡聚糖，可以说是菇类之最。因绣球菌中 β-1，3-D-葡聚糖功效卓越(Food Rev. Int. , 1995，11，7-12 ；Cancer Research, 2003, 63, 9023-9031 ；Food Funct. , 2010, 1， 149-55 ；Medicina (Kaunas). 2007，43，597-606 ；doi:10. 3109/09637486. 2011. 566849)，价格昂贵，被誉为“免疫金牌”。近年来，研究发现，绣球菌具有以下生理活性1.抗肿瘤活性绣球菌中β-1，3-D-葡聚糖会活化多种免疫细胞如刺激巨噬细胞、T细胞、B细胞以及自然杀手细胞等，以达到抑制肿瘤生长和阻止癌细胞转移的效果，从而提高肿瘤患者的生存率，延长生存期，改善症状和提高生活质量。绣球菌中β-1，3-D-葡聚糖还会引发补体的活化反应，显著提升靶向治疗药物的治疗效果。2.降血糖作用绣球菌中β-1，3-D-葡聚糖具有β-1-3-葡聚糖的结构主链及β-1-6-葡聚糖结合的支链，具有降血糖的功效。3.降胆固醇作用绣球菌中β-1，3-D-葡聚糖，抑制肠管膜吸收胆固醇及其衍生物，从而具有降低胆固醇的作用。4.嫩肤、祛斑和美白作用绣球菌能促进胶原蛋白的产生，从而起到嫩肤、祛斑和美白作用。5.提高造血和提高免疫力的作用绣球菌可以提高机体的造血功能，从而提高机体的免疫力，减少化疗带来的毒副反应， 提高化疗的治疗效果。除此之外，绣球菌还具有激活白细胞和相关免疫系统的作用，从而起到抗疲劳和延缓衰老的作用。6.抗发炎作用绣球菌中β -1，3-D-葡聚糖，具有非特异性免疫增强活性，已获得证实具有抗炎作用与抗过敏反应作用。7.抗血栓作用绣球菌中含有抗血栓物质，可避免高血压患者所引起的脑血管阻塞、冠状血管血栓及发生动脉硬化等作用。Ohno通过化学、酶和NMR分析发现这种葡聚糖每隔三个单元就有一个分支。葡聚糖的生物活性与葡聚糖的化学结构、构象、分子量和物理性质有关。β -1，6糖苷键分支的 β-1，3-D-葡聚糖活性最强，β-1，6主链的D葡聚糖基本没有活性。葡聚糖在溶液中，根据溶液环境，以随机卷曲结构，单螺旋结构或三股螺旋结构存在，三股螺旋结构最稳定，活性也最强，其他两种结构会向三股螺旋结构的稳定结构转化。葡聚糖进入人体后，只被部分水解为小分子，在小肠里被迅速吸收，再被转移到组织器官，然后被从体内清除。经过二十多年的研究，日本的Mizimo和他的合作者开发出一套可靠的从食用菌子实体或者菌丝体中提取、分离和纯化多糖的方法，先用80%的乙醇除去低分子量杂质，再依次连续用沸水提取3小时，2%草酸铵80°C提取6小时和5%氢氧化钠80°C提取6小时。 第一道提取出水溶性多糖，其他两道提取出水不溶性多糖。这些多糖再用乙醇分级沉淀法、 酸沉淀法、离子交换色谱、凝胶色谱和亲和色谱等方法进行分离纯化。一般，DEAE离子交换色谱将中性多糖从酸性多糖中分离出来。中性多糖再用凝胶色谱和亲和色谱分为吸附的 α-葡聚糖和不吸附的β-葡聚糖，酸性多糖采用相同的步骤，用IM NaCl洗脱，得到纯化多糖。此方法是目前食用菌多糖提取所采用的通用方法，利用此步骤提取纯化多糖，可以把不同溶解性的多糖分离，把中性和酸性多糖分离，再进而把多糖分离成α-葡聚糖和β-葡聚糖，利用凝胶色谱，也可以分离出不同分子量的葡聚糖，但步骤较繁琐，对于葡聚糖中糖苷键的连接方式，如1，4、1，3和1，6连接不能有效区分。Naohito Ohno公开的提取绣球菌中多糖的方法为先用乙醇4°C脱脂2天，再用水高压121°C提取2小时，提取出的多糖再用1倍体积和4倍体积的乙醇沉淀，残渣用 10% NaOH/5%尿素，在4°C提取2天，提取液充分透析后，干燥。干燥物用8M尿素溶解，用 DEAE Sephedex A25(C12)分离，洗脱液充分透析后冷冻干燥，得到绣球菌多糖，多糖纯度为 73.6%。此方法得到的绣球菌多糖为α-葡聚糖和葡聚糖的混合物，且分子量较大，通常与天然多糖的分子量一致。中国专利技术专利申请200610108522. 9公开了一种绣球菌ΜΗ-3菌株的提取物及其制备方法和用途，该申请对绣球菌的子实体分别用热水、冷碱水和热碱水进行提取后，得到绣球菌β -1，3葡聚糖，但其纯度较低，分子量也较大，在200万左右。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，采用定向控制酶解技术对绣球菌中所含有的葡聚糖进行部分水解后而获得的含有β -1，3-D-葡聚糖的提取物。本专利技术的另一个目的在于提供一种含有β -1，3-D-葡聚糖的提取物，在抗肿瘤、 免疫调节和提高造血功能等方面的应用。本专利技术提供的一种含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，采用如下提取方法在条件下，采用β -1，3葡聚糖苷酶，对绣球菌水解3小时，使其中所含有的葡聚糖部分水解而得。本专利技术的绣球菌为绣球菌子实体，或将绣球菌子实体切割后的子实体块、或将绣球菌子实体经研磨而成的粉末。为使提取物更好的发挥其生理活性，如但不仅限于，抗肿瘤活性、降血糖作用、降胆固醇作用、嫩肤本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种含有β－１，３－Ｄ－葡聚糖的提取物，其特征在于采用如下提取方法：在２８－３０℃条件下，采用β－１，３葡聚糖苷酶，对绣球菌水解３小时，使其中所含有的葡聚糖部分水解而得。
【技术特征摘要】
1.一种含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，其特征在于采用如下提取方法在条件下，采用β -1，3葡聚糖苷酶，对绣球菌水解3小时，使其中所含有的葡聚糖部分水解而得。2.根据权利要求1所述的含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，其特征在于所述绣球菌为平均粒径小于60-80目的绣球菌子实体粉末。3.一种含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，其特征在于采用如下提取方法将绣球菌粉碎成60-80目的粉末，然后加入所述绣球菌5倍重量的ρΗ7. 3的磷酸缓冲液，搅拌调制成浆状物料，于121°C灭菌30分钟，之后将所述浆状物料的温度冷却至 28-300C ；接着加入β_1，3葡聚糖苷酶，于观-301间隙搅拌保温水解3小时，最后将水解产物于40-50°C真空干燥，控制水分达到12%以下即得所述提取物；所述β -1，3葡聚糖苷酶的加入量按每毫升所述浆状物料加入2单位的酶计算。4.根据权利要求3所述的含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，其特征在于所述提取物中含有30%-45%的β -1，3-D-葡聚糖。5.一种含有β-1，3-D-葡聚糖的提取物，其特征在于采用如下提取方法将绣球菌粉碎成60-80目的粉末，然后加入所述绣球菌5倍重量的ρΗ7. 3的磷酸缓冲液，搅拌调制成浆状物料，于121°C灭菌30分钟，之后将所述浆状物料的温度冷却至接着加入β-1，3葡聚糖苷酶，于28-30°C间隙搅拌保温水解3小时，得水解产物； 向所述水解产物加入绣球菌7倍重量的水，煮沸提取2-3小时，过滤，所得滤渣再加入所述绣球菌10倍重量的水，煮沸提取2-3小时，过滤后，合并滤液；将所述合并滤液浓缩至总体积的1/4-1/5后，加入乙醇，直至乙醇浓度达到65v/v%-75v/v%，静置沉淀2_3小时，离心并收集上清液，再向上清液中加入乙醇，直至乙醇浓度达到85v/v%-90v/v%，静置沉淀2-3 小时，离心并收...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕正兵，董淮海，叶甫云，
申请(专利权)人：上海科爱生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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