本发明专利技术公开了属于生物农药领域的一种裂褶菌多糖提取物及其制备方法，按照比例将裂褶菌菌丝粉加入到热水中，在100℃水浴中浸提8～10小时，用纱布过滤，所得滤渣在按照相同方法再浸提一次，合并两次滤液，真空浓缩，再与5倍体积的95％乙醇混合，于4℃下静置过夜，离心，将沉淀用乙醇洗涤2次，60℃烘干即可。本发明专利技术还公开了裂褶菌多糖提取物在防治烟草花叶病毒病上的用途。本发明专利技术裂褶菌多糖提取物对烟草花叶病毒防治效果好，对烟草花叶病毒的抑制率可达到70％以上，为烟草花叶病毒病的防治提供了一种新的途径；其次，本发明专利技术为天然提取物，对人类和环境无害；此外，本发明专利技术制备方法简单，成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物病害防治领域，具体地说涉及裂褶菌多糖提取物在防治烟草花叶病毒病上的用途。
技术介绍
烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)能侵染爺科、葫芦科、十字花科等300多种植物，是危害严重的病毒之一。防治烟草花叶病毒病的主要方法是培育抗病品种和化学药剂，育种手段由于抗病基因来源少而受到限制，化学药剂对烟草花叶病毒病的防治不仅效果不理想，而且会造成环境污染，因而其应用也受到限制。因此，环境损害小且抗病毒活性高的植物源农药成为研究的热点。裂裙菌(Schizophyllum commune Fr.)又称白参、树花,属于真菌门，担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、裂褶菌科、裂褶菌属。具有较高营养和药用价值。裂褶菌广布于世界各地，我国大部分地区都有分布。裂褶菌多糖具有抗癌、抗菌等多种生理活性，如专利申请《具有抗癌效果的蘑菇多糖体组合物及其制备方法》(公开号CN101766644A)公开了包括裂褶菌多糖在内几种蘑菇多糖组合物具有提高免疫活性和促进细胞因子的作用；《免疫刺激剂》(公开号CN1798563A)公开了裂褶菌多糖在内的多糖复合体作为免疫刺激剂的用途。经检索，裂褶菌多糖主要应用于人的医学领域，在抗植物病毒方面的应用尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种用于裂褶菌多糖提取物。本专利技术另一目的在于提供上述裂褶菌多糖提取物的制备方法。本专利技术第三目的在于提供上述裂褶菌多糖提取物在防治烟草花叶病毒病上的用途。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下一种裂褶菌多糖提取物，按照如下方法制备(I)按照裂褶菌菌丝粉和水之间Ig 10_20mL的比例将裂褶菌菌丝粉加入到90°C以上的热水中，然后在100°C水浴中浸提8 10小时，再用二层纱布过滤，得到滤液和滤渣；(2)按照滤渣和水之间Ig 10-20mL的比例将步骤⑴所得滤渣加入到9(TC以上的热水中，然后在100°c水浴中浸提8 10小时，再用二层纱布过滤，收集滤液；(3)合并步骤(I)和步骤(2)所得滤液，真空浓缩至原体积的1/20 1/50，再与5倍体积的95%乙醇混合均匀，于4°C下静置过夜，5000rpm下离心lOmin，倒掉上清液，沉淀为白色纤维状；将所得沉淀用75%乙醇洗涤2次，60°C烘干至恒重，即得裂褶菌多糖提取物。 上述裂褶菌多糖提取物的制备方法，按照如下步骤进行(I)按照裂褶菌菌丝粉和水之间Ig 10_20mL的比例将裂褶菌菌丝粉加入到90°C以上的热水中，然后在100°C水浴中浸提8 10小时，再用二层纱布过滤，得到滤液和滤渣；(2)按照滤渣和水之间Ig 10_20mL的比例将步骤⑴所得滤渣加入到90°C以上的热水中，然后在100°c水浴中浸提8 10小时，再用二层纱布过滤，收集滤液；(3)合并步骤(I)和步骤(2)所得滤液，真空浓缩至原体积的1/20 1/50，再与5倍体积的95%乙醇混合均匀，于4°C下静置过夜，5000rpm下离心lOmin，倒掉上清液，沉淀为白色纤维状；将所得沉淀用75%乙醇洗涤2次，60°C烘干至恒重，即得裂褶菌多糖提取物。裂褶菌菌丝粉可通过将裂褶菌烘干、粉碎、过60目筛而得，裂褶菌可于市场上购买。上述裂褶菌多糖提取物在防治烟草花叶病毒病上的应用。本专利技术裂褶菌多糖提取物的使用方法，将裂褶菌多糖提取物用水稀释成浓度为O.2mg/mL的溶液，喷施于3 5叶期的烟草或辣椒等植物的叶片上。本专利技术具有的优点(I)本专利技术裂褶菌多糖提取物对烟草花叶病毒防治效果好，在喷施烟草72小时后，接种烟草花叶病毒，对烟草花叶病毒的抑制率可达到70%以上，为烟草花叶病毒病的防治提供了一种新的途径；(2)本专利技术裂褶菌多糖提取物属于天然提取物，对人类和环境无害，属于环境友好的生物农药；(3)本专利技术裂褶菌多糖提取物制备方法简单，成本低。具体实施方式实施例1裂褶菌的培养`和菌丝粉的制备按照如下方法进行(I)母种活化将裂褶菌母种转接在PDA固体培养基(PDA固体培养基的组成成分及其重量百分比为马铃薯淀粉20%、葡萄糖20%、琼脂20%、其余为水)上活化，在28°C培养10天；(2) 一级菌种制备将步骤(I)得到的平板菌丝切成小于Imm的小块，按照O. 5g菌丝/IOOml的接种量将裂褶菌菌丝转入装有IOOml液体发酵培养基(液体发酵培养基的组成成份及其重量百分比为可溶性淀粉4 %、葡萄糖4 %、小麦粉2 %、玉米粉2 %、酵母膏O.3%、黄豆粉 O. 5%、蛋白胨 O. 2%,KH2PO4IMgSO4O. 5%,VB1O. 01%，其余为水)的 500ml摇瓶中，于28°C、240rpm/min条件下进行发酵培养5天，获得一级菌种。(3)发酵培养按照体积百分比为10%的接种量将步骤(2)得到的一级菌种培养液接种到装有IOOml步骤(2)所述液体发酵培养基的500ml摇瓶中，于28°C、240rpm/min条件下进行发酵培养6天，抽滤、收集裂褶菌菌丝，烘干、粉碎，过60目筛，得到裂褶菌菌丝粉。实施例2裂褶菌多糖提取物的制备按照如下方法进行(I)将裂褶菌菌丝粉IOg加入到IOOmL 98°C的热水中，在100°C水浴中浸提8小时，过滤得到滤液和滤渣；(2)将步骤⑴所得滤渣加入到IOOmL 98°C的热水中，在100°C水浴中浸提8小时,过滤,收集滤液；(3)合并步骤⑴和⑵的2次滤液，真空浓缩至5mL，与25mL体积95 %乙醇充分混合，4°C下静置过夜，5000rpm离心lOmin，倒掉上清液，沉淀为白色纤维状，用75%乙醇洗涤沉淀2次，60°C烘干至恒重，称重为1. 12g。多糖含量的测定恩酮-硫酸测定法配制试剂葡萄糖标准液100ug/mL(葡糖糖粉末需80度烘干至恒重后配制)，容量瓶定容。蒽酮试剂0. 2g蒽酮溶于IOOmL浓H2SO4中，棕色容量瓶定容。当日配制使用。制作标准曲线①分别吸取浓度为100ug/mL葡萄糖标准液0，1.0,2.0,3.0,4.0,5. OmL,置于50mL容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，精确吸取上述标准溶液各1. OmL置于具塞试管中，于冰水浴中加入蒽酮试剂4. OmL,摇匀,放置5min后,置于沸水浴中加热IOmin,用冰浴冷却至室温，在620nm波长下，以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖浓度(ug/mL)为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。②供试液的制备及测定方法将烘干的多糖用适量的水溶解，每个样品平行取三份样液各3mL，按sevag法(氯仿正丁醇=5 I)除蛋白后转入50mL容量瓶中定容，即得供试液三份，空白管以等量蒸馏水取代提取液。吸取ImL已稀释的提取液于试管中，按制作标准曲线的方法测定吸光值，根据A620平均值在标准曲线上查出多糖的浓度(ug/mL)，再换算出样品中多糖的质量(g)。结果通过恩酮-硫酸测定法制作的标准曲线计算出本试验样品中多糖含量为O. 342g。实施例3裂褶菌多糖提取物的制备按照如下方法进行(I)将裂褶菌菌丝粉12g加入到180mL 95°C的热水中，在100°C水浴中浸提9小时，过滤，得到滤液和滤渣；(2)将步骤(I)所得滤渣加入到180mL 95°C的热水中，在100°C水浴中浸提9小时,过滤,收集滤液；(3)合并步骤⑴和⑵的2次滤本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种裂褶菌多糖提取物，其特征在于按照如下方法制备：（１）按照裂褶菌菌丝粉和水之间１ｇ∶１０－２０ｍＬ的比例将裂褶菌菌丝粉加入到９０℃以上的热水中，然后在１００℃水浴中浸提８～１０小时，再用二层纱布过滤，得到滤液和滤渣；（２）按照滤渣和水之间１ｇ∶１０－２０ｍＬ的比例将步骤（１）所得滤渣加入到９０℃以上的热水中，然后在１００℃水浴中浸提８～１０小时，再用二层纱布过滤，收集滤液；（３）合并步骤（１）和步骤（２）所得滤液，真空浓缩至原体积的１／２０～１／５０，再与５倍体积的９５％乙醇混合均匀，于４℃下静置过夜，５０００ｒｐｍ下离心１０ｍｉｎ，倒掉上清液，沉淀为白色纤维状；将所得沉淀用７５％乙醇洗涤２次，６０℃烘干至恒重，即得裂褶菌多糖提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周莹，李兴红，燕继晔，严红，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。