本发明专利技术涉及一种miR-200b作为诊断分子标志物在制备诊断炎症性肠病产品中的应用，所述的miR-200b具有SEQIDNO.12所述的核苷酸序列。本发明专利技术还提供miR-200b在制备治疗炎症性肠病肠壁纤维化药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术探讨了miR-200b在肠道纤维化发病机制中的作用，表明EMT在IBD纤维化过程中发挥了重要作用，进一步的研究结果显示miR-200b在IBD患者血清中异常表达，且miR-200b具有对抗IBD纤维化的作用，为IBD纤维化疾病提供了一种新的诊断分子标志物和有效新药。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微小RNA的应用，具体地说，是微小RNA-200b (miR_200b)在制备诊断炎症性肠病的产品和治疗炎症性肠病肠壁纤维化药物中的应用。
技术介绍
炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)主要是指两种慢性疾病引起的肠炎溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’ s Disease, CD)0肠壁纤维化是炎症性肠病进展的主要并发症之一，常常需要手术治疗，严重影响患者的生活质量。然而，其病理机制目前仍不清楚。溃疡性结肠炎顾名思义主要发病在结直肠。克罗恩病最常发生在小肠/或结肠， 但是其可以发病在从口到肛门的任何部位。纤维化是肠道长期慢性炎症的主要并发症之一，其可发生在⑶和UC中，但在⑶更为普遍。严重纤维化可导致肠腔狭窄或阻塞，需要手术干预治疗，给病人带来痛苦。然而，目前还没有抗IBD纤维化的药物获得批准或应用。临床上，对IBD的抗炎治疗不能够改善或者缓解肠纤维化。上皮间质转化(EMT)是一个生物过程，使极化上皮细胞经过多个生化变化，使其能够转变为间质细胞。EMT在纤维化的进程中发挥的作用越来越明显。EMT在肾，肺，肝纤维化中的重要作用已经得到了证明。微小RNA (microRNA, miRNA)是非编码RNA，在转录水平上负调控的靶基因的表达。有越来越多的证据表明，miR-200b在不同的生物和病理过程中发挥重要作用。最近开创性的研究建立了 miR-200b和EMT的关键联系。研究表明miR_200b通过提高钙粘蛋白 E-cadherin表达来维持上皮细胞的表型。中国专利文献CN :101182577A公开了一种胃癌组织的微小RNA探针及其检测方法，探针的序列由化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段和延伸臂片段组成，寡聚核苷酸编码片段包括微小RNA :haS-miR-200b，可作为胃组织发生癌变的一种诊断标志。2010年，夏伟等研究得出miR-200b能够通过改变WASF-3的表达水平抑制膀胱癌细胞系T24的迁移能力(详见夏伟等.Mir-200b抑制膀胱癌细胞T24的迁移.军事医学科学院院刊， 2010, (0 . )。2011年，杜英等指出微小RNA-200b可能参与了子宫内膜癌的发生、发展过程，起到癌基因的作用，其高表达可以作为一个早期筛查的分子标记物(详见杜英等.微小RNA-200b的异常表达与子宫内膜癌的关系.浙江医学，2011，33(02).)。但是关于miR-200b在治疗炎症性肠病纤维化疾病中的应用目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种miR_200b在制备诊断炎症性肠病产品中的应用。本专利技术的另一的目的是，提供一种miR_200b作为诊断分子标志物在制备治疗炎症性肠病纤维化疾病药物中的应用。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是miR-200b在制备诊断炎症性肠病产品中的应用，所述的miR-200b具有SEQ ID NO. 12所述的核苷酸序列。所述的炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是miR-200b在制备治疗炎症性肠病肠壁纤维化药物中的应用，所述的miR-200b具有SEQ ID NO. 12所述的核苷酸序列。所述的炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。本专利技术优点在于本专利技术探讨了 miR-200b在肠道纤维化发病机制中的作用，表明EMT在IBD纤维化过程中发挥了重要作用，进一步的研究结果显示miR-200b在IBD患者血清中异常表达，且 miR-200b具有对抗IBD纤维化的作用，为IBD纤维化疾病提供了一种新的诊断分子标志物和有效新药。附图说明附图1是免疫组化检测EMT和纤维化标志物在克罗恩病中的表达。在所有11个⑶ 石赌标本中 E-cadherin 染色(B)显著下降，同时，N-cadherin (C), α - SMA (D), Vimentin (E)染色增加明显。形态学变化显示在(Α)。(放大倍数Χ 200)。附图2是免疫组化检测EMT和纤维化标志物在溃疡性结肠炎的表达。在所有11个 UC石蜡标本中Ε-cadherin染色(B)显著下降，显著下降，同时，N-Cadherin (C)，α- SMA (D), Vimentin (E)染色增加明显。形态学变化显示在(Α)。(放大倍数X 200)。附图3是荧光定量PCR检测EMT和纤维化标志物在克罗恩病中的表达。 E-cadherin在⑶病人组织的表达量显著性减少，而vimentin，α-SMA表达量却明显增加。附图4是荧光定量PCR检测EMT和纤维化标志物在溃疡性结肠炎组织里的表达。 E-cadherin在UC病人组织的表达量相比比对照组显著性减少，而vimentin，α -SMA表达量却明显增加，并且在各个组织部位中的表达量也不相同。附图5是miR-200b在CD和UC的血清中表达量增加。miR_200b，而不是miR_200a 同时在CD (N=12)和UC (N=IO)病人血清中高表达(P<0. 001)。UC和CD之间没有显著差异(ρ>0· 05)。附图6是miR-200b在CD和UC的组织中表达量增加。miR_200a和miR_200b同时在病理组织中表达升高，但是miR-200a升高的倍数不具有显著意义，这和在血清中研究结果是一致的。附图7是TGF β 1体外诱导肠上皮细胞纤维化。Real-time PCR和western-blot analysis检测结果表明 TGF β 1 能够诱导 N_cadherin、Vimentin、fibronectin、a_SMA增加， 但是抑制了 E-cadherin的表达。这表明TGFiU体外成功诱导肠上皮细胞纤维化和EMT。附图8是miR-200b体外改善肠上皮细胞纤维化。miR_200b能够对抗TGF β 1诱导的纤维化，对 N-cadherin、Vimentin、fibronectin、a-SMA 进行抑制，而促进 E-cadherin 的表达(* p<0. 05, * * p<0. 01)(图中所示^Bl、ZEB2为E-cadherin转录抑制因子， ZEB1、2 全称为 E-box-binding homeobox 1 、2)。具体实施例方式下面结合附图对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。 实施例一、材料和方法1.样本准备22例IBD石蜡包埋标本，其中包括11例⑶样品和11例UC样本。12例UC、12例⑶、 16例健康血清样本、4例⑶和10例UC新鲜组织样本冷冻在_80°C冰箱里。见表1，表1是病理样本信息。表1病理样本信息权利要求1.miR-200b作为诊断分子标志物在制备诊断炎症性肠病产品中的应用，所述的 miR-200b具有SEQ ID NO. 12所述的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。3.miR-200b在制备治疗炎症性肠病肠壁纤维化药物中的应用，所述的miR-200b具有 SEQ ID NO. 12所述的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．ｍｉＲ－２００ｂ作为诊断分子标志物在制备诊断炎症性肠病产品中的应用，所述的ｍｉＲ－２００ｂ具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２所述的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈颖伟，肖永陶，蔡威，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属新华医院，
类型：发明
国别省市：31
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