一种秦艽悬浮细胞的培养工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种秦艽悬浮细胞的培养工艺，取秦艽叶片诱导得愈伤组织后对其进行增殖培养，继代培养获得松散的适合悬浮培养的愈伤组织细胞系，在获得对数生长期种细胞之后，进行秦艽悬浮细胞培养，在收获细胞之后再提取生产次生代谢产物。本发明专利技术提供的秦艽悬浮细胞的培养工艺，细胞生长速度快，分散性好，所得悬浮细胞的生物量达15.23g/L.月(干细胞)，龙胆苦苷含量达0.034％。在培养液中添加诱导子之后，可提高次生代谢产物的产量：在加入黑曲霉诱导子之后，与未添加诱导子的对照组相比，龙胆苦苷的产量提高了23.99％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物细胞培养
，涉及一种秦艽悬浮细胞的培养工艺。
技术介绍
秦充为龙胆科植物秦充(GentianamacropHykgkga Pakgkg)、麻花秦充(Gentiana straminea Maxim·)、粗莲秦充(Gentiana crassicaukgis Duthie ex Burk.)或小秦充 (Gentiana dahurica Fisch.)的干燥根，主产于陕西、甘肃、四川、内蒙古等地。秦艽主要有效成分龙胆苦苷，龙胆苦苷具有镇痛、抗炎、保肝利胆、抗菌、抗病毒、抗氧化等作用，利用龙胆苦苷研究开发的二类新药——充龙胶囊已投放市场。目前龙胆苦苷多来源于秦艽和龙胆的野生或栽培药材，由于所用药材生长周期长 (3 5年)，且生长在高海拔地区，秦艽药材资源的问题限制了药效成分龙胆苦苷的开发和应用。通过细胞培养方法生产龙胆苦苷，是解决龙胆苦苷来源的有效途径。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种秦艽悬浮细胞的培养工艺，该培养方法的秦艽悬浮细胞生长速度快，分散性好，次生代谢产物含量高，尤其是龙胆苦苷含量高。本专利技术是通过以下技术方案来实现一种秦艽悬浮细胞的培本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种秦艽悬浮细胞的培养工艺，其特征在于，包括以下步骤：１）将无菌的秦艽叶片切成０．５～１．０ｃｍ２大小的碎片，然后进行愈伤组织的诱导：将秦艽叶的碎片接种于包含１．５～３．０ｍｇ／ｋｇ的２，４－Ｄ和０．３～０．６ｍｇ／ｋｇ的６－ＢＡ的ＭＳ固体培养基上，在２５～２８℃下每天连续光照１０～１６ｈ，诱导６～８ｄ；２）在诱导出愈伤组织之后，对愈伤组织进行增殖培养：将愈伤组织接种于包含０．０５～０．２ｍｇ／ｋｇ的２，４－Ｄ和０．１～１．０ｍｇ／ｋｇ的６－ＢＡ的ＭＳ固体培养基上，在２２～２８℃下黑暗培养２５～３２ｄ；３）在愈伤组织增殖培养之后，在包含０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇ的２，４－Ｄ和０．１～１．０...

【技术特征摘要】
1.一种秦艽悬浮细胞的培养工艺，其特征在于，包括以下步骤1)将无菌的秦艽叶片切成0.5 1. Ocm2大小的碎片，然后进行愈伤组织的诱导将秦艽叶的碎片接种于包含1. 5 3. Omg/kg的2，4-D和0. 3 0. 6mg/kg的6-BA的MS固体培养基上，在25 下每天连续光照10 16h，诱导6 8d ；2)在诱导出愈伤组织之后，对愈伤组织进行增殖培养将愈伤组织接种于包含0.05 0. 2mg/kg的2，4-D和0. 1 1. Omg/kg的6-BA的MS固体培养基上，在22 下黑暗培养25 32d ；3)在愈伤组织增殖培养之后，在包含0.05 0. 5mg/kg的2，4-D和0. 1 1. Omg/kg的 6-BA的MS固体培养基上，于22 ^°C、黑暗条件下继代培养，每代培养时间为25 32d， 继代培养5 8代后获得松散愈伤组织；4)按照每IOOml培养液接种4.0 6. Og的比例，将松散愈伤组织的细胞接种于包含 0. 5 2. Omg/kg的2，4-D禾口 0. 1 1. Omg/kg的6-BA的MS液体培养基中，在22 、 黑暗条件、摇床上悬浮培养12 18d，收集获得种细胞；5)按照每100ml培养液接种4.0 6. Og的比例，将处于对数生长期的种细胞接种于 pH 为 6. 5 7. 5、包含 0. 5 2. Omg/kg 的 2，4_D、0. 1 1. Omg/kg 的 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐香君，刘瑶，陈如意，王薇，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：87