一种鹿茸草悬浮细胞培养的快速繁殖方法技术

本发明专利技术研究了一种鹿茸草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养等步骤，本发明专利技术方法所制备的鹿茸草悬浮培养增长率高，生长稳定，为药用资源的开发利用提供了更直接的途径。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术研究了，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养等步骤，本专利技术方法所制备的鹿茸草悬浮培养增长率高，生长稳定，为药用资源的开发利用提供了更直接的途径。【专利说明】
本专利技术涉及鹿茸草悬浮细胞培养的快繁方法，属于生物
。
技术介绍
鹿鸾草,J1nochasmasheareri Maxim, ex Franch.et Savat.，玄参科，别名:千年艾，千重塔，瓶儿蜈蚣草等，多年生草本植物，主根木质化，茎多数，密集丛生，全体多少呈绿色，下部被少量绵毛，节间极短，有短柔毛或无毛，叶交互对生，有时互生，茎下部叶鳞片状，因节间短而互相盖迭呈覆瓦状，向上渐大，条形或条状披针形，花单生于茎上部叶腋，呈总状花序，子房长卵形，花柱顶端弯曲，柱头头状，蒴果卵形，为宿萼所包被，室背开裂，种子多数，扁椭圆形，分布于山东、江苏、安徽、浙江、江西、湖北等地，生于低山多沙山地及草丛中。全草:苦，凉。清热解毒，凉血止血，用于咳嗽，吐血，赤痢，带下，牙龈炎，乳腺炎，疖肿。目前鹿茸草尚未见人工繁殖。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是鹿茸草悬浮细胞培养的繁殖方法，本专利技术方法所制备的鹿茸草悬浮培养增长率高，生长稳定，为药用资源的开发利用提供了更直接的途径。 为解决上述技术问题，本专利技术采用下列技术方案:取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化萊处理6min,无菌水冲洗5遍,消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+lmg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26°C，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.3-0.5mg/L+KT0.2-0.3mg/L+L-谷氨酰胺6-8mmol/L+草酸钠50-100mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照55001x，光照时间14h/d，温度26。。。 采用本专利技术制备的鹿茸草细胞增殖率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。 下面将结合【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。 【具体实施方式】 实施例1取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化萊处理6min,无菌水冲洗5遍,消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+lmg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26°C，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.3mg/L+KT0.2mg/L+L-谷氨酰胺6mmol/L+草酸钠50mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照55001x，光照时间14h/d，温度26°C，悬浮细胞增长率56%。 实施例2取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化萊处理6min,无菌水冲洗5遍,消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+lmg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26°C，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.5mg/L+KT0.3mg/L+L-谷氨酰胺8mmol/L+草酸钠10mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照55001x，光照时间14h/d，温度26°C，悬浮细胞增长率57%。 实施例3取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化萊处理6min,无菌水冲洗5遍,消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+lmg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26°C，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.4mg/L+KT0.3mg/L+L-谷氨酰胺7mmol/L+草酸钠10mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照55001x，光照时间14h/d，温度26°C，悬浮细胞增长率58%。【权利要求】1.，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下: (1)取鹿茸草的叶片，进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+lmg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.3-0.5mg/L+KT0.2-0.3mg/L+L-谷氨酰胺6-8mmol/L+草酸钠50-100mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照55001x，光照时间14h/d，温度26°C。2.按照权利要求1所述的，其特征在于:步骤(I)中所述鹿茸草无菌叶片的消毒方法为，取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min,流水冲洗25min,超净工作台上0.1%氯化萊处理6min,无菌水冲洗5遍。【文档编号】A01H4/00GK104221878SQ201410540536【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日 【专利技术者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鹿茸草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：（1）取鹿茸草的叶片，进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.3‑0.5mg/L+KT0.2‑0.3mg/L+L‑谷氨酰胺6‑8mmol/L+草酸钠50‑100mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照时间14h/d，温度26℃。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，杨成东，
申请(专利权)人：南京帝道农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32