蓝莓菌根真菌（晶粒鬼伞）及其分离方法和用途技术

本发明专利技术涉及蓝莓菌根真菌（晶粒鬼伞）及其分离方法和用途，属于微生物技术领域，主要是涉及一株从长白山野生越橘属植物根系中分离获得的用于接种蓝莓的菌根真菌及其在促进蓝莓生长和提高产量方面的应用。该蓝莓菌根真菌已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，分类命名为：晶粒鬼伞（Coprinusmicaceus），通过对该真菌的应用，可以促进蓝莓根系发育，具有提高产量及坐果率、提高抗虫害作用等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，主要涉及一株从越橘属植物蓝莓根内分离获得的植物菌根真菌及其分离方法及其在促进蓝莓各阶段生长、防虫害和防冷害等方面的应用。
技术介绍
植物菌根菌是指植物根系与真菌所形成的互惠共生体即“菌根”(mycorrhizas)，是一种极为普遍的生命活动和生态现象。Frank 1885年首次拟创了 “菌根”这个术语，之后若干年一直处于平稳发展期，直到20世纪50年代，菌根学在现代分子生物学和生化技术的辅助下进入迅猛共发展期，尤其是近30年，随着新方法、新技术的不断建立，研究内容更加广泛，菌根学研究已成为一项包括多种学科相互渗透的一门边缘生物科学。菌根菌的侵染能诱导植物根系形态发生明显变化，影响菌根围各成员的相互作用。Duckett和Read (1995)研究发现Vjae/rascj^fes ericae分离物能促使假根根尖膨大，并在其细胞内形成菌丝团。菌根菌还可通过分泌H+和一些酸性化合物，直接影响到土壤化学特性。大量研究表明，菌根真菌能显著促进植物对土壤中营养物质的吸收、提高植物抗病虫害的作用。接种菌根真菌还可促进各类植物生长、提高产量和品质，并促进组培苗的生长，提高移栽成活率。蓝莓(.SemenTrigonellae )又名越桔，是杜鹃花科(Mricaceae )越橘属(Vaccinium SPP.)植物，为多年生落叶或常绿灌木，果实为浆果。在我国原产于高海拔的野生灌木，在吉林长白山分布于海拔150(Γ2400米的地区。其须根部缺少大部分植物所具有的根毛，需借助合适的菌根菌帮助其吸收水分、矿物质营养等。蓝莓的栽培种类有三大类，即高丛蓝莓、 矮丛蓝莓和兔眼蓝莓，均于美国、加拿大等地，经过育种者的驯化，其土壤习性中对于气流的要求降低，但对土壤酸性条件要求依然较高。在缺乏菌根菌的条件下，一般选择施用硫粉调节土壤PH在4左右，更适宜蓝莓生长。但硫粉的实施容易破坏土壤的微环境，对土质造成影响。通过对栽培区蓝莓菌根菌的调查，在原产地种植的蓝莓菌根化率达到80%以上， 对生长情况进行调查，菌根化的蓝莓生长好于未菌根化的蓝莓。本专利提及的菌根真菌晶粒鬼伞菌(Cb/Tri/ws micaceus),能够侵染蓝莓根系，并促进植株生长，此前还未见报道。
技术实现思路
1、专利技术目的本专利技术涉及一种蓝莓菌根真菌及其分离方法和用途，其目的在于解决以往栽培蓝莓时利用硫粉调节土壤PH时所带来的对土壤造成伤害的问题，通过对该真菌的应用，促进蓝莓生长并提高产量。2、技术方案本专利技术是通过以下技术方案来实现的一种蓝莓菌根真菌，其特征在于该真菌分类命名晶粒鬼伞(Cb/Tri/ws micaceus), 在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期2010年8月18号，保藏单位名称中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No. 4063，保藏代号为 MF002。该真菌的扩增DNA序列如下，该序列是蓝莓菌根真菌分类的分子依据 AGGGGGAATGGAATACCTATGGTGTCTTGGTTGTAGCTGGCTCCTCGGAGCATTGTGCACGCCCGCCATTTTTATCTATCCACCTGTGCACCGACTGTAGGTCTGGATGACTCTCGTGCTCTCTGAGTGCGGATGCGAGGATTGCCCTT CAACTCGGAGGTGTCTCTCCTCGAATTTCCAGGCTCTACGTCTTTTTACACACCCCAAAAGCATGATATAGAATGTA GTCAATGGGCTTGATCGCCTATAAAACACTATACAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAA CGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCT TGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATTAAATTCTCAACCTCACCCGTTTTCTGAACGGTTCTCCGAGG CTTGGATTGTGGGGGTTTGTGCAGGCTGCCTCAGCGCGGTCCGCTCCCCTGAAATGCATTAGCGAGTTCGTACTGAG CTCCGTCTATTGGTGTGATAATTATCTACGCCGTGGACAGGGTTTAGACTCGCTTCTAACCGTCCGCAAGGACAATA CCTTTGTCAATTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGA一种如上所述蓝莓菌根真菌的分离方法，其特征在于从野生越橘属植物的根际获得菌根真菌，步骤如下(1)清洗取新鲜完整的健康野生蓝莓的根，用自来水冲洗一小时，然后用无菌水冲洗 2 4次，将根转移到灭过菌的玻璃平皿中待用。(2)消毒将步骤(1)中待用的根放入体积分数70%的酒精溶液中灭菌20 40s， 无菌水冲洗3次，然后用体积分数0. 1%的升汞溶液消毒1 3min，冲洗3次，再立即放入质量百分比为1%的无菌硫化钠水溶液中浸1 3min，无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干待用。(3)培养将步骤(2)消毒后待用的根切成0. 5 lcm长的小段，置于PDA培养基平板上，25 28°C下恒温倒置培养，设5个重复培养皿，每个培养皿接3个小段。(4)纯化待菌丝生长5 7天后，用接种环挑取不同形态菌落边缘的菌丝移至新的无菌培养基上继续纯化培养，直至每一个平板培养基中只含有单一菌落，得到4个菌落。(5)筛选优势菌株将步骤(4)中得到的蓝莓菌根真菌菌落继续接种到瓶外生根的蓝莓苗，观察蓝莓接菌后的生长，将对蓝莓苗促进作用最好的菌株筛选出来，即为所述的蓝莓菌根真菌。该菌株侵染蓝莓根部后，在显微镜下观察，是菌根共生结构，可以确定其为蓝莓菌根真菌。上述步骤(3)中将步骤(2)消毒后待用的根切成0.8cm长的小段，置于PDA培养基平板上，25°C下恒温倒置培养效果较好。一种蓝莓菌根真菌的用途该蓝莓菌根真菌用于促进蓝莓各个生长阶段的生长、 防虫害、防冷害以及提高产量3、优点及效果本专利技术涉及一株蓝莓菌根真菌，该真菌对蓝莓组培阶段、瓶外生根阶段和大田栽培阶段的各品种蓝莓生长均有明显的促进作用。接菌处理的蓝莓对叶甲和蚜虫等害虫具有明确的诱导取食作用，从而减轻害虫的危害；还可以降低栽培蓝莓对土壤低PH值的要求，可以将PH从4左右提高到6左右，且接种本专利技术菌根菌也可以将土壤PH值从6降到5甚至更低；而且该蓝莓菌根菌还可以提高蓝莓对低温的抗性，在6 10°C的条件下，蓝莓仍可保持生长状态，而不会进入休眠。总之，本专利技术的这种菌株可以在蓝莓栽培、防虫害、防冷害等方面得到广泛的应用。四附图说明图1为本专利技术蓝莓菌根真菌显微镜下菌丝体形态图； 图2为本专利技术蓝莓菌根真菌扩增DNA序列图； 图3为温度对本专利技术蓝莓菌根真菌的生长的影响图； 图4为pH值对本专利技术蓝莓菌根真菌的生长的影响图； 图5为碳源对本专利技术蓝莓菌根真菌的生长的影响图； 图6为氮源对本专利技术蓝莓菌根真菌的生长的影响图； 图7为本专利技术蓝莓菌根真菌对组培苗阶段生长量的影响图； 图8为本专利技术蓝莓菌根真菌对驯化阶段生长量的影响图； 图9为本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种蓝莓菌根真菌，其特征在于：该真菌分类命名：晶粒鬼伞（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ　ｍｉｃａｃｅｕｓ），在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期：２０１０年８月１８号，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．４０６３，保藏代号为：ＭＦ００２。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陶承光，杨涛，肇莹，肖军，王娜，龚娜，陈珣，王红，贾东贝，杨镇，
申请(专利权)人：辽宁省农业科学院，
类型：发明
国别省市：89