一种离体无菌寄主植物‑菌根食用菌共生苗的培养方法及培养容器技术

本发明专利技术公开了一种离体无菌寄主植物‑菌根食用菌共生苗的培养方法和培养容器，所述这的培养方法包括：（1）准备离体无菌培养寄主植物；（2）无菌精准接种；（3）寄主植物‑菌根食用菌共生苗培养。所述的培养容器包括透明的容器、容器盖和三角形固定架，容器盖设有过滤通气窗，容器底部设有一个三角形固定架，三角形固定架上部设置一个带有缺口的圆形环，圆形环上部设有若干向外、固定弹性胶圈的小钩。本发明专利技术可以在温度、湿度和光照可控的环境条件下培育出寄主植物系统，使快速大量繁育共生苗成为现实，较现有技术的繁育速度提高了3‑12倍，接种成功率提高了1.6‑2.5倍，接种后寄主植物‑菌根食用菌共生苗的生成率较现有技术提高了30%‑50%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食用菌生产
，尤其是涉及一种寄主植物-菌根食用菌共生苗培育技术。
技术介绍
松茸、块菌、牛肝菌等菌根性食用菌与双孢蘑菇、香菇、平菇等腐生菌不同，菌根性食用菌是食用菌中重要的一类，它着生于活体植物的根系上，通过活体植物根系接受植物的光合成产物，同时将它本身从土壤中吸收的养分供给活体植物利用，即形成植物-食用菌共生关系。目前人工栽培是非常困难的。通常的做法一般是先培养寄主植物苗，以表面灭菌的种子在灭菌的培养基质中培养，将培养好的寄主植物苗，接种上菌根食用菌菌种，然后将接种后的寄主植物-菌根食用菌共生苗，在一定的温室或灭菌温室中培养，待菌根苗成长到一定程度大小，将其移植到生产场地，生成食用菌子实体。整个过程主要包括寄主植物无菌苗的培育，在寄主植物根系接种食用菌菌种，接种后的菌根苗的培养，以及养成的菌根苗移植到生产场地进行出菇培养。2013年第34卷第1期四川林业科技报道林强的研究事例，其寄主植物-菌根食用菌合成苗的制作方法是，收集云南松种子用水选法去除空壳种子，用0．1%的高锰酸钾液浸泡处理30min，然后再用清水浸泡1d～2d，灭菌处理后的云南松种子播入混合基质的培育箱中，培养基质在121℃～126℃的高压灭菌器下灭菌2.5h～3h放置一周后使用，播种后，用清水将基质浇透后放置于室内催芽，待80%以上的种子发芽后再移入炼苗室内进行无菌苗培育。将培育好的云南松无菌苗浸泡在自来水里至根部基质松解，在适宜的容器内装入上述灭菌基质，至2/3深度，然后用小勺舀一勺约3g接菌剂（菌根食用菌接种菌液），在容器基质表面，将云南松无菌苗栽入，使根部与菌剂接触，然后覆盖基质压紧，用水浇透，将接种苗放置在炼苗室培育半月，期间适当浇水，然后移到温室大棚育苗架上培养6个月。然而，现有技术存在的问题有：（1）寄主植物种子只能表面灭菌，以及寄主植物苗在培育过程中环境，尽管可以事先灭菌处理，但整个生长过程中难以做到真正的无菌培养，如空调的空气流动，人员的操作传染，以及温室角落的均无繁衍等等，因此容易造成杂菌污染。(2)寄主植物苗培养成功后，需要在寄主植物苗的根系上接种菌根食用菌的菌种，其接种方法一般是将植物根系在接种液中浸染，或者在植物根系造成创伤，如剪短一部分根系、剥皮、刺伤等，在创伤的部位接种菌种。然而这些方法难以确保在植物苗根系上确切接种成功，即接种成功率较低.(3)将接种后的植物苗栽植于培养基质中，这时容易造成接种的菌种流失乃至死亡，致使植物苗根系接种菌种浓度降低，从而减少寄主植物-菌根食用菌共生苗的成活率。(4)接种后的寄主植物-菌根食用菌共生苗，一般放在温、湿、光等可控条件下的温室中培养，这种温室事先是可以进行灭菌处理的，但是这种温室难以保证在寄主植物-菌根食用菌共生苗整个生育期间是无菌条件的。(5)菌根性食用菌其特点之一就是菌丝生长速度很慢，整个培育期将是长期的,在这个长期的培育过程中，培养基质的水分管理是十分困难的和难以准确掌握的，常常造成接种成功的寄主植物-菌根食用菌共生苗衰败和死亡。
技术实现思路
针对目前现行的寄主植物-菌根食用菌共生苗培养方法存在的缺陷，本专利技术的目的是提供一种离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养方法,该方法使寄主植物-菌根食用菌共生苗在全生长过程处于无菌可控条件下生长发育，可以达到在离体无菌条件培育出寄主植物系统，接种菌根食用菌菌种，形成离体无菌条件下的寄主植物-菌根食用菌共生苗系统。为实现上述目的，本专利技术采用了下列技术方案。一种离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养方法，包括如下步骤：（1）准备离体无菌培养寄主植物系选择具有寄主植物-菌根食用菌共生关系的植物，在无菌条件下摘取植物茎尖生长点进行离体培养，继而诱导植物发根，形成完整的寄主植物苗系统；（2）无菌精准接种用无菌微型接种注射器吸取特定寄主植物-菌根食用菌关系的菌种菌源液，精准地将菌种接入步骤（1）培养的植物根系的表皮皮层组织中，然后将接种口用凝胶剂包埋好，形成离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗系统；（3）寄主植物-菌根食用菌共生苗培养将步骤(2)接种后的共生苗放在离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养容器中，固定共生苗于培养容器中的三脚架中，共生苗的根尖部放在培养基上，要使接种口与培养基面保持一定的距离，避免接种口接触培养基质而造成接种菌种扩散，并且不使其倒伏，也不使其下坠,在特定的寄主植物-菌根食用菌共生适宜的培养基种类及培养条件下，培养形成可用于生产的寄主植物-菌根食用菌共生苗。一种离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养容器，包括透明的容器、容器盖和三角形固定架，容器盖设有过滤通气窗，容器底部设有一个三角形固定架，三角形固定架顶部设置一个带有缺口圆形环，缺口圆形环上设有若干向外、固定弹性胶圈的小钩。使用离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养容器时，在容器中倒入培养基后灭菌、灭菌后冷却，无菌条件下将寄主植物-菌根食用菌共生苗移入容器中，将共生苗的茎部从圆形环的缺口处移入圆形环中，用无菌的弹性胶圈在缺口圆形环上的小钩与共生苗茎部间循环绕，固定共生苗不倒伏、不下坠，盖上容器盖即可。本专利技术的有益效果：（1）采用本专利技术的培养方法，可以在无菌、温度湿度和光照可控的环境条件下培育出寄主植物系统，使快速大量繁育共生苗成为现实，本专利技术较现有技术的繁育速度提高了3-12倍。（2）采用本专利技术无菌微型接种注射器接种，可以精确地在寄主植物根系的表皮皮层组织内部注入接种菌源，较现有技术的接种成功率提高了1.6-2.5倍，接种后寄主植物-菌根食用菌共生苗的生成率较现有技术提高了30%-50%。附图说明图1为本专利技术的寄主植物-菌根食用菌共生苗培养容器示意图。图2为本专利技术的接种方法示意图。图中：1、容器，2、容器盖，3、三角形固定架，4、缺口圆形环，5、小钩，6、弹性胶圈，7、过滤通气窗，8、共生苗，9、培养基，10、寄主植物根系，11、微型接种注射器。具体实施方式本专利技术适用于如块菌、牛肝菌、松茸、茯苓等菌根食用菌种类的共生苗培养，。其主要的技术环节是：（1）根据菌根食用菌的种类选择适当的寄主植物种类，如块菌的共生寄主植物是栎树、榛子树、云南松等；（2）对应寄主植物种类采用适当的茎尖组织培养方法，包括茎尖培养基种类、生根培养基种类以及培养条件等，如适合于木本植物的培养基有WPM、MS、B5、White、Heller等；（3）使用无菌微型接种注射器，严格实行精准的接种方法；（4）使用本专利技术的培养容器，正确使用接种后的培养方法和操作步骤；（5）整个培养过程要在完全无菌条件下完成。实施例1一种离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养容器，包括透明的容器1、容器盖2和三角形固定架3。所述的三角形固定架3设置在容器1的底部，三角形固定架3顶部设有一个带有缺口的圆形环4，缺口的圆形环4上设有若干向外、固定弹性胶圈6的小钩5。所述的容器盖2的中央设有过滤通气窗7。实施例2一种栎树与块菌的离体无菌共生苗的培养方法，包括如下步骤：（1）寄主材料的准备将栎树(辽东栎或栓皮栎)枝条截成1寸长的小段，每段枝条含有一个腋芽，去除叶片叶柄，用清水洗净，再用70%酒精进行表面灭菌30秒，然后用灭菌水清洗3遍，再用0.1%次氯酸钠灭菌3-5分钟，倒掉次氯酸钠本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种离体无菌寄主植物‑菌根食用菌共生苗的培养方法，包括如下步骤：（1）准备离体无菌培养寄主植物系选择具有寄主植物‑菌根食用菌共生关系的植物，在无菌条件下摘取植物茎尖生长点进行离体培养，继而诱导植物发根，形成完整的寄主植物苗系统；（2）无菌精准接种 用无菌微型接种注射器吸取特定寄主植物‑菌根食用菌关系的菌种菌源液，精准地将菌种接入步骤（1）培养的植物根系的表皮皮层组织中，然后将接种口用凝胶剂包埋好，形成离体无菌寄主植物‑菌根食用菌共生苗系统；（3）寄主植物‑菌根食用菌共生苗培养 将步骤(2)接种后的共生苗放在离体无菌寄主植物‑菌根食用菌共生苗的培养容器中，固定共生苗于培养容器中的三脚架中，共生苗的根尖部放在培养基上，要使接种口与培养基面保持一定的距离，避免接种口接触培养基质而造成接种菌种扩散，并且不使其倒伏，也不使其下坠,在特定的寄主植物‑菌根食用菌共生适宜的培养基种类及培养条件下，培养形成可用于生产的寄主植物‑菌根食用菌共生苗。

【技术特征摘要】
1.一种离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养方法，包括如下步骤：（1）准备离体无菌培养寄主植物系选择具有寄主植物-菌根食用菌共生关系的植物，在无菌条件下摘取植物茎尖生长点进行离体培养，继而诱导植物发根，形成完整的寄主植物苗系统；（2）无菌精准接种用无菌微型接种注射器吸取特定寄主植物-菌根食用菌关系的菌种菌源液，精准地将菌种接入步骤（1）培养的植物根系的表皮皮层组织中，然后将接种口用凝胶剂包埋好，形成离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗系统；（3）寄主植物-菌根食用菌共生苗培养将步骤(2)接种后的共生苗放在离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养容器...

【专利技术属性】
技术研发人员：周林，郭尚，王华，凌亮，南晓洁，李艳婷，
申请(专利权)人：山西省农业科学院食用菌研究所，
类型：发明
国别省市：山西;14