本发明专利技术属于免疫学检测技术领域，具体涉及一种可直接标记的苏丹红I号的制备方法及其应用。该方法主要利用从头合成的技术路线，在不改变苏丹红I号主体分子结构中抗原决定簇的前提下，成功引入了活性基团氨基，为苏丹红I号提供了一种可以直接与荧光物质和酶连接的修饰物的制备方法，为建立苏丹红I号竞争性一步法ELISA检测体系解决了竞争性抗原制备这一重要问题。整个方法简单易行，操作简便，与荧光物质和酶连接的效率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学检测
，具体涉及一种可直接标记的苏丹红I号的制备 方法及其应用。
技术介绍
苏丹红I号是一种人工合成的偶氮类染料，不溶于水，具有很好的亲脂性。作为一 种常用的工业染料，它被广泛用于溶剂的增色以及纺织品的增光等方面。自21世纪初有关苏丹红I号污染食品的相关事件被曝光以来，人们越来越关注苏 丹红I号所引起的危害。研究表明苏丹红I号的致毒性与其代谢所生成的胺类及萘酚类 物质密切相关。当人食用或接触含有苏丹红I号的食品后，它可以通过人体皮肤或消化系 统进入体内。肝脏作为苏丹红I号产生致癌性的主要靶器官，一方面，其代谢产物苯胺可直 接作用于肝细胞，引起肝脏疾病，并且有可能诱发基因突变，增加癌变的几率；另一方面，苯 胺进入人体后的代谢产物可以将狗2+氧化为狗3+，使得血红蛋白无法结合氧从而导致患上 高铁血红蛋白症。苏丹红I号的另一种代谢产物1-氨基-2-萘酚具有致癌、致畸、致敏、致 突变的潜在毒性。国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer, IARC)将 苏丹红I号归为三类致癌物，即动物致癌物。1995年欧盟等国家禁止苏丹红作为食品添加 剂，中国也在1996年的《食品添加剂卫生标准》中明令禁止使用苏丹红。但是由于其价廉易 得、色泽鲜亮持久等特点，仍然有一些不法食品生产商违规加工、违法使用苏丹红染料。这 不但给国家的食品安全带来了很大的隐患，而且也给消费者的身心健康带来严重威胁。目前，国内外对食品中苏丹红I号的常用检测方法是高效液相色谱法(HPLC)、高 效液相-质谱联用法(HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、化学发光法等。这些方 法的样品前处理比较复杂繁琐，需要精密昂贵的仪器设备，同时还要有专门的仪器操作人 员等，很难达到快速、简便的现场检测要求，因此限制了其在基层检测部门的大规模推广使 用。酶联免疫检测分析(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)由于具有特异 性强、灵敏度高、简便、快速等优点，近年来备受人们的关注。苏丹红I号作为小分子物质， 对于它的检测，传统的ELISA分析方法主要采用非竞争性间接ELISA，其操作步骤相对较 多，引入人为误差的几率较大。目前，国际上著名的检测公司如拜耳等商业化的检测小分子 物质试剂盒很多均采用竞争性一步法ELISA，其工作原理是将小分子物质直接标记上酶 或者其他的一些直接可以检测的荧光基团，与待测样品同时加入到检测体系中，两者与酶 标板上的抗体竞争性结合，待测物的含量与输出信号呈负相关。这种方法大大缩短了检测 步骤，从而达到快速、简捷、减少人为误差的目的。但是，苏丹红I号本身没有可以直接和载 体蛋白偶联的氨基或羧基，因此需要引入。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是苏丹红I号自身没有可以直接和载体蛋白偶联的氨基或羧基，因此需要引入。本专利技术 利用从头合成的方法在不改变苏丹红I号主体分子结构中抗原决定簇的前提下，引入了活 性基团氨基，然后直接与荧光物质和酶连接，为建立苏丹红I号竞争性一步法ELISA检测体 系解决竞争性抗原制备这一重要问题。本专利技术的技术方案是本专利技术所述的一种可直接标记的苏丹红I号的结构为权利要求1.-种可直接标记的苏丹红I号，其结构为2.根据权利要求1所述可直接标记的苏丹红I号的制备方法，其特征在于合成步骤为(1)、将18.5mmol对苯二胺溶解于无水四氢呋喃中，在搅拌的条件下，将溶解于无水四 氢呋喃中的18. 5mmol乙酸酐逐滴加入到对苯二胺溶液中，TLC监测反应是否完全；(2)、将反应液过滤，留沉淀，沉淀用甲醇重结晶，得单氨基保护产物；(3)、将3.3mmol单氨基保护的样品搅拌溶解于50ml含有2. 5ml浓盐酸的冰水中；将 3. 3mmol亚硝酸钠溶液缓慢滴加到上述溶液中，持续搅拌反应，得重氮盐溶液；(4)、将溶解于10%NaOH溶液中的3. 3mmol β -萘酚逐滴加入到上述重氮盐溶液中，滴 加完毕后，继续搅拌反应4小时可见红色沉淀生成；(5)、过滤，留沉淀，沉淀用甲醇溶解，按摩尔比1:10加入相应量的IM盐酸，加热回流 反应3-6小时，过柱即得产物。3.根据权利要求1所述可直接标记的苏丹红I号，其特征在于与其偶联的分子可以为 带羧基的荧光分子物质或ELISA检测中的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。4.根据权利要求1所述一种可直接标记的苏丹红I号在竞争性一步法ELISA检测体系 中的应用。全文摘要本专利技术属于免疫学检测
，具体涉及一种可直接标记的苏丹红I号的制备方法及其应用。该方法主要利用从头合成的技术路线，在不改变苏丹红I号主体分子结构中抗原决定簇的前提下，成功引入了活性基团氨基，为苏丹红I号提供了一种可以直接与荧光物质和酶连接的修饰物的制备方法，为建立苏丹红I号竞争性一步法ELISA检测体系解决了竞争性抗原制备这一重要问题。整个方法简单易行，操作简便，与荧光物质和酶连接的效率高。文档编号C07C245/10GK102115451SQ201010599388公开日2011年7月6日 申请日期2010年12月22日 优先权日2010年12月22日专利技术者徐加发, 沈萍萍, 范祚舟 申请人:南京大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种可直接标记的苏丹红Ｉ号，其结构为：。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：沈萍萍，徐加发，范祚舟，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：84
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