一种低聚木糖的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种低聚木糖的检测方法，该方法是采用高效液相色谱仪结合蒸发光散射检测器对低聚木糖中不同聚合程度的小聚体进行定量定性的方法。该方法具有很高的检测灵敏度，且能够对低聚木糖中小聚体组分进行准确的定量测定，分离效果好、检测重现性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于定性或定量的检测低聚木糖中不同聚合程度的小聚体的方法。
技术介绍
低聚木糖是指含有2-7个糖苷键聚合而成的化合物，它们常常与蛋白质或脂类共价结合，以糖蛋白或糖脂的形式存在。低聚木糖通常通过糖苷键将2 4个单糖连接而成小聚体，这类低聚木糖难以被胃肠消化吸收，甜度低，热量低，基本不增加血糖和血脂。低聚木糖并不能被人体的胃酸破坏，也无法被消化酵素分解。但它可以被肠中的细菌发酵利用， 转换成短链脂肪酸以及乳酸。目前，低聚木糖已经被广泛应用于各种医药制剂、口服液、食品和保健品中，其分离和纯化，是低聚木糖结构分析的关键。因为低聚木糖自身组成(低聚木糖中不同小聚体间分子量相差较小)、连接、衍生化、微观不均一性等方面的高度复杂性，使其检测具有很大困难。选择合适的方法，对收集到的混合糖链进行分离，是一项摸索性很强的工作。测定低聚木糖的方法很多，如薄层色谱法(Thin Layer Chromatography)、气相色谱法(Gas Chromatography)、高效毛细管电^永(High Performance Capillary Electrophoresis)禾口高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography)。其中，目前最常用且效果最好的为高效液相色谱法，其液相色谱不受样品挥发度和热稳定性的限制。只要被分析物质在流动相溶剂中有一定溶解度，便可以分析。在常温下即可进行柱分离，毋须衍生化。特别对热稳定低的淀粉糖而言，该分析方法尤为适用。高效液相色谱对样品的回收比较容易， 且是定量的，这对任何规模的制备目的特别有利。在很多场合，HPLC不仅是一种分析方法， 更多的是作为分离手段，用以提纯和制备具有足够纯度的单一物质。在对低聚木糖的分离分析中，HPLC是最有效的手段之一。它减少了糖的损失和偶然误差，有良好的分离效果，灵敏度高、重现性好，能准确快速的定性、定量测定。另外，HPLC还可与质谱连用。HPLC分离出的各组分直接通过质谱进行结构分析，所以HPLC在低聚木糖的分离上具有重要用途。可是，目前现有的高效液相色谱检测方法不能清晰地分开各组分的色谱峰，检测灵敏度不高， 不能够对低聚木糖中小聚体组分进行准确的定性定量测定，在检测中存在较大误差，并且分离效果不好、检测重现性也不好。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种改进的用于定性或定量的检测低聚木糖中不同聚合程度的小聚体的方法。为达到上述目的，本专利技术采用的一种技术方案是，该方法是利用高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器相结合进行检测并记录色谱图，步骤如下(1)设定仪器工作条件①、高效液相色谱柱采用离子交换柱，柱温控制在5°c 75°C ；②、采用梯度洗脱法进行洗脱，具体如下第一阶段0 15. 00 min，流速0. 1 3. 0 mL/min，洗脱流量为0. 1 3. 0 mL/min， 洗脱液组成氨水 0. 01wt% 2wt%，乙腈 49. 98wt% 50. 99wt%,水 48. 02wt% 49wt% ；第二阶段15. 01 30. OOmin，流速:0. 1 3. 0 mL/min，洗脱流量为0. 1 3. 0 mL/ min,洗脱液组成氨水 0. 01wt% 2wt%，水 98wt% 99. 99wt% ；③、蒸发光散射检测器的漂移管的温度设定为50°C 130°C，载气流量为0.1 mL/ min 3. 0 mL/min ；(2)、配制待测溶液和进样将待测的低聚木糖用水或乙醇溶解，得到浓度为 0. 005 μ g/mL 100mg/mL的低聚木糖待测液，以0. 1 μ L 200 μ L的进样量将所述低聚木糖待测液进样至离子交换柱内，开始检测并记录色谱(3)、结果表征某个峰的出峰面积与所有出峰的面积总和的比值即为该峰所对应的低聚糖的含量。根据本专利技术的一个具体实施例，所述蒸发光散射检测器的漂移管的温度设定为 100°C。本专利技术与现有技术相比具有以下优点本专利技术是采用高效液相色谱仪结合蒸发光散射检测器对低聚木糖进行检测，具有很高的检测灵敏度，且能够对低聚木糖中小聚体组分进行准确的定量测定，分离效果好、检测重现性好。附图说明图1为低聚木糖的检测图谱；图2为洗脱梯度表1、检测数据分析表2以及检测的重现性结果表3 (为连续进样7次的重现性RSD结果)。具体实施例方式按照本专利技术所实施的一个优选实施例的分析检测方法如下 检测样品低聚木糖标准品用水溶解，其浓度为5 lOmg/mL ；色谱条件所采用的高效液相色谱柱为S印ax Proteomix SAX-NP5 (5um, 4.6x150mm，SN :X101201)，柱温为35°C，进样量为10 μ L，蒸发光散射检测器(ELSD)中，漂移管温度为100°C，载气流速2. OmL/min。从图1及图2中的表1至表3的数据可看出，本专利技术的检测方法具有很高的检测灵敏度，且能够对低聚木糖中小聚体组分进行准确的定量测定，分离效果好、检测重现性好。上述实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本专利技术的内容并据以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围。凡根据本专利技术精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种低聚木糖的检测方法，其特征在于：该方法是利用高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器相结合进行检测并记录色谱图，步骤如下：（１）设定仪器工作条件：①、高效液相色谱柱采用离子交换柱，柱温控制在５℃～７５℃；②、采用梯度洗脱法进行洗脱，具体如下：第一阶段：０～１５．００　ｍｉｎ，流速：０．１～３．０　ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱流量为０．１～３．０　ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱液组成：氨水０．０１ｗｔ％～２ｗｔ％，乙腈４９．９８ｗｔ％～５０．９９ｗｔ％，水４８．０２ｗｔ％～４９ｗｔ％；第二阶段：１５．０１～３０．００ｍｉｎ，流速：０．１～３．０　ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱流量为０．１～３．０　ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱液组成：氨水０．０１ｗｔ％～２ｗｔ％，水９８ｗｔ％～９９．９９ｗｔ％；③、蒸发光散射检测器的漂移管的温度设定为５０℃～１３０℃，载气流量为０．１　ｍＬ／ｍｉｎ～３．０　ｍＬ／ｍｉｎ；（２）、配制待测溶液和进样：将待测的低聚木糖用水或乙醇溶解，得到浓度为０．００５μｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ的低聚木糖待测液，以０．１μＬ～２００μＬ的进样量将所述低聚木糖待测液进样至离子交换柱内，开始检测并记录色谱图；（３）、结果表征：某个峰的出峰面积与所有出峰的面积总和的比值即为该峰所对应的低聚糖的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种低聚木糖的检测方法，其特征在于该方法是利用高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器相结合进行检测并记录色谱图，步骤如下(1)设定仪器工作条件①、高效液相色谱柱采用离子交换柱，柱温控制在5°c 75°C；②、采用梯度洗脱法进行洗脱，具体如下第一阶段0 15. 00 min，流速0. 1 3. 0 mL/min，洗脱流量为0. 1 3. 0 mL/min， 洗脱液组成氨水 0. 01wt% 2wt%，乙腈 49. 98wt% 50. 99wt%,水 48. 02wt% 49wt% ；第二阶段15. 01 30. OOmin，流速:0. 1 3. 0 mL/min，洗脱流量为0. 1 3. 0 mL/ min,洗脱液组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彧娜，崔爱艳，黄学英，
申请(专利权)人：苏州先阔生物科技有限公司，苏州赛分科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32