一种华蟾素提取物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种华蟾素提取物及其制备方法，该提取物中的主要有效成分华蟾酥毒基含量在０．１５％以上，脂蟾毒配基含量在０．１０％以上。该提取物是由干蟾皮经过水煮、过柱、洗脱、浓缩、干燥等工艺制备而成，本发明专利技术有效去除提取物中的无效物质（杂质），富集有效成分，达到了提高疗效降低毒副作用的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取物及其制备方法，特别涉及一种华蟾素提取物及其 制备方法。技术背景华蟾素提取物为蟾蜍科(Bufonidae)动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor的干燥皮经提取纯化制得的棕黄色浸膏；华蟾素具解 毒、消肿、止痛功效，用于中、晚期肿瘤、慢性乙型肝炎等症，其生理活性 物质主要是蟾蜍毒素类(bufotoxins)及其水解产物蟾毒配基类 (bufageins)、蟾毒色胺类(bufoteinines)，还含胆甾醇等其它化合物。 目前华蟾素注射剂、口服液、片剂已应用于临床，但在临床应用中发现由于提取物中无效物质(杂质)含量高、有效成分含量低，导致产品有一定的毒副作用，并且疗效降低。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于公开一种提取物；本专利技术的另一个目的在于公开 一种华蟾素提取物；本专利技术还有一个目的在于公开该提取物的制备工艺。 本专利技术目的是通过如下技术方案实现的本专利技术所述华蟾素提取物中华蟾酥毒基含量为0. 15%以上，脂蟾毒配基 含量为0. 10%以上。本专利技术所述华蟾素提取物的制备方法为取干蟾皮l重量份，煎煮1-3次，每次加4-12体积份的水煎煮20分钟 -2小时,合并煎煮液，滤过，滤液冷却至4(TC以下，上大孔吸附树脂柱吸附， 先用3-9倍柱体积水洗脱，再加2-8倍柱体积的50%-95%乙醇洗脱，收集乙 醇洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后，浓縮，干燥，即得华蟾素提取物。本专利技术所述华蟾素提取物的制备方法优选为取干蟾皮1重量份，煎煮2-3次，每次加5-10体积份的水煎煮0. 5-1. 5 小时，合并煎煮液，滤过，滤液冷却至4(TC以下，上大孔吸附树脂柱吸附，先用5-7倍柱体积水洗脱，再加3-6倍柱体积的60%_85%乙醇洗脱，收集乙 醇洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后，浓縮，干燥，即得华蟾素提取物。 本专利技术所述华蟾素提取物的制备方法优选为取干蟾皮l重量份，加10体积份的水，煎煮45分钟，即一煎； 一煎后 药渣加入5体积份的水，煎煮30分钟，即二煎；合并两次煎煮液，滤过， 滤液冷却至4(TC以下，上大孔吸附树脂柱吸附，先用6倍柱体积水洗脱，再 加5倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后， 浓縮，干燥，即得华蟾素提取物。本专利技术所述华蟾素提取物的制备方法优选为取干蟾皮1重量份，加7体积份的水，煎煮45分钟，即一煎； 一煎后 药渣加入5体积份的水，煎煮45分钟，即二煎；合并两次煎煮液，滤过， 滤液冷却至40'C以下，上大孔吸附树脂柱吸附，先用7倍柱体积水洗脱，再 加6倍柱体积的60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后， 浓縮，干燥，即得华蟾素提取物。本专利技术所述华蟾素提取物的制备方法优选为取干蟾皮l重量份，加10体积份的水，煎煮30分钟，即一煎； 一煎后 药渣加入8体积份的水，煎煮30分钟，即二煎；合并两次煎煮液，滤过， 滤液冷却至4(TC以下，上大孔吸附树脂柱吸附，先用5倍柱体积水洗脱，再 加4倍柱体积的80%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后， 浓縮，干燥，即得华蟾素提取物。上述制备方法中大孔吸附树脂型号优选为DlOl、 AB-8或NKA-9等中性 或低极性吸附树脂。本专利技术所述重量份/体积份的关系是克/毫升取本专利技术所述华蟾素提取物，加入辅料，按照制剂工艺，制成临床接受 的剂型，包括但不限于注射剂、胶囊、滴丸、软胶囊、片剂、分散片、口服 液、含片、软膏剂、滴鼻剂、颗粒剂等药物剂型。本专利技术所述技术方案制备所得的华蟾素提取物中华蟾酥毒基、脂蟾毒配 基含量较现有大孔树脂纯化技术(申请号200410083994. 4)所述方法制得的 提取物高5倍以上，说明本专利技术蟾蜍毒素类有效成分保留完全；且通过与提取物的药效学对比试验，证明本专利技术所得提取物药效提高且毒性减小。 本专利技术有效去除了提取物中的无效物质(杂质)，富集了有效成分，达到了 提高疗效降低毒副作用的目的。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。 实验例1提取物收率及吲哚类总生物碱含量1. 1仪器及试药UV-2401紫外可见分光光度计(日本岛津)；提取物I (实施例1所述本专利技术提取物)；提取物II ;5-羟色胺对照品(中国药 品 生物制品检定所)。1.2实验方法吲哚类总生物碱含量测定参照华蟾素注射液 (WS3-Bb-0027-95)"含量测定"项下方法进行，结果见表1。表l提取物收率及吲哚类总生物碱含量<table>table see original document page 7</column></row><table>结果证明，本专利技术提取物收率降低但吲哚类总生物碱含量明显提高，有 效成分吲哚类总生物碱得到富集，并丢弃大量无效物质(杂质)。实验例2提取物中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量分析2.1仪器与试药HP-1100高效液相色谱仪及检测器(美国惠普)，实施 例l所述本专利技术提取物；华蟾酥毒基对照品和脂蟾毒配基对照品(中国药品 生物制品检定所)；2. 2实验方法参照《中国药典》2005年版一部265页(2000年版一部 316页)蟾酥项下含量测定方法进行，结果见表2。表2各提取物华蟾酥毒基、脂由鲁毒配基含量<table>table see original document page 7</column></row><table>*专利提取物数据引用专利(申请号200410083994. 4)"—种华蟾毒冻干 粉针及其制备方法"说明书"三、华蟾素醇提物含量分析"中提取物的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量。结果证明，本专利技术提取物中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量大大提高，蟾 蜍毒素类有效成分得到较大程度富集。实验例3提取物药效学比较研究试验 3.1试验材料及试剂3. 1. 1提取物I :实施例1所述本专利技术提取物；每g浸膏相当于60. 61g 原生药。临用前用蒸馏水配成所需浓度的溶液备用。本实验剂量按原生药 g/kg计算。提取物II:按专利(申请号200510005277. 4)"华蟾素(蟾皮)提取物 生产工艺"制备而得；每g浸膏相当于27. 78g原生药。临用前用蒸馏水配 成所需浓度的溶液备用。本实验剂量按原生药g/kg计算。环磷酰胺注射用，江苏恒瑞医药股份有限公司，规格0.2g/瓶，批 号:06071721，临用前用蒸馏水新鲜配制。3.1.2瘤株S180瘤株购自四川大学华西医院肿瘤研究所。 H22瘤株购自四川大学华西医院肿瘤研究所。 3. 1. 3实验动物昆明种小鼠SPF级，雌性，体重24 26g,四川省中医药科学院实验 动物中心提供。 3.2实验方法3.2.1 口服各提取物对S180小鼠肿瘤生长的影响复苏小鼠S180瘤株，加入适量的灭菌生理盐水，充分混匀，配制成瘤 细胞悬液(细胞数〉1 X 107 2X 107ml)接种于5只同种异体小鼠腹腔内(一代 种鼠)。7天后抽取腹水，再次接种于5只同种异体小鼠腹腔内(二代种鼠)。 选取生长7天后的二代种鼠抽取腹水，混匀，稀释10倍，计数细胞浓度。 调整细胞浓度至2X107ml，接种于70只小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射 0.2ml，在接种后第2天，将动物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种华蟾素提取物，其特征在于该提取物中华蟾酥毒基含量为０．１５％以上，脂蟾毒配基含量为０．１０％以上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱军，谭正怀，
申请(专利权)人：四川省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]