一种测定华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱含量的方法技术

本发明专利技术提供一种测定华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱含量的方法。醇沉法是华蟾素注射液生产的关键单元操作，针对醇沉过程建立一种快速有效的含量分析方法尤为重要。该方法先收集具有代表性的醇沉液样本作为校正集，采用紫外可见分光光度法测定吲哚类生物碱含量，同时扫描其近红外原始光谱图，选择合适的光谱预处理方法、建模谱段和主因子数，利用化学计量学方法，构建醇沉液样本吲哚类生物碱的近红外定量校正模型，对未知含量的华蟾素醇沉液样本进行快速的含量测定。本发明专利技术具有快速、无损、准确的优点，可有效解决醇沉过程中缺乏质量监控和批次差异的问题，为中药过程质量控制提供一种新的思路和手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药生产过程的质量检测方法，涉及一种近红外光谱技术快速测定华 蟾素注射液醇沉工艺过程中醇沉液吲哚类生物碱含量的检测方法。
技术介绍
华蟾素注射液是干蟾皮经提取制成的灭菌水溶液，具有消肿、止痛、解毒的功效， 主要用于治疗中、晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等症，还可以用于急性血播型肺结核、流行性出 血热、顽固性呃逆和小儿流腮并发脑膜炎等症。由于华蟾素注射液具有较好的抗癌作用，目 前被列为国家基本医疗保险药品甲类和国家中药保护品种。华蟾素注射液的生产工艺流程由提取、浓缩、醇沉等多个工艺组成。醇沉法是中药 注射剂生产的关键单元操作，主要可以去除蟾皮提取液中多肽、脂肪酸、留醇等大分子化合 物，达到有效成分的纯化和富集。目前相关报道中，“华蟾素胶囊的制造方法”(专利申请 号98103562. 0)和“一种新的华蟾素冻干粉针及其制备方法和质量控制方法”(专利申请 号200510061^8. 4)提出了水提醇沉的方法，最大程度的获得吲哚类总生物碱。但以上研 究方法只是对工艺优化和最终醇沉产品进行含量测定，缺乏对生产过程的快速检测和优化 控制。中药部颁标准中采用分光光度法，以5-羟色胺为对照品，二甲氨基苯甲醛盐酸为 显色剂的华蟾素注射液中吲哚类总生物碱的含量测定方法。“蟾皮总碱及其制备和分析方 法以及其制剂”(专利申请号200710020339. 8)建立了反相高效液相法测定蟾皮总碱的方 法。但是以上方法耗时、繁琐，远不能满足中药生产过程的实时分析和快速测定的要求。近红外光谱技术是一种快速无损的绿色分析技术，其分析速度快、样品处理简单、 无需消耗试剂等特点，广泛应用在中药生产的提取、浓缩、混合、大孔树脂纯化等多个单元 操作中。作为适用于快速检测和在线分析的成熟手段之一，近红外光谱技术已经应用在多 种中药制剂中。“一种中药六味地黄丸生产过程的近红外光谱在线检测方法”(专利申请号 200910195764. X)针对六味地黄丸水提和醇提工艺，建立了近红外在线检测的定量模型，解 决了传统离线方法成本高、效率低等问题。“复方杜仲胶囊有效成分的近红外光谱在线检测 方法”(专利申请号201010118938.5)中建立近红外数学模型，对生产的工艺关键点如动 态逆流提取、三效浓缩、喷雾干燥等进行有效成分的检测。但目前报道中，极少将近红外光 谱技术应用在醇沉过程中有效成分的快速分析。本专利技术将近红外光谱技术应用于华蟾素注 射液醇沉过程中吲哚类生物碱的测定，可以实现指标成分的实时监测，最大程度降低批次 间的差异性，有助于提高中药产品的稳定性、安全性和有效性。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种测定华蟾素醇沉液中吲哚类生物 碱含量的方法；本方法通过预先建立华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱的近红外数学模型，并 将此模型用于醇沉过程中吲哚类生物碱的定量分析，实现对整个过程的快速分析，以提高过程单元的质量监测力度，达到保证最终产品质量的目的。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现(1)校正集醇沉液样本的收集收集不同批次华蟾素醇沉过程中获取的不少于50份的华蟾素醇沉液样本；(2)校正集醇沉液样本吲哚类生物碱含量参照值的测定采用紫外可见分光光度法测定华蟾素醇沉液样本中吲哚类生物碱(以5-羟色胺 计)的含量，并将此含量作为对照值；(3)校正集醇沉液样本的近红外透射光谱的采集使用近红外光谱仪在光谱扫描范围4000 lOOOOcnT1扫描采集的醇沉液样本，每 份样本多次测量求其平均光谱；(4)校正模型的建立模型建立前对校正集光谱进行异常点判别以提高模型精度，同时原始光谱在平 滑、微分等合适的光谱预处理方法下来消除仪器背景或漂移对信号的影响，选择合适的波 段提取有效信息，减少计算量，缩短建模时间；即筛选近红外光谱预处理方法，选择建模波 段，确定最佳主因子数，运用化学计量学软件处理数据，应用偏最小二乘法(PLQ建立醇沉 液样本吲哚类生物碱的近红外定量分析模型；(5)未知样本的吲哚类生物碱的快速测定重新收集华蟾素醇沉过程中未知样本，使用近红外光谱仪在光谱扫描范围 4000 lOOOOcnT1测量其近红外光谱数据，按照校正模型中相同的光谱预处理方法和波段 处理，输入到已建立的近红外校正模型中，经过模型计算和预测即可得知未知样本中吲哚 类生物碱的含量信息。步骤⑴校正集醇沉液样本的收集，是将蟾皮水提得到的提取液浓缩至密 度1. 10-1. 15g/mL，取该水提浓缩液置于保温40-60°C的醇沉罐中，在机械搅拌转速 200-500rpm下，加入95% (ν/ν)乙醇直到使药液终点乙醇浓度70%-80% (ν/ν)，且边加乙 醇边定时取样。步骤(3)近红外光谱采集方式及条件为以内置背景为参比，光谱扫描范围 4000 lOOOOcnT1，分辨率为ScnT1，扫描次数为32次。每个样品作3次平行扫描，取平均作 为样品的近红外光谱。步骤⑷所述光谱预处理方法包括一阶微分、二阶微分、Mvitsky-Golay平 滑和Norris导数滤波平滑，波段选择包括全波长、8745-83(^0^,7483-62270^1和 6020-5634^1及其组合，最佳主因子数的讨论。本专利技术采用的近红外光谱技术快速测定醇沉液吲哚类生物碱含量的方法，简便、 无损、准确、快速。与传统的紫外可见分光光度法相比，测定时间由原来的40分钟缩短至2 分钟，不需要对样品进行预处理，节省了人力物力，本专利技术有望能够解决华蟾素醇沉过程中 传统离线检测成本高、耗时长、效率低的难题，减少最终产品批次间差异性，为华蟾素注射 液及其相关制剂的质量提升提供保障。醇沉法是华蟾素注射液生产的关键单元操作，针对 醇沉过程建立一种快速有效的含量分析方法尤为重要。可有效解决醇沉过程中缺乏质量监 控和批次差异的问题，为中药过程质量控制提供一种新的思路和手段。附图说明图1是华蟾素醇沉液的近红外原始光谱图。图2是经平滑后华蟾素醇沉液的近红外光谱一阶导数图。图3是PLS定量校正模型中最佳主因子数和交叉验证结果图。图4是华蟾素醇沉液吲哚类生物碱含量PLS定量校正模型的预测值和参考值之间 的相关关系图。具体实施方式下面结合附图和实施例作进一步的说明，但本专利技术并不限于此。实施例11校正集醇沉液样本的收集将蟾皮水提得到的提取液浓缩至密度为1. 12g/mL，取该水提浓缩液IL置于醇沉 罐中，在保温40°C下，保持机械搅拌转速为300rpm，以60mL/min的流速加入95% (ν/ν)乙 醇直到使药液终点乙醇浓度70% (ν/ν)。醇沉过程持续50min，一边加入乙醇的同时，一边 定时取样。收集4个批次的华蟾素醇沉过程样本共55份，作为校正集样本进行模型建立。2校正集醇沉液样本吲哚类生物碱含量参照值的测定(1)对照品溶液的制备精密称取5-羟色胺对照品15mg，置于IOOmL量瓶中，用水 溶解并稀释至刻度作为储备液。又精密吸取10. OmL置于25mL容量瓶中，加水定容，备用。(2)标准曲线的制备精密量取对照品溶液1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0ml，分别置IOml 容量瓶中，加水使成5ml，摇勻，加20%对二甲氨基苯甲醛盐酸O —幻溶液至刻度，摇勻， 显色30分钟。照紫外可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱含量的方法，通过以下步骤实现：（１）校正集醇沉液样本的收集：收集不同批次华蟾素醇沉过程中获取的不少于５０份的华蟾素醇沉液样本；（２）校正集醇沉液样本吲哚类生物碱含量参照值的测定：采用紫外可见分光光度法测定华蟾素醇沉液样本中吲哚类生物碱（以５－羟色胺计）的含量，并将此含量作为对照值；（３）校正集醇沉液样本的近红外透射光谱的采集：使用近红外光谱仪在光谱扫描范围４０００～１００００ｃｍ↑［－１］扫描采集的醇沉液样本，每份样本多次测量求其平均光谱；（４）校正模型的建立：筛选近红外光谱预处理方法，选择建模波段，确定最佳主因子数，运用化学计量学软件处理数据，应用偏最小二乘法建立醇沉液样本吲哚类生物碱的近红外定量分析模型；（５）未知样本的吲哚类生物碱的快速测定：重新收集华蟾素醇沉过程中未知样本，使用近红外光谱仪在光谱扫描范围４０００～１００００ｃｍ↑［－１］测量其近红外光谱数据，按照校正模型中相同的光谱预处理方法和波段处理，输入到已建立的近红外校正模型中，经过模型计算和预测即可得知未知样本中吲哚类生物碱的含量信息。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪松，孙笛，王龙虎，陈勇，吴永江，袁佳，胡小雁，高波，张效蓬，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]