含藻蓝蛋白提取物的抗病毒组合物及藻蓝蛋白的提取制造技术

本发明专利技术提供了含藻蓝蛋白提取物的抗病毒组合物以及提取藻蓝蛋白的方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及藻类生物体的提取物及其应用，特别是藻蓝蛋白的提取和应用。藻蓝蛋白广泛存在于蓝绿藻中，它在叶绿素出现之前已在地球上进化了几十亿年。由于它既含有镁又含有铁，所以藻蓝蛋白质又被视为叶绿素和血红素的先驱，是植物和动物共同的生命之源。藻蓝蛋白除含有丰富的高质量蛋白质外，还富集多种人体所需要的矿物质，特别是钙，因此开发和利藻蓝蛋白意义重大。对于藻蓝蛋白的提取和应用，目前鲜有文献报道。本专利技术的目的之一是提供一种含藻蓝蛋白提取物的抗病毒剂，其中含有治疗有效量的藻蓝蛋提取物和／或药物上可接受的载体。本专利技术的另一目的是提供一种提取藻蓝蛋白的方法，此方法包括下列步骤a．将蓝绿藻粉溶于5-20倍水中，低温保持8-30小时，b．固液分离，将溶液的pH值调至酸性，放置，c．收集所得固体为藻蓝蛋白粗品。附图说明图1为藻蛋白的U．V．扫描图谱；图2为藻蛋白分离后的U．V．扫描图谱。本专利技术详述本专利技术提供了一种含藻蓝蛋白提取物的抗病毒组合物，所述组合物中包含治疗有效量的藻蓝蛋白提取物和／或药物学上可接受的载体。所述藻蓝蛋白提取物以如下步骤制备a．将藻粉溶于5-20倍水中，低温保持8-30小时，b．固液分离，将溶液的pH值调至酸性，放置，c．收集所得固体为藻蓝蛋白粗品。其中步骤a中的藻粉优选为螺旋藻粉，而且其中水的用量优选为藻粉的8-15倍，最好是10倍，由于藻蓝蛋白易在高温下破坏，因此整个提取过程必须保持低温，通常10-15℃为宜。步骤b中的溶液的pH值优选调节至3．8-4．2。由本专利技术的含藻蓝蛋白提取物的抗病毒组合物具有有效地抑制病毒的复制和繁殖的能力。本专利技术中所述的治疗有效量由本领域普通技术人员容易掌握，通常根据患者的情况，病症，年龄，体重等情况而定。由于藻蓝蛋白提取物无毒，因此，根据需要，药物组合物可以直接由藻蓝蛋白提取物制成。当组合物中含有其它药物学上可接受的载体时，它们可由制药领域常规方法制得。所述药物学上可接受的载体包括本领域常规使用的那些，如溶剂，各种赋形剂，解崩剂等。所述药物组合物可制成溶液，口服液，糖浆，丸剂，片剂，冲剂，粉剂，颗粒剂，栓剂等剂型形式。以下结合实施例对本专利技术作进一步说明。1．氨基酸分析精确称取实施例1产物约0．2mg产品．加入1ml 5．7N HCl，抽气后封口，在110℃下水解24小时，开管后真空抽干盐酸，加入50ml双蒸水，再真空抽干，残渣用双蒸水稀释至100ml或者00ml(根据样品浓度决定)．用Backman 121MB氨基酸分析仪测定各样品的氨基酸组成。实验结果见表1表1．氨基酸含量分析数据表(mg／g样品) 氨基酸分析结果表明样品中含有丰富的氨基酸，其中天冬氨酸和酪氨酸的含量尤高，而天冬氨酸能加速肌肉中ATP、CP及糖原的合成，又有利于乙酰辅酶A进入三羧酸循环。2．元素分析结果准确称取实施例1所得样品约0．1克，滴加浓硝酸加热使其水解后，加入双氧水约0．5ml，用蒸馏水稀释至50ml，再用等离子光谱仪(JCAP 9000ST型)进行定量分析。供本实验用的测试液浓度为2．42mg／ml，元素含量以ng／ml表示。所得分析结果如下<tables id="table2" num="002"><table>元素含量元素含量Pb0．0621Mo0．0041Au0．0056Cr0．00271Fe4．556Mn0．1821Mg13．62Co0．0113Si6．920P50．18Al2．358Ba0．1946Ti0．0755B0．3915Cu0．0972Sr0．1320Ni0．0247In0．0639Zn0．4016La0．0698Cd0．0613Ce0．0497Bi0．0454Y0．0055Ga0．0747Sc0．0025Ag0．0152Be0．0041Ca59．41As-V0．0149Nd0．2402</table></tables>3．生化分析(1)U．V．光谱藻蛋白经Sephadex G-100柱层析后被分为两个主要的色素蛋白，即分子量较大的黄色蛋白和分子量较小的蓝色蛋白，如图1所示。其中使用Sephadex G 100柱(2×105cm)，洗脱剂采用0．05M磷酸缓冲液，PH8．0，流速3．5ml／min。如图2所示，藻蛋白经分离后的成分中Emax670nm(黄色蛋白)，Emax615nm(藻蓝蛋白)，650nm(别藻蓝蛋白)。(2)化学稳定性藻蓝蛋白提取物冻干粉在干燥的室温条件下，可保存两年不退色，不变质。质检方法1)蛋白含量测定BSA，购自中科院东方仪器公司，批号90090。Shimadzu公司UV-240分光光度计。双缩脲法(1)制做标准曲线分别量取0，0．15，0．30，0．60，0．90，1．20，1．50ml的标准蛋白贮存液(1．2mg／ml)，用双蒸水补足到1．5ml／管，各加入1．5ml6％NaOH和0．15ml双缩脲试剂，混匀，在室温下静置20分钟，于310nm处比色，画出OD值与样品浓度的相关曲线。(2)测定样品(藻蓝蛋白)中蛋白含量称取样品13．2mg，用双蒸水溶解并定溶至50ml，测量方法同上。2)灰份含量测定灼烧法测定灰份(包括无机盐类物质)，采用灼烧、恒重、称量法测定。3)氨基酸分析精确称取约0．2mg样品，加入1ml5．7N HCl，抽气后封口，在110℃下水解24小时。开管后真空抽干盐酸，加入50ml双蒸水，再真空抽干。残渣用双蒸水稀释至100ml或200ml(根据样品浓度决定)。用Backman 121MB氨基酸分析仪测定各样品的氨基酸组成。4)无菌实验．(1)样品经乳酸发酵及EMB培养基培养后，大肠杆菌数不超过3个；(2)样品经牛肉汤培养基培养后，总菌数小于100个。4．功效(1)增加机体内T-细胞的数量-T淋巴细胞检验实验实验动物及药品实验动物昆明种小鼠，体重18～22克，疫检合格。环磷酰胺(注射用)上海第十二制药厂生产。药剂实施例1制得的干粉，于实验前配制成20μg／ml和10μg／ml的药液。实验方法将小鼠随机分为四组，每组10只，给药组每只每日腹腔注射环磷酰胺10mg／kg，再经口灌胃给药液，每只每日0．2ml，即相当于0．2mg／kg(高剂量组)和0．1mg／kg(低剂量组)；阳性对照组每只每日腹腔注射环磷酰胺10mg／kg，在经口灌胃常水0．2ml；空白对照组不注射、不给药，只经口灌胃常水0．2ml／只／日。连续给药10天后，停药3天，取小鼠眼眶血做白细胞推片、孵育、染色后，T淋巴细胞百分率。实验结果注射环磷酰胺后应造成小鼠T-淋巴细胞明显下降，但实验结果给药组反而出现上升，尤其是高剂量组其上升结果与对照组相比呈现显著性差异(P＜0．01)。实验结果表明药液具有较好的提高机体免疫力的功能。临床试用证明它对爱滋病(HIV-1)病毒、单疱疹病毒、流感A病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒等都有很好的抑制作用。(2)对皮肤中胶原蛋白含量的影响哺乳动物及人类皮肤中胶原蛋白的含量是随着年龄的增长而逐渐降低的。在胶原蛋白的氨基酸组成中，羟脯氨酸占12～14％。而其它组织中几乎不含羟脯氨酸。含量高且稳定的羟脯氨酸成分是胶原蛋白的一大特点。因此，通过定量测定皮肤中羟脯氨酸含量可作为测定皮肤衰老程本文档来自技高网...

【技术保护点】
含藻蓝蛋白提取物的抗病毒组合物，其中含有治疗有效量的藻蓝蛋白提取物和／或药物学上可接受的载体，其中藻蓝蛋白提取物是以下列步骤制得的：ａ．将蓝绿藻粉溶于５－２０倍水中，低温保持８－３０小时，ｂ．固液分离，将溶液的ｐＨ值调至酸性，放置， ｃ．收集所得固体为藻蓝蛋白粗品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘兆乾，丁健，郭振泉，齐清，
申请(专利权)人：齐清，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]