骨代谢异常症治疗剂制造技术

本发明专利技术提供骨代谢异常症治疗剂，选自破骨细胞形成抑制因子（ＯＣＩＦ）、其类似物或其变体的一种以上物质与多糖类或其衍生物组成的骨代谢异常症治疗剂。多糖类或其衍生物可使用肝素、硫酸葡聚糖等。本发明专利技术提供对骨质疏松症、高钙血症、慢性关节风湿病等骨代谢异常疾病具有优异的治疗活性并可长期维持活性的骨代谢异常症治疗剂。它们作为医药品是有用的。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及活性及活性持续性高的新型骨代谢异常症治疗剂。本专利技术的骨代谢治疗剂对骨质疏松症、高钙血症、慢性关节风湿病等骨代谢异常症具有优异的治疗活性，是有用的医药品。
技术介绍
骨骼不仅具有支持机体的能力，而且是机体内钙的最大储存脏器，机体中所存在钙的99％储存于骨骼中。而且，骨骼不断地受到骨吸收和骨形成这两种相反的作用，在保持血清钙的稳定性上起着重要的作用。已知在骨吸收上起重要作用的破骨细胞活化时，过量钙从骨骼向血液中流出，破坏血液中钙的稳定性，引起高钙血症。高钙血症是因癌的骨转移等而发生的疾病，预期其患者数目将增加，急需开发该疾病的治疗剂。目前，作为这种高钙血症治疗剂而使用的有降钙素及其衍生物或双膦酸类化合物。然而，它们的治疗效果并不令人满意，因而期望开发取代它们的新型药物。另一方面，据报告，已知作为抑制破骨细胞分化的蛋白因子的破骨细胞形成抑制因子(OCIF)(WO96/26217号公报)具有降低血清钙的作用(BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS,Vol.245,pp382-387(1998)；Endocrinology,Vol.139,pp4012-4015(1998))。OCIF可望成为全新的高钙血症治疗剂，但因为OCIF是蛋白质，所以在体内迅速代谢。因此，期望开发较稳定的、作用强的OCIF制剂。专利技术的揭示本专利技术者们鉴于上述情况进行锐意研究的结果，发现通过在OCIF中加入多糖类制成制剂，可进一步增强OCIF所具有的对骨代谢异常症的效果。从而，本专利技术的课题是提供进一步增强OCIF对骨代谢异常症的效果并使该效果持续的骨代谢异常症治疗剂。本专利技术涉及选自破骨细胞形成抑制因子(OCIF)、其类似物或其变体的一种以上物质与多糖类或其衍生物组成的骨代谢异常症治疗剂。本专利技术中的上述多糖类较佳为肝素，上述多糖类衍生物较佳为硫酸葡聚糖。本专利技术提供了对骨质疏松症、高钙血症、慢性关节风湿病等骨代谢异常症具有优异的治疗活性且活性持续的治疗剂，作为医药品是有用的。本专利技术还涉及用多糖类或其衍生物提高破骨细胞形成抑制因子活性的方法。本专利技术中所用的OCIF是用例如WO96/26217号公报记载的方法所得的天然型或基因重组型OCIF，其来源无特殊限制，特别可取的是人型OCIF。这样的天然型或基因重组型OCIF是在非还原条件下用SDS-PAGE测定分子量约为60kDa的单体型或分子量约为120kDa的二聚物型。本专利技术中也可使用OCIF的类似物或变体。类似物有例如从用IMR-90细胞(ATCC CCL-186)的聚(A)+RNA制成的cDNA文库中，将OCIFcDNA片段作为探针用杂交法得到的OCIF类似物的cDNA插入表达载体，将此载体引入常用的宿主，在宿主中表达，用常规方法精制而成的类似物。较具体的有WO96/26217号公报上记载的OCIF2、OCIF3、OCIF4和OCIF5。如WO96/26217号公报所述，OCIF2系OCIFcDNA碱基序列265位鸟嘌呤至285位鸟嘌呤的21个碱基对缺失，在氨基酸序列上OCIF的氨基酸序列68位谷氨酸(Glu)至74位谷氨酰胺(Gln)的7个氨基酸缺失。OCIF3系将OCIFcDNA碱基序列9位胞苷替换为鸟嘌呤，在氨基酸序列上，将OCIF氨基酸序列的19位天冬酰胺(Asn)替换为赖氨酸(Lys)。但是，这是信号序列中氨基酸的取代，被认为对分泌的OCIF3无影响。而且，OCIFcDNA碱基序列872位鸟嘌呤至988位鸟嘌呤的117个碱基对缺失，在氨基酸序列上，OCIF的氨基酸序列270位苏氨酸(Thr)至308位亮氨酸(Leu)的39个氨基酸缺失。OCIF4系将OCIFcDNA碱基序列9位胞苷替换为鸟嘌呤，在氨基酸序列上，将OCIF氨基酸序列的-19位天冬酰胺(Asn)替换为赖氨酸(Lys)；又将22位鸟嘌呤替换为胸苷，在氨基酸序列上，将OCIF的氨基酸序列-14位丙氨酸(Ala)替换为丝氨酸(Ser)。但是，这是信号序列中氨基酸的取代，被认为对分泌的OCIF4无影响。而且，OCIFcDNA碱基序列400位至401位之间插入约4kb的内含子2，开放读框终止于此。在氨基酸序列上，OCIF的氨基酸序列112位丙氨酸(Ala)后加上21个氨基酸组成的新氨基酸序列。OCIF5系将OCIFcDNA碱基序列9位胞苷替换为鸟嘌呤，在氨基酸序列上，将OCIF氨基酸序列的一19位天冬酰胺(Asn)替换为赖氨酸(Lys)。但是，这是信号序列中氨基酸的取代，被认为对分泌的OCIF5无影响。而且，OCIFcDNA碱基序列400位至401位之间插入约1.8kb的内含子2的后半部分，开放读框终止于此。在氨基酸序列上，OCIF的氨基酸序列112位丙氨酸(Ala)后加上12个氨基酸组成的新氨基酸序列。作为变体，可列举对OCIF的氨基酸序列插入、添加、取代或缺失一个以上氨基酸而得到的物质。较具体的是，将OCIFcDNA用PCR法或用限制酶切断，制成引入取代或缺失变异的OCIF变体cDNA，将此cDNA插入表达载体，将载体引入常用宿主，在宿主中表达，用常规方法精制而成。本专利技术中所用的多糖类是单糖通过糖苷键生成的聚合物(葡聚糖)，较佳为两种以上结构单糖构成的杂多糖(杂聚糖)。具体地说，可使用天然多糖类，例如透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、硫酸角质素、角叉菜胶、果胶和肝素；合成多糖类，如葡聚糖等；及合成多糖类的衍生物，如硫酸葡聚糖等。特别好的是使用硫酸酯化的葡聚糖，例如可使用分子量3,000～6,000的肝素或分子量5,000～10,000的硫酸葡聚糖。本专利技术的骨代谢异常症治疗剂由选自OCIF、其类似物或其变体的一种以上物质与多糖类或其衍生物组成，相对于OCIF、其类似物或其变体，多糖类或其衍生物的比例较佳为1～100倍量，特别好的是1～16倍。由选自OCIF、其类似物或其变体的一种以上物质与多糖类或其衍生物组成的本专利技术的骨代谢异常症治疗剂作为持续性和治疗效果优于OCIF单独给药的骨代谢异常症治疗剂，对诸如骨质疏松症、高钙血症、慢性关节风湿病等骨代谢异常症均有效。本专利技术的制剂可经口或非经口地安全地对人和动物投药。非经口投药可列举如静脉注射、肌肉注射、皮下注射、经鼻给药、口腔内给药、经粘膜给药等。以这些给药途径给药的制剂可按各自的制剂学方法作成制剂，与药理学上允许的载体、赋形剂、润滑剂、着色剂等一起，作为药物组合物的形式给药。制备注射剂时，除OCIF及多糖类外，根据需要添加pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、加溶剂等，按常规方法制成注射剂。其中也可合用人血清白蛋白和表面活性剂等公知的添加剂。表面活性剂可列举如聚阴离子和阴离子表面活性剂等。注射剂分注入小瓶，成为溶液制剂，或形成冷冻干燥制剂，使用时可用适量蒸馏水和生理盐水等溶解，进行配制。将OCIF以3或24mg/kg的用量给正常大鼠静脉注射，一天一次，连续2周，证实骨密度和骨量增加，但未观察到38个组织中组织病理学的异常和血球数的变化(H.Yasuda等Endocrinology,Vol.139,pp1329-1337(1998))。因此，OCIF的作用对骨骼特异性高，可望能安全地给人投药本文档来自技高网...

【技术保护点】
骨代谢异常症治疗剂，由选自破骨细胞形成抑制因子（ＯＣＩＦ）、其类似物或其变体的一种以上物质与多糖类或其衍生物所组成。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：望月伸一，藤濑畅彰，增山千春，津田英资，东尾侃二，
申请(专利权)人：三共株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]