复脑素在防治心脑血管疾病中的应用制造技术

本发明专利技术涉及山萘酚－３－Ｏ－芸香糖苷在制备防治心脑血管疾病药物中的应用，经研究表明，山萘酚－３－Ｏ－芸香糖苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有较强的保护作用，并能明显降低家兔血粘度，延长凝血时间，保护血管内皮细胞，并且无毒性，使用安全，因而可用于制备防治心脑血管疾病的药物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医药
，具体涉及山萘酚-3-O-芸香糖苷在制备防治心脑血管疾病药物中的应用。该化合物可由菊科植物红花属植物红花(Carthamus tinctorius)、银杏科植物银杏(Ginkgo biloba)、凤仙花科植物凤仙花(Impatiens balsamina)五加科植物异株五加(Acanthopanax sieboldianus)等植物中提取制得。据报道，具有镇痛及抗过敏活性(The Analgesic Activity of Hedyosmum bonplandianumFlavonoid Glycosides，Cardenas LC，et al.Planta Med，1993，59(1)26～27.Antianaphylactic Effects of the Principal Compounds fromthe White Petals of Impatiens balsamina L.Fukumoto H，et al.Phytotherapy Research，1996，10(3)202～206)，但是，从未有过用于制备防治心脑血管疾病药物的报导。脑血管病主要是在血管内形成血栓，导致脑缺血，从而对人类健康造成严重威胁。研究表明血栓形成的因素有三(1)血管内皮损伤；(2)血小板粘附、聚集和释放反应(3)凝血活性增高，血液粘度增加，血流缓慢。防止血液凝固或抑制血小板功能可以预防血栓形成。具有溶栓、抗凝、降低血粘度、保护血管内皮细胞、抑制血小板聚集、等作用的物质可以防治心肌梗塞和脑梗塞等心脑血管疾病。我们的研究表明山萘酚-3-O-芸香糖苷具有溶栓、明显改善脑缺血大鼠的成活率、改善神经损伤症状、对大鼠脑缺血具有较强的保护作用，同时，山萘酚-3-O-芸香糖苷具有明显的抗凝、降低血粘度、保护血管内皮细胞的作用。因此，山萘酚-3-O-芸香糖苷可以制成防治心肌梗塞和脑梗塞等心脑血管疾病的药物和食品。为了通过药理试验结果进一步说明本专利技术在医药领域中的新用途。一、对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用试验动物为Wistar大鼠40只，雄性，体重250-280g。用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将大鼠用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，颈正中切口，分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉。分离右侧颈内动脉，沿颈内动脉向下分离翼颚动脉，根部结扎该分枝。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入4-0尼龙线，其深度为17～20mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断氢大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，外留1cm长线头，缝合皮肤。缺血时尾静脉注射药物。缺血2小时后再灌注，勿需再次麻醉和切开皮肤，轻轻提拉所留线头至有阻力时提示尼龙线头端已至颈总动脉切口处，血流再通。假手术组除不插线外，其余步骤同上。再灌注24h后存活鼠，观察大鼠行为学变化，进行神经病学评分。行为评分方法参考Zea Longa的5分制评分标准0分，无神经损伤症状；1分，不能完全伸展对侧前爪；2分，向外侧转圈；3分，向对侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失。然后快速断头取鼠大脑。在前连合平面切下厚约2mm冠状脑片，立刻置于2％TTC溶液中，37℃孵育30分钟。梗塞区呈现白色，非梗塞区呈现红色。用求积仪(C63图象分析系统)测出各区面积，并计算梗塞区占整个冠面的百分比(％)。实验结果表明药物组明显改善了脑缺血大鼠的存活率，由模型组的20％提高到60％；从神经学评分上优于模型组；同时，药物组非常显著地降低了脑梗塞面积，由模型组的36.68％±0.98％下降为11.52％±1.32％。上述结果表明，山萘酚-3-O-芸香糖苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有较强的保护作用(见表1)。表1药物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用 二、对凝血系统的影响试验动物为家兔5只，购自第二军医大学动物房，实验前饲养1个月，体重(2.5±0.3)kg。仪器与试剂ST4Bio型半自动血液凝固测定仪(法国Diagnostica STAGO产品)，抗肝素钙凝血活酶，部分凝血活酶(上海贝特生物技术有限公司)，氯化钙、柠檬酸钠、戊巴比妥钠皆为分析纯国产试剂。试验结果表明，山萘酚-3-O-芸香糖苷能明显延长凝血酶原时间和部分凝血活酶时间，有利于防治血栓形成(见表2)。表2 山萘酚-3-O-芸香糖苷对家兔凝血系统的影响 三、对血液流变学的影响试验动物为家兔20只，每只2kg，雌雄各半，分成4组，每组5只。试验仪器为德国全自动LBY-N6A自清洗旋转式粘度计及其自带的流变学软件平台。实验方法家兔分别耳静脉取血4ml，置于肝素干管中，于LBY-N6A自清洗旋转式粘度计测量家兔全血粘度、血浆粘度、全血还原粘度、红细胞压积，并通过粘度计自带的流变学软件平台分析血沉、红细胞聚集指数、刚性指数、变形指数、电泳指数等。给药途径耳静脉注射。给药0.5小时后，再次取血测量家兔上述各种指标，观察给药前后上述各指标的变化。山萘酚-3-O-芸香糖苷分两个剂量组高剂量组(10mg/Kg)，低剂量组(5mg/Kg)，阴性对照为溶剂组(2.5ml/Kg)，阳性对照为红花注射液(2.5ml/Kg)。给药次数均单次给药。试验结果表明，高剂量组显著降低家兔全血粘度和全血还原粘度(P＜0.05)，并能显著降低红细胞聚集指数(P＜0.05)，而对家兔血浆粘度及其它指标无显著影响(P＞0.05)。血粘度是血液流变学的重要指标，因此，山萘酚-3-O-芸香糖苷通过显著降低全血粘度、全血还原粘度和红细胞聚集指数，而有利于防治血栓形成(见表3)。表3山萘酚-3-O-芸香糖苷对家兔血液流变学的影响 四、对培养内皮细胞的保护作用牛主动脉内皮细胞(BAEC)4～5代，铺96孔板长成致密单层，肿瘤坏死因子(TNF)及药物共孵，四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活。492nm处测吸收度。结果表明对照组为0.083±0.003，TNF(200U/ml)为0.0463±0.005，TNF+药物组(10-4mg/ml)为0.071±0.006，可见山萘酚-3-O-芸香糖苷对TNF所致的BAEC的损伤有较好的保护作用。五、急性毒性试验昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重18～20g，由第二军医大学实验动物中心提供。在室温20±2℃实验室适应3天后开始实验。随机分成3组，分别灌胃给予山萘酚-3-O-芸香糖苷1.0、2.0、4.0g/kg体重，立即观察各剂量组小鼠的反应情况及在7天内的死亡的数目，并对存活和死亡的小鼠进行解剖病理检查，结果表明，各剂量组小鼠无死亡，病检未见明显异常变化，表明山萘酚-3-O-芸香糖苷口服具有较高的安全性。据资料报道，山萘酚-3-O-芸香糖苷还有镇痛作用、促进皮肤色素沉着、抗过敏作用、抑制RBL-1细胞的花生四烯酸盐5-脂质氧化酶、抗氧化等活性。以上试验结果说明，山萘酚-3-O-芸香糖苷对脑缺血有较强的保护作用，能够明显改善脑缺血大鼠的存活率及神经神经损伤症状，显著地降低脑梗塞面积，明显降低血粘度，延长凝血时间，保护血管内皮细胞，从而有效防治心脑血管疾病。而且，无毒性，使用安全。因此，山萘酚-3-O-芸香糖苷可用于制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
山萘酚－３－Ｏ－芸香糖苷在制备防治心脑血管疾病药物中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭美丽，张戈，张汉明，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]