本发明专利技术公开了一种RNA吸附材料及使用方法。该方法具体如下：天然的坡缕石矿产粉碎后用5.0mol/L盐酸在90℃处理1.5小时，将处理后的坡缕石粉末加入pH为3.5-4.5的RNA溶液中，振荡、混匀后，坡缕石可吸附溶液中RNA；离心吸去上清，吸附RNA后的坡缕石中加入pH为7.0-8.0的溶液中后可释放吸附的RNA。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种RNA吸附材料及使用方法，具体是用酸处理过的坡缕石在酸性环境来吸附RNA ；当溶液处于中性环境中时释放吸附的RNA。
技术介绍
对生物样品进行RNA分析的时，需要进行RNA提取、RNA纯化、RNA扩增等。如何保证RNA的完整性、纯度对于RNA的分析至关重要。目前常用的RNA吸附材料有⑴表面偶联有二乙胺乙醇(DEAE)的亲水性树脂， 该树脂依靠表面DEAE所带正电荷，吸附带负电荷RNA。(2)磁珠；该吸附材料以磁珠为载体，依靠表面羧基化的表面来吸附RNA，而磁珠使得吸附的RNA易于分离出来。(3)其他的硅胶、玻璃等吸附材料也是依靠类似的原理进行RNA吸附。但是上述这些材料表面亲水性强，极易吸附蛋白，糖类，RNA等水容物，从而使这些吸附材料经几次循环后吸附过多杂质，影响了表面吸附RNA的能力，同时杂质阻塞树脂间隙，使液体流过柱子的速度明显变慢，二是偶连基团与树脂的偶联并不十分稳定，在一经使用后的液体环境中，容易逐步解离。坡缕石是一种层链状结构的含水富镁铝硅酸盐黏土矿物，1862年因首次发现于苏联的乌拉克地区(坡缕高斯克)而得名。它因质地轻柔，具有较强的吸附性能，坡缕石的一般化学结构式为Mg5 (H20) 4 2 (OH) 2。坡缕石的比表面积达372m2/g，远远高于活化氧化铝、硅藻土、固体硅胶等常用的固体吸附剂。这是因为坡缕石晶形结构中有许多管状贯穿通道，可吸附多种极性与非极性分子物质进入贯穿通道之中，具有很强的吸附力。目前坡缕石已经被广泛用于吸附黄酒中的悬浮沉淀。此外，坡缕石还具有很强的酸、碱和热稳定性。有试验表明将坡缕石分别浸泡在 10%的盐酸和10%的NaOH溶液中，放置48小时后观察，材料膨胀，但不溶解。将坡缕石分别置于丙酮、乙醚、四氯化碳、乙酸乙酯、汽油等有机溶剂中浸泡48小时，材料仍无变化。实验表明，坡缕石对酸、碱、及有机溶剂皆有惰性，化学稳定性好。将天然坡缕石置于800°C的高温炉中灼烧4小时，材料无变化，仍具柔软性。当温度升至1000°C以上时，材料开始发硬， 仍具白色。说明坡缕石具有很好的热稳定性。上述性质表明一方面坡缕石良好的吸附性能可以用于RNA等核酸的吸附，另一方面也表明坡缕石作为一种吸附材料具有极强的稳定性，可以反复循环使用。本专利技术正是利用坡缕石经酸处理后晶体产生的孔道所具有的吸附能力从而达吸附RNA的目的。
技术实现思路
1、本专利技术公开了一种新的RNA吸附材料及使用方法。该方法具体如下天然的坡缕石矿产洗涤、烘干、粉碎后用5. Omol/L盐酸(或2. 5mol/L硫酸)在90°C处理1. 5小时； 处理后于120°C烘干。将烘干后的坡缕石粉末加入PH为3. 5-4. 5的RNA溶液中，振荡、混勻后，坡缕石可吸附溶液中RNA ；吸附后RNA的坡缕石加入pH为7. 0-8. 0的溶液中后可释放RNA。本专利技术通过以下途径实现1、将坡缕石粉末用95%的乙醇溶液中浸泡48小时，浸泡后，材料不溶解，不开裂， 分散性能增加；再将坡缕石粉末置于5. Omol/L盐酸(或2. 5mol/L硫酸)在90°C处理1. 5 小时，120摄氏度烘干。2、将坡缕石粉末加入RNA溶液中，调节反应pH值，使pH值3. 5-4. 5，反应温度为室3、振荡90秒，让RNA与坡缕石粉末相结合。4、12000rpm离心5分钟，弃上清。5、加入pH为7. 7-8. 0水或低盐溶液，振荡15秒，RNA重新释放到溶液中。下面结合实施例对本专利技术进行进一步说明实施例1坡缕石的RNA吸附性能取20mg坡缕石粉末加入1. 5ml离心管中，加入Iml 95 %的乙醇溶液，振荡混勻后浸泡48小时；浸泡后12000rpm离心，弃上清，常温下凉干。凉干后再将坡缕石粉末置于 5. Omol/L盐酸(或2. 5mol/L硫酸)在90°C处理1. 5小时，120摄氏度烘干。将处理后的坡缕石粉末加入总体积200 μ 1，含有1 μ gRNA溶液中(溶液pH值 3. 5-4. 5)，旋涡振荡90秒。12000rpm离心5分钟，尽可能弃上清(上清1)。再向沉淀中 (沉淀1)加入20 μ 1 pH为7. 1水或pH为7. 80. lmol/L的Tris-HCl溶液，振荡15秒后离心，吸出上清(上清2)。分别取2 μ 1上清1禾Π 2 μ 1上清2以及Iug沉淀1进行电泳检测。 检测结果表明(图1)，在沉淀1中有RNA与坡缕石结合，且在胶孔中，不能进入胶中，说明处理后的坡缕石能吸附RNA。在最终的上清2中能检测到RNA，而上清1中几乎没有RNA，RNA 回收率> 90%，说明处理后的坡缕石对于RNA的吸附是较为完全的。实施例2不同pH值对RNA吸附性能的影响取20mg坡缕石粉末加入1. 5ml离心管中，加入Iml 95 %的乙醇溶液，振荡混勻后浸泡48小时；浸泡后12000rpm离心，弃上清，常温下凉干。凉干后再将坡缕石粉末置于 5. 0mol/L盐酸(或2. 5mol/L硫酸)90°C处理1. 5小时，120摄氏度烘干。将处理后的坡缕石粉末加入总体积200 μ 1，含有1 μ g RNA溶液中(溶液pH值 3. 5-4. 5)，旋涡振荡30秒。12000rpm离心5分钟，尽可能弃上清。再向沉淀中加入20 μ 1 0. lmol/L 的 Tris-HCl,pH = 3. 5、4· 5、5· 5、6· 5、7· 5、8· 5、9· 5 的溶液，振荡 15 秒后离心，分别取2 μ 1上清进行电泳检测。检测结果表明，随着PH的增加，吸附RNA的量是先上升后下降的，pH = 7. 5的1Tris-HCl溶液对于RNA的释放最佳。实施例3不同杂质对RNA吸附性能的影响取20mg坡缕石粉末加入1. 5ml离心管中，加入lml95 %的乙醇溶液，振荡混勻后浸泡48小时；浸泡后12000rpm离心，弃上清，常温下凉干。凉干后再将坡缕石粉末置于 5. 0mol/L盐酸(或2. 5mol/L硫酸)处理1. 5小时，120摄氏度烘干。将处理后的坡缕石粉末加入总体积200μ1，含有IygRNA溶液中(溶液pH 值3. 5)，再分别添加20μ 1 10%的SDS，20y 1无水乙醇，20μ 1氯仿，旋涡振荡30秒。 12000rpm离心5分钟，尽可能弃上清。再向沉淀中加入20 μ 1 pH为7. 7-8. 0水或pH为 7. 7-8. 0,0. lmol/L的Tris-HCl溶液，振荡15秒后离心，取2 μ 1上清进行电泳检测。检测4结果表明(图2)终浓度为的SDS (泳道2)和氯仿(泳道4)的存在会对RNA的吸附造成影响，而无水乙醇(泳道3)则不会导致RNA吸附能力的下降。附图说明图1为坡缕石对RNA吸附性能电泳图。图2不同杂质RNA吸附性能的影响。权利要求1.一种RNA吸附材料，其特征在于以处理过的坡缕石为RNA吸附材料，坡缕石的处理方法为将原矿坡缕石用水洗涤、晒干、粉碎后，坡缕石粉末用95%的乙醇溶液中浸泡48小时，浸泡后再将坡缕石粉末置于5. Omol/L盐酸(或2. 5mol/L硫酸)在90°C处理1.5小时； 处理后于120°C烘干。2.根据权利要求1所述的RNA吸附材料，其特征在于将其加入pH为3.5-4. 5的溶液中可获得最佳吸本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种ＲＮＡ吸附材料，其特征在于以处理过的坡缕石为ＲＮＡ吸附材料，坡缕石的处理方法为：将原矿坡缕石用水洗涤、晒干、粉碎后，坡缕石粉末用９５％的乙醇溶液中浸泡４８小时，浸泡后再将坡缕石粉末置于５．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸（或２．５ｍｏｌ／Ｌ硫酸）在９０℃处理１．５小时；处理后于１２０℃烘干。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴心丹，
申请(专利权)人：吴心丹，
类型：发明
国别省市：32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。