草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗制备方法技术

本发明专利技术是一种草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗制备方法，其步骤包括：采用草鱼肾细胞系即ＣＩＫ细胞增殖ＧＣＲＶ８７３，ＧＣＲＶ８７３是草鱼呼肠孤病毒湖南邵阳株；通过离心法，对感染了ＧＣＲＶ８７３的细胞病毒悬液进行纯化和浓缩；表面活性剂处理纯化的病毒，使完整病毒结构解体，形成病毒核酸与衣壳蛋白亚单位组分；采用核酸酶消化，降解游离的病毒基因组ｄｓＲＮＡ；通过透析处理，得到不含核酸的草鱼呼肠孤病毒蛋白抗原亚单位制剂；然后用生理盐水稀释，即得所述疫苗。本发明专利技术疫苗的优点是：不含有病毒遗传物质ＲＮＡ、含有完整病毒蛋白抗原成分，具有制备方法简单、操作方便、产物纯度高、包装体积小、便于运输与保存。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒学领域，特别是一种草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗制备方法。本专利技术所用病毒株为草鱼呼肠孤病毒湖南邵阳株GCRV873(Grass carp reovirus)，又称草鱼出血病病毒湖南邵阳株GCHV873(Grass carp hemorrhagic virus)，已由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日期是2004年7月23日，保藏编号是CCTCC NOV200414。
技术介绍
草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国淡水养殖四大家鱼之一。草鱼呼肠孤病毒是引起草鱼死亡的主要病原，发病严重时，可造成85％以上的草鱼鱼苗发病死亡，由此给淡水养殖业造成严重的经济损失。对于病毒性疾病的防治，疫苗是最为有效的措施。草鱼呼肠孤病毒粗制组织浆及细胞灭活疫苗已相继应用于生产，并取得了一定效果。但是，由于灭活疫苗的稳定性、纯度及安全性等方面存在诸多不利因素，其应用推广价值有限。草鱼出血病在我国有些地区仍时有发生，而且，在我国大面积再度暴发的隐患依然不可忽视。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是鉴于减毒活疫苗及粗制灭火疫苗所存在的残余感染性与效价不稳定等因素，有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗制备方法，其特征是包括以下步骤：（１）采用草鱼肾细胞系即ＣＩＫ细胞增殖ＧＣＲＶ８７３，ＧＣＲＶ８７３是草鱼呼肠孤病毒湖南邵阳株，（２）通过离心法，对感染了ＧＣＲＶ８７３的细胞病毒悬液进行纯化和 浓缩，（３）表面活性剂处理纯化的病毒，使完整病毒结构解体，形成病毒核酸与衣壳蛋白亚单位组分，（４）采用核酸酶消化，降解游离的病毒基因组ｄｓＲＮＡ，（５）通过透析处理，得到不含核酸的草鱼呼肠孤病毒蛋白抗原亚单位制剂，　 　（６）用生理盐水稀释病毒蛋白抗原亚单位制剂，制备成草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗...

【技术特征摘要】
1.一种草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗制备方法，其特征是包括以下步骤(1)采用草鱼肾细胞系即CIK细胞增殖GCRV873，GCRV873是草鱼呼肠孤病毒湖南邵阳株，(2)通过离心法，对感染了GCRV873的细胞病毒悬液进行纯化和浓缩，(3)表面活性剂处理纯化的病毒，使完整病毒结构解体，形成病毒核酸与衣壳蛋白亚单位组分，(4)采用核酸酶消化，降解游离的病毒基因组dsRNA，(5)通过透析处理，得到不含核酸的草鱼呼肠孤病毒蛋白抗原亚单位制剂，(6)用生理盐水稀释病毒蛋白抗原亚单位制剂，制备成草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗。2.根据权利要求1所述的草鱼呼肠孤病毒抗原亚单位疫苗制备方法，其特征是GCRV873悬液的制备包括以下步骤(1)将预接种的CIK细胞用PBS即磷酸盐缓冲液冲洗3次，除去牛血清蛋白组分，PBS浓度为10mmol/L，(2)按细胞培养液1/10的培养体积加入GCRV873的病毒原液，病毒原液感染复数为5～10PFU/cell，(3)病毒吸附细胞30～60分钟后，倒掉未吸附的病毒原液，然后用PBS清洗3次，去除未吸附的病毒颗粒，(4)采用含2％小牛血清的MEM或MEM-2维持液进行病毒增殖，在病毒感染48～72h后，收集病毒悬液，于4℃保存备...

【专利技术属性】
技术研发人员：方勤，丁清泉，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]