一种从低纯度胆红素中提取高纯度胆红素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从低纯度胆红素中提取高纯度胆红素的方法。该方法先将低纯度胆红素充分溶解于由二氯甲烷和二甲基亚砜按比混合而成的溶剂中；接着加入纯化水用以优化其中的二甲基亚砜的浓度，促其胆红素固体全部析出；然后对其进行抽滤获得胆红素滤饼；再用甲醇和纯化水对其滤饼进行洗脱，至其滤液变为无色后，用无水乙醇对其进行冲洗，接着加入二氯甲烷冲洗至抽滤无洗脱液流出后，最后再将滤饼进行充分干燥，终得高纯度胆红素。利用本发明专利技术获得的胆红素产品，其纯度在97%以上。本发明专利技术生产成本低，污染小，得率高，可满足市场所需。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药
，尤其涉及一种胆红素的提纯方法。
技术介绍
Hiluxibi η胆红素Bilirubin (C33H36N4O6,分子质量584. 65)，存在于胆汁和血液中，是胆汁中 的主要色素，为血红蛋白分解代谢的还原产物。胆红素及其钙盐在医学临床上具有降低血 压及促进红细胞新生等作用。此外，胆红素对乙型脑炎病毒和W256癌细胞具有强抑制功 效，并且是国家中药一类新药体外培育牛黄的主要指标成分，在医药中应用广泛。胆红素为金红色或深红色方形或平等四边形的片状单斜棱晶。干燥固体较稳定， 在氯仿溶液中置阴凉处也较稳定。在光照下的强酸性溶液或碱液中，或遇三价铁离子时极 不稳定，很快被氧化成无药用价值的胆绿素。胆红素钠盐易溶于水；其钙盐、镁盐、钡盐不溶 于水，易溶于氯仿、苯、氯苯，二硫化碳及碱液中，微溶于乙醇和乙醚。与甘氨酸、丙氨酸或组 氨酸结合，或加血清蛋白、抗氧剂、维生素C或乙二胺四乙酸二钠可使其稳定。根据胆红素钙盐、镁盐或钡盐不溶于水的性质，先使胆汁中的胆红素在加热时与 氢氧化钙结合成胆红素钙，和其杂质分离，然后用无机强酸酸化，使胆红素(有机弱酸)再 次析出，并使生产的无机钙盐溶于水中，分离析出胆红素，再分步除去醇溶性、水溶性等杂 质，最后用氯仿萃取即可把胆红素提取出来。此类方法所得的胆红素为低纯度胆红素，其胆 红素含量都在95%以下，只能满足人工牛黄生产所需。经系统文献检索，到目前为止国内外在胆红素提纯方面，主要是利用胆红素易溶 于氯仿的特性，用氯仿萃取提纯。此种方法高污染、低收率，仅为实验室小量制备，所得高纯 度胆红素也仅作为实验室试剂使用，不能工业化规模生产。国家中药一类新体外培育牛黄是以牛的新鲜胆囊胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆 酸、复合胆红素钙，模拟天然牛黄在牛体内的生长环境而制成的，是优质天然牛黄的替代 品。其中复合胆红素钙的制备需用高纯度胆红素，即胆红素的含量要求在97%以上，而现有 的低纯度胆红素不能满足要求。不仅如此，该产品对高纯度胆红素的需求量很大。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术的不足，提供了一种从低纯度胆红素中提取 高纯度胆红素的方法。该方法工艺简短，环境污染较小，产品纯度在97%以上。本专利技术的技术方案是包括下列步骤1、配制低纯度胆红素溶剂即将二氯甲烷和二甲基亚砜按IL/(4. 5 5. ^L的比 例混合均勻；2、制备低纯度胆红素溶液即将低纯度胆红素(重量g)按lg/(ll 13)L的比 例置入上步配置好的低纯度胆红素溶剂(体积L)中，充分搅拌使其完全溶解；3、优化低纯度胆红素溶液中的二甲基亚砜的浓度，使其析出胆红素固体即按二 甲基亚砜IL/纯化水(4. 0 4. 7)L的比例向低纯度胆红素溶液中加入纯化水，边加边搅 拌，直至胆红素固体全部析出；4、抽滤获得胆红素滤饼1 即对上步已经析出胆红素固体的低纯度胆红素溶液进 行抽滤，以获得胆红素滤饼1 ；5、洗脱获得胆红素滤饼2 即依次用甲醇和纯化水对上步获得的胆红素滤饼1进 行洗脱，其中甲醇的用量与二甲基亚砜的用量成正比，至其滤液变为无色；再用无水乙醇对 其进行冲洗，无水乙醇的用量与二甲基亚砜的用量成正比，最后加入二氯甲烷冲洗至抽滤 无洗脱液流出，从而获得胆红素滤饼2 ；6、干燥收取高纯度胆红素即将上步获得的胆红素滤饼2进行充分干燥后，取出 物为高纯度胆红素。本专利技术可对低纯度胆红素进行工业化提纯、满足市场所需。不仅生产成本低，污染 小；而且溶剂及胆红素损失少，产品得率高，所得胆红素的纯度均在97%以上。具体实施例方式以下通过具体实施例对本专利技术作进一步的介绍。实施例一(1)将低纯度胆红素(92% )1. Okg加入大桶中，加入二甲基亚砜9L及二氯甲烷 2L，充分搅拌1. 5小时，之后加纯化水42L，边加边搅拌0. 5小时，得到胆红素固体已经析出 的混合液。(2)混合液用布氏漏斗抽滤，得到滤饼1。接着加入1. 5-2L甲醇洗脱滤饼1，再用 纯化水洗脱滤饼1至滤液变为无色，然后用无水乙醇400ml冲洗，最后加入200-300ml 二氯 甲烷冲洗至抽滤无洗脱液流出，得到滤饼2。(3)将滤饼2刮入铁盘中(在遮光条件下操作)得到高纯度胆红素，干燥至一捏即 粉，称重。经检测，其胆红素含量为97. 82%。实施例二 (1)将低纯度胆红素(92% )1. Okg加入大桶中，加入二甲基亚砜IOL及二氯甲烷 2L，充分搅拌至少2小时，之后加纯化水43L，边加边搅拌1小时，得到胆红素固体已经析出 的混合液。(2)混合液用布氏漏斗抽滤，得到滤饼1。接着加入2-2. 5L甲醇洗脱滤饼1，再用 纯化水洗脱滤饼1至滤液变为无色，然后用无水乙醇500ml冲洗，最后加入200-300ml 二氯甲烷冲洗至抽滤无洗脱液流出，得到滤饼2。(3)将滤饼2刮入铁盘中(在遮光条件下操作)得到胆红素精品，干燥至一捏即 粉，称重。经检测，其胆红素含量为98. 31%。实施例三(1)将低纯度胆红素(92% )1. Okg加入大桶中，加入二甲基亚砜IlL及二氯甲烷 2L，充分搅拌2. 5小时，之后加纯化水44L，边加边搅拌1. 5小时，得到得到胆红素固体已经 析出的混合液。(2)混合液用布氏漏斗抽滤，得到滤饼1。接着加入2. 5-3L甲醇洗脱滤饼1，再用 纯化水洗脱滤饼1至滤液变为无色，然后用无水乙醇600ml冲洗，最后加入200-300ml 二氯 甲烷冲洗至抽滤无洗脱液流出，得到滤饼2。(3)将滤饼2刮入铁盘中(在遮光条件下操作)得到胆红素精品，干燥至一捏即 粉，称重。经检测，其胆红素含量为97. 60%。权利要求1. ，其特征在于它包括下列步骤1)配制低纯度胆红素溶剂即将二氯甲烷和二甲基亚砜按IL/(4. 5^5. 5) L的比例混 合均勻；2)制备低纯度胆红素溶液即将低纯度胆红素(重量g)按lg/(1广13)L的比例置入 上步配置好的胆红素粗品溶剂(体积L)中，充分搅拌使其完全溶解，以获得低纯度胆红素 溶液；3)优化低纯度胆红素溶液中的二甲基亚砜的浓度，使其析出胆红素固体即按二甲基 亚砜IL/纯化水(4. (Γ4. 7) L的比例向低纯度胆红素溶液中加入纯化水，边加边搅拌，直至 胆红素固体全部析出；4)抽滤获得胆红素滤饼1即对上步已经析出胆红素固体的混合溶液进行抽滤，以获 得胆红素滤饼1 ；5)洗脱获得胆红素滤饼2即依次用甲醇和纯化水对上步获得的胆红素滤饼1进行洗 脱，其中甲醇的用量与二甲基亚砜的用量成正比，至其滤液变为无色；再用无水乙醇对其进 行冲洗，无水乙醇的用量与二甲基亚砜的用量成正比，最后加入二氯甲烷冲洗至抽滤无洗 脱液流出，从而获得胆红素滤饼2 ；6)干燥收取高纯度胆红素即将上步获得的胆红素滤饼2进行充分干燥后，取出物为 高纯度胆红素。全文摘要本专利技术公开了。该方法先将低纯度胆红素充分溶解于由二氯甲烷和二甲基亚砜按比混合而成的溶剂中；接着加入纯化水用以优化其中的二甲基亚砜的浓度，促其胆红素固体全部析出；然后对其进行抽滤获得胆红素滤饼；再用甲醇和纯化水对其滤饼进行洗脱，至其滤液变为无色后，用无水乙醇对其进行冲洗，接着加入二氯甲烷冲洗至抽滤无洗脱液流出后，最后再将滤饼进行充分干燥，终得高纯度胆红素。利用本专利技术获得的胆红素产品，其纯度在97%以本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种从低纯度胆红素中提取高纯度胆红素的方法，其特征在于它包括下列步骤：１）配制低纯度胆红素溶剂：即将二氯甲烷和二甲基亚砜按１Ｌ／（４．５～５．５）Ｌ的比例混合均匀；２）制备低纯度胆红素溶液：即将低纯度胆红素（重量：ｇ）按１ｇ／（１１～１３）Ｌ的比例置入上步配置好的胆红素粗品溶剂（体积：Ｌ）中，充分搅拌使其完全溶解，以获得低纯度胆红素溶液；３）优化低纯度胆红素溶液中的二甲基亚砜的浓度，使其析出胆红素固体：即按二甲基亚砜１Ｌ／纯化水（４．０～４．７）Ｌ的比例向低纯度胆红素溶液中加入纯化水，边加边搅拌，直至胆红素固体全部析出；４）抽滤获得胆红素滤饼１：即对上步已经析出胆红素固体的混合溶液进行抽滤，以获得胆红素滤饼１；５）洗脱获得胆红素滤饼２：即依次用甲醇和纯化水对上步获得的胆红素滤饼１进行洗脱，其中甲醇的用量与二甲基亚砜的用量成正比，至其滤液变为无色；再用无水乙醇对其进行冲洗，无水乙醇的用量与二甲基亚砜的用量成正比，最后加入二氯甲烷冲洗至抽滤无洗脱液流出，从而获得胆红素滤饼２；６）干燥收取高纯度胆红素：即将上步获得的胆红素滤饼２进行充分干燥后，取出物为高纯度胆红素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭庆华，罗张龙，张力，陈华曦，骆小梅，
申请(专利权)人：武汉大鹏药业有限公司，
类型：发明
国别省市：83