TRIP-BR功能的调节和治疗增殖性紊乱的方法技术

提供了一种调节增殖的细胞内ＴＲＩＰ－Ｂｒ功能和活性的方法，以及通过调节增殖的细胞内ＴＲＩＰ－Ｂｒ的功能来治疗增殖性紊乱的方法。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术通常涉及治疗包含增殖性紊乱的疾病的方法，包括治疗癌症的方法。
技术介绍
一般来说，细胞具有控制生长和增殖的机制，致使细胞仅在确定的环境下，以一种受控制的方式进行分裂和生长。当支配细胞生长和增殖的正常调节机制被破坏时，细胞也具有诱导细胞死亡或细胞凋亡的机制。然而，在某些情况下，这种增殖控制和细胞凋亡机制崩溃，使细胞增殖不受抑制，有可能导致有机体内增殖紊乱或疾病。这些增殖性紊乱包括癌症和其他细胞过多的损伤，如牛皮癣，疣和瘢痕瘤。不受控制的细胞增殖可由基因表达的调节异常引起。细胞具有DNA复制和分裂的严密控制周期(细胞周期)，其受一系列细胞周期和转录因子所调节。一组细胞周期转录因子，E2F转录因子，已显示出通过以一种有助于细胞周期进程和增殖所需基因及时表达的方式整合细胞周期装置的活性与转录装置的活性，在调节细胞增殖中发挥至关重要的作用(Lam，E.，等人，Curr Opin Cell Biol 6，859-866(1994)；Dyson，N.(1998)，genes Dev 122245-2262；Helin，K，(1998)，Curr OpinGenet Dev 828-35；Harbour，J.W.，和Dean，D.C.(2000)，Genes Dev 142393-2409；Trimarchi，J.M.和Lees，J.A.(2002)，Nat Rev Mol Cell Bio 311-20)。这些E2F转录因子，特别是E2F-1，与细胞凋亡的调节有关(Muller，H.，等人，Genes Dev 15，267-285(2001)；Nahle，Z.，等人，Nat Cell Biol，(2002)11859-64；Philips，C.，和Vousden，K.H.Apoptosis 6,173-182(2001))。在细胞周期进程期间，细胞周期蛋白E-相关激酶的活性已显示出对于通过限制点并完成S期进入是必不可少的(Keyomarsi，K.，和Herliczek，T.W.(1997)，ProgCell Cycle Res 3171-191)。细胞周期的进入、经过和退出是受依赖细胞周期蛋白的激酶(Cdks)Cdk4/6，Cdk2和Cdc2的相继激活而精确控制的(Sherr，C.J.，和Roberts，J.M.(1999)，Genes Dev 131501-1512)。细胞进入细胞周期的保证受在G1期施加作用的生长因子(正的和负的)的调节。G1 D-型细胞周期蛋白，结合依赖细胞周期蛋白的激酶Cdk4和Cdk6，在完成促细胞分裂原诱导的细胞增殖中起重要的作用。正的(促有丝分裂的)生长因子传递生长-刺激信号，该信号促进D-型细胞周期蛋白的合成以及它们组装成活性的Cdk4/6-细胞周期蛋白D复合物，导致其催化激活和底物识别。活化的Cdk4/6-细胞周期蛋白D复合物有助于细胞周期蛋白-E/Cdk2的激活和磷酸化不足的RB的产生。结合到转录不活跃的E2F-1/DP-1复合体上的磷酸化不足的RB充当了通过经活化的细胞周期蛋白-E/Cdk2进行超磷酸化的靶，结果导致RB的解离、E2F-应答基因的去阻抑/激活以及细胞从G1晚期关卡(checkpoint)的释放(Sherr，C.J.(1993)，Cell 731059-1065；Lam等人.，见上；Dyson，见上；Helin，见上；Harbour，J.W.，等人，(1999)，Cell 98859-869；Sherr，(1999)，见上；Harbour(2000)，见上；Trimarchi等.，见上)。作为促有丝分裂信号传导途径的关键调节剂，Cdk4/Cdk6-细胞周期蛋白D的活性在多重水平被调节，包括细胞周期蛋白D的合成和结合，磷酸化作用过程的抑制和激活，以及被称作Cdk抑制剂(CKIs)的抑制分子的结合/解离(Sherr(1999)，见上)。Cdk蛋白是不活跃的，除非它们结合到各自的细胞周期蛋白配偶体上。一旦结合之后，每一个细胞周期蛋白-Cdk复合物通过特定的磷酸化作用进一步被负调节和正调节。进一步的负调节是通过与特定的破坏活性位点并干扰ATP结合的Cdk抑制剂(CKI)结合而提供的。哺乳动物的CKIs被分成两个家族，Cip/Kip(Cdk2/激酶抑制剂蛋白)和Ink4(依赖细胞周期蛋白的激酶4的抑制剂)抑制剂，这两者都通过特异地和协同地结合到控制G1和G1/S期的Cdk复合物上来限制细胞周期的进程。虽然Cip/Kip家族CKIs的抑制Cdk2、Cdk4和Cdk6活性特异性较低，但Ink4抑制剂(p16/Ink4a、p15/Ink4b、p18/Ink4c和p19/Ink4d)却特异地结合到细胞周期蛋白D-Cdk4和-Cdk6复合物上。施加于Cdk4上的额外水平的调节最近已被证实。p34SEI-1，一种新的表现为拮抗p16INK4a功能的依赖细胞周期蛋白的激酶4(Cdk4)-结合蛋白，已显示出可以使细胞周期蛋白D1-Cdk4复合物抵抗通过p16INK4a产生的抑制(Sugimoto，M.，等人，(1999)，Genes Dev 133027-3033)。p34SEI-1是一种血清诱导型蛋白，甚至在低血清浓度中，它的异位表达也能使成纤维细胞增殖。p34SEI-1被推测在促进细胞周期蛋白D-Cdk复合物的形成和激活以及介导促细胞分裂原驱动的细胞周期进程中起着关键功能性作用(Sugimoto等人.，见上)。为了解决当细胞周期进程的上述途径的调节遭受不正常时所导致的增殖性紊乱的问题，找到阻断不正常增殖细胞中的细胞周期进程的方法是很重要的。因此，需要一种新的诱导细胞内增殖阻断的疗法和办法。专利技术概述一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法，包括调节TRIP-Br的活性。另一方面，提供一种治疗患者体内增殖性紊乱的方法，包括给患者施用一种能调节患者增殖细胞内的TRIP-Br活性的分子，其中该增殖的细胞与增值性紊乱相关。进一方面，提供一种能调节TRIP-Br活性的分子。更进一方面，提供一种药物组合物，包含一种能调节TRIP-Br活性的分子和一种药学上可接受的稀释剂。再进一方面，提供一种抗TRIP-Br的单克隆抗体。进一方面，提供一种鉴定TRIP-Br的调节剂的方法，包括在测试化合物存在的情况下，将TRIP-Br的蛋白靶与含有TRIP-Br的植物同源域锌指/溴结构域(bromodomain)结合区域的肽接触，并测定该测试化合物对TRIP-Br的蛋白靶与含有TRIP-Br的植物同源域锌指/溴结构域结合区域的肽结合的影响。通过下面的本专利技术特定实施方案结合相应附图而进行的描述，本领域的技术人员会清楚本专利技术的其他方面和特征。附图简述在这些图中，仅以实施例的方式阐述了本专利技术的实施方案。附图说明图1AKRIP-1/TRIP-Br的免疫沉淀测定的放射自显影图；B描述用诱饵肽(decoy peptide)处理的U2OS细胞的萤光素酶测定结果的图表；图2A用FITC-标记的*SCR、*Br1和*Br2处理的U2OS细胞的荧光显微照片；B通过流式细胞仪测量肽内在化效率；图3A用pCMV/β-半乳糖苷酶和指示的萤光素酶报道质粒共转染的U2OS细胞的β-半乳糖苷酶/萤光素酶测定结果的图表；B对在暴露于诱饵肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制细胞增殖的方法，包括调节ＴＲＩＰ－Ｂｒ的活性。

【技术特征摘要】
US 2004-3-31 60/5576971.一种抑制细胞增殖的方法，包括调节TRIP-Br的活性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的活性是TRIP-Br的转录整合活性。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的TRIP-Br是TRIP-Br1或TRIP-Br2，且细胞是人细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的调节包括将细胞暴露于TRIP-Br调节剂。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述的调节剂是小分子调节剂或肽调节剂。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述的肽调节剂包含TRIP-Br的植物同源域锌指-溴结构域结合区域。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述的肽调节剂包含具有式UTGXLXDXXLZJOLFJDID的序列，其中X是任意氨基酸；U是S、T、A或没有氨基酸；Z是D或E；J是D、E、A或G；和O是I、L、V、A或没有氨基酸。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述的肽调节剂进一步包含使得肽调节剂能够转运至细胞内的序列。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述的肽调节剂包含来源于黑腹果蝇的触角足同源域蛋白的细胞膜穿透肽序列。10.根据权利要求6所述的方法，其中所述的肽调节剂基本由SEQ IDNO.4或SEQ ID NO.5的氨基酸序列组成。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述的调节包含抑制细胞内TRIP-Br基因表达。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述的调节包括将细胞暴露于靶向TRIP-Br基因转录物的DNA酶。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述的DNA酶包含SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7的核酸序列。14.根据权利要求11所述的方法，其中所述的调节包括将细胞暴露于靶向TRIP-Br基因转录物的小干扰RNA分子。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述的TRIP-Br包含由式UTGXLXDXXLZJOLFJDID编码的序列，其中X是任意氨基酸；U是S、T、A或没有氨基酸；Z是D或E；J是D、E、A或G；和O是I、L、V、A或没有氨基酸。16.一种治疗患者体内增殖性紊乱的方法，包括给患者施用能调节该患者增殖的细胞内TRIP-Br活性的分子，其中该增殖的细胞与增殖性紊乱相关。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述的活性是TRIP-Br的转录整合活性。18.根据权利要求16所述的方法，其中所述的患者是人。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述的增殖性紊乱选自于膀胱癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌、鼻咽癌、子宫颈癌、皮肤癌、白血病、增殖性皮肤损伤、生殖疣、牛皮癣、瘢痕瘤、缺血性心脏病、获得性免疫缺陷综合征、脉管炎、类风湿关节炎、动脉粥样硬化、肾小球肾炎、肾小球硬化、间质炎症、间质纤维化、肺炎、肺纤维化、宿主对脑梗死、心肌梗死和急性缺血性肾小管损害的免疫反应。20.根据权利要求19所述的方法，其中能调节TRIP-Br的转录整合活性的分子是TRIP-Br的调节剂。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述的调节剂是小分子调节剂或肽调节剂。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述的肽调节剂包含TRIP-Br的植物同源域锌指/溴结构域结合区域。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述的肽调节剂包含具有式UTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：SIH许，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]