本发明专利技术涉及测定液体样品中的一种或多种细胞结合分析物的方法，实施所述方法使用的装置包括：至少一个用于施加液体样品的进样区域（５）；适于使得细胞组分渗透的多孔膜（２），膜上具有至少一个指示剂区域，所述指示剂区域能够与细胞结合分析物反应并且包含至少一种针对细胞结合分析物的粘结剂；至少一个位于膜上的吸收区域（３），在液体通过指示剂区域后吸收液体。所述至少一个指示剂区域位于进样区域（５）和吸收区域（３）之间。本方法用于浓缩和定量测定异质性细胞群中的小细胞群，例如在胎母输血或嵌合体等情形中，检测以低浓度存在于细胞上的分析物，测定血细胞比容值，和／或在混合－场反应中平行测定多种细胞结合分析物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于测定异质性细胞群中的小细胞群的方法。所述方法适于浓縮和定量测定异质性细胞群中的小细胞群，例如在胎母输血中；用于平行地测定多种细胞结合分析物，并且因此可在胎母输血情形或嵌合体情形中(beichimaren)用于在输血之后测定混合场及应(Mischfeldreaktionen)中的细胞群；用于检测以低浓度存在于细胞上的分析物；和/或用于测定血细胞比容值。本专利技术还提供适于所述方法的装置。
技术介绍
FMH在妊娠过程中，血液有规律地从胎儿循环流入母体循环(胎母输血(fetomaternal hemorrhage), FMH)。根据文献资料记载，这一输血量为0.1ml至大约30ml;在大约96_98%的妊娠中，FMH小于2ml，但是在0.3%的妊娠中，超过30ml。估计母体血液量为5000ml，这就意味着有0.002%至0.6%抗原性质与母体不同的另一种红细胞进入母体循环，如果由此产生免疫反应则可能变成临床问题。最为显著的例子是一个D型母亲怀有一个D+型胎儿。如果母亲产生抗-D抗体，那么再次怀上D+型胎儿时可能产生致命的结果(新生儿溶血病，HDN)。由于这一原因，在这些情况下需对母亲实施"抗-D预防"。尽管如此，人们对能够由此估计FMH量仍有极大的兴趣，因为，例如在FMH〉30ml时，标准的抗-D疗法无法提供足够的保护。因此，在美国，标准免疫包括250至300吗的抗-D(IgG)，这足以为自身母体循环接收15ml的胎儿红细胞也就是25至30mi的胎儿血液的妊娠妇女提供足够保护。欧洲的标准剂量通常低些，即100至150叱抗-D(IgG)，这能为FMH为8 —10ml的妊娠妇女提供保护。每个实施抗-D预防的机构都必须设法检测超过标准的FMH(Issitt PD禾a AnsteeDJ.在应用血型血清(Applied Blood Group Serology)，蒙哥马利科学出版社(Montgomery Scientific Publication),第41章新生儿溶血病(HemoIyticdisease of the newborn)， 第1045-1050页)。传统的血型一血清分析，例如用于检测D抗原的分析，根本不能检测如上所述如此小量的异质细胞群。因此，曾开发了许多专门用于检测FMH的不同的分析方法。这些分析方法检测胎儿红细胞，血型抗原D或血红蛋白F。FMH检测测试 FMH检测限Rosette测试 大约10ml这一测试方法基于对红细胞聚集的检测及显微鉴定。胎儿D抗原检测。(Jones A.R.,SliverS. Blood 1958; 13: 763SebringE.S.，Polesky H.F,Transfusion 1982; 22: 468Sebring E.S.in: Hemolytic disease of the newborn.Arlington,VA; Am Assoc Blood Banks 1984: 87.)Kleihauer-Betke测试 大约5ml这一测试方法基于胎儿红细胞对酸性洗提的较高的抵抗力及对其进行的显微鉴定。胎儿细胞检测。(KleihauerE,，BraunH,，BetkeK.Klein Wschr 1957; 35: 637.)流式细胞仪 大约1mlD抗原或血红蛋白F用相应的抗体标记，用发荧光的第二抗体检测。胎儿D抗原/血红蛋白检测。Garratty G.,ArndtP.Transfusion 1995; 35: 157.David B,H.Clin Lab Med 2001; 21: 829.抗体消耗测试 大约15ml这一测试方法是一种基于常规血型测定方法(凝胶技术)的FMH测定法。它是基于胎儿红细胞对抗-D试剂的消耗。反应上清液用D-阳性测试细胞孵育，然后象在凝胶测试中那样离心。胎儿D抗原检测。Lapierre Y.,Rigal D,，Adam J.,Josef D.,Meyer F.,Greber S.,Drot C. Transfusion1990; 30: 109.David M.,Stelzer A.,Wittmann G.，Dudenhausen J.W.,Salama A.Z.GeburtshilfeNeonatol 1999; 203: 241.这些方法用于检测红细胞抗原、胎儿红细胞或者胎儿红细胞的特征性血红蛋白F。所有这些方法的共同点在于这些方法需要大量试剂，且费时费事。而且，这些方法都需要诸多仪器来实施，其中的一些仪器是非常昂贵的(例如显微镜，离心分离机，流式细胞仪)。这些方法的共同点还在于需要经特别培训的人员才能实施。此外，Kleihauer-Betke法的缺点还在于鉴定结果非常主观。弱D(Dweak〗特征表达，特别是DEL供血者和接受者血清的另一个挑战是D抗原的微弱或部分表达(不完全表达)。依赖于单克隆抗体和间接Coomb试验确认，即使是对这样弱的血型进行的鉴定曾一度被视为是可靠的，直到发现DEL表型，该表型具有特别弱的D型表达("常规"D:每红细胞10 — 30000抗原(RBC);弱D型400至1000; DEL:<30)。在血清学上，DEL仅能通过使用可多达10个清洗步骤的极复杂的吸收一洗提测试间接测定。输血需要考虑DEL，因为一个接受DEL型库存血的D型受血者会形成抗-D抗体。这一问题如此严重以致于目前专家间就是否应当对所有(血清学)D型供血者的D型状况用分子学方法进行确认存在争论。Wagner T.，K6rm6czi G.F.,Buchta C.，Vadon M.,Lanzer G.，Mayr W.R"LeglerT丄Transfusion 2005; 45: 520混合场反应，异体输血，血液回输输血应当总是在相同的或相容的ABO型和相容的D型之间进行。在某些情况下，例如对于输过血的患者(vortransfimdierten)，临床要求输就其它抗原而言亦为同型的同型血。然而，尚不可能做到所有血型全同的同型血(自体输血除外)。这常会导致这样的输血后现象，即，患者被诊断为对某些血型特征即有阳性又有阴性。在诊断中，"混合场反应"是存在的，就像采用高灵敏度方法-特别是能够在检测过程中空间分离单个红细胞和红细胞凝聚体的那些方法-也能看到的那样。例如，将300ml(67。/。)的红细胞浓縮液输给一个K-阴性的人(血型kk)，他的血液循环量为5000ml(45。/c)的血细胞比容)，所述浓縮液为K+(血型Kk或KK)，于是，此人大约8n/。(公称值)的红细胞是K+， 92。/。的红细胞是K-。这种情况也可用例如现在被广泛使用的DiaMed和Bio-Rad的凝胶系统检测到。这一技术包括离心被检者的红细胞稀释悬浮液，令其通过一凝胶-层析柱，该层析柱底部封闭，并且可包含不同特性的抗体试剂。未凝集游离细胞能够通过凝胶并在反应容器的底部形成沉淀物，而红细胞凝集体则被截留在凝胶上或凝胶内(Lapierre Y., Rigal D., Adam J., Josef D., Meyer F.， Greber S,, Drot C.,Transfusion 1990; 30: 109)。如果前述示例中的红细胞通过一个包含抗-K的柱离本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于测定液体样品中的一种或多种细胞结合分析物的方法，所述方法使用包括以下部件的装置进行： －至少一个用于施加液体样品的进样区域（５）， －适于细胞成分透过的多孔膜（２），所述膜上具有至少一个指示剂区域，所述指示剂区域能够与细 胞结合分析物相互作用并且包含至少一个针对细胞结合分析物的结合元素，以及 －至少一个位于膜上的吸收区域（３），在液体通过指示剂区域后吸收液体， 其中，所述至少一个指示剂区域位于进样区域（５）和吸收区域（３）之间，所述方法用于在例如 母婴输血或嵌合体等情形中浓缩和定量测定异质性细胞群中的小细胞群，用于检测以低浓度存在于细胞上的分析物，用于测定血细胞比容值和／或用于测定混合－场反应中的细胞结合分析物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：P施温特，I阿比斯西尔，
申请(专利权)人：麦迪奥诊断产品股份公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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