一种从油橄榄叶中高效富集高品质羟基酪醇的方法技术

一种从油橄榄叶中高效富集高品质羟基酪醇的方法，通过从１０个油橄榄品种叶中筛选高含量羟基酪醇的生产原料，采用超声波或微波提取，大孔树脂吸附和中压柱色谱分离，制备９０％以上羟基酪醇提取物。与以往纯化方法相比，此种方法具有简便、快捷、经济，收率高等特点，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物提取物
，特别涉及一种从油橄榄叶中高效富集高品质羟 基酪醇的方法。
技术介绍
油橄榄(Olea europaea L.)作为世界著名的木本油料树种，广泛种植于地中海地 区，现如今该地区已成为橄榄的主要生长地区，约占全世界油橄榄树种植面积的98%。油橄榄抗氧化生物活性成分主要是橄榄苦苷(oleuropein)、羟基酪醇 (hydroxytyrosol)、黄酮类(flavonoids)、木酚素类(Lignan)、咖啡酰苯乙醇苷类 (Caffeoyl phenylethanoid glycosides)等，而具有羟基酪醇母体结构的小分子二酚类化 合物最具有抗氧化活性作用，其中羟基酪醇和橄榄苦苷是国内外研究的热点。天然羟基酪醇主要存在于油橄榄果实、叶子和橄榄油的加工废水中，尤其是橄榄 苦苷和羟基酪醇在叶中的含量明显高于果实和树皮。羟基酪醇主要是以酯化物橄榄苦苷的 形式存在油橄榄的各个部位，在干燥的橄榄树叶子中约占6-9% (质量比)。橄榄苦苷不 稳定，极易受空气、阳光、酸、碱、酶、微生物、氧化剂、高温等因素的影响，发生氧化、缩合、螯 合等反应而遭受破坏，尤其是在酸、碱和酶的作用下易降解为羟基酪醇和榄香酸(elenolic acid)。在橄榄油加工过程中，为除去橄榄油中酸涩味道，加入无机酸水解橄榄苦苷可以得 到多酚类化合物，羟基酪醇是这些酚类混合物的主要成分。以化学方法合成羟基酪醇已有报道，Baraldi等人采用3，4_ 二羟基苯乙酸酯为原 料通过LiAlH1或NaBH1催化还原，但制备量仅为实验室儿克的规模，尤其是催化试剂昂贵， 工业化制备难。Juan Carlos采用生物酶法，以Vc为还原剂，酪醇在酪氨酸酶催化下转化为 羟基酪醇，但副产物多，羟基酪醇分离因难。目前的合成方法难实现批量制备羟基酪醇。研究发现羟基酪醇具有很多方面有益于人类健康的生物药理活性，深受生物医学 界的重视。药理研究表明羟基酪醇时一种非常强的自由基消除剂，可有效地消除内源性和 外源性丁基化自由基和氧化物。羟基酪醇的抗氧化性和对自由基的消除能力比其他一些合 成的和天然的抗氧化物质都高，抗氧化能力为羟基酪醇>橄榄苦苷>咖啡酸> VE > Vc > 酪醇> BHT。由于羟基酪醇含有二个酚羟基，更易穿透细胞膜，能改善心脏的冠脉血流、抑制 胶原诱导的血小板凝聚，更有效地保护香烟有毒成分丙烯醛造成的视网膜色素上皮细胞的 氧化损伤和线粒体功能失调。国外对油橄榄资源研究比较深入，特别是对其中的酚类物质的研究。很多研究利 用高分辨技术对橄榄油、果实和叶中酚类物质进行鉴定和定量分析，Bouazizda等在油橄榄 成熟期内，研究油橄榄叶中橄榄苦苷、羟基酪醇等酚类，芦丁、槲皮素等黄酮类的变化规律； Ryan等研究了两个生长期内，不同品种，不同部位，不同年份橄榄中羟基酪醇，橄榄苦苷等 几种酚类物质。国内对油橄榄叶资源还没有深入研究，对羟基酪醇的研究更少。专利号03815986 的中国专利来自橄榄植物液的富含羟基酪醇的组合物及其使用方法，运用酸水解橄榄叶中橄榄苦苷得到羟基酪醇，再进行色谱法的纯化，有些技术存在使用大量有机溶剂，存在溶剂 损耗、容易产生环境污染等问题，专利号200710057290的中国专利从橄榄提取液中提取羟 基酪醇的方法，其中直接利用买的油橄榄植物提取液进行树脂分离，同时运用了先进的分 子蒸馏的方法推动了油橄榄叶资源开发利用的一项技术，但其技术过于笼统，其中对原料 没有进行很好的选择，在分离纯化过程中虽也运用了儿种大孔树脂，但并没给出全面的数 据参数，以进行对比，因而在生产应用中存在不小问题，如何设计一套能贴合生产应用的经 济使用的生产工艺，同时又能保证对油橄榄叶有效成分进行综合利用成为关键。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该方 法不仅简单方便，而且经济环保有效，适合大批量的制备。本专利技术的技术解决方案为，由以下步骤组成(1)从10个油橄榄品种叶中筛选高含量羟基酪醇的生产原料；(2)将筛选的新鲜油橄榄叶低温避光干燥，干燥温度低于20°C，破碎成0. 5cm以下 的粉末；(3)用C1-C3的醇或丙酮水溶液提取油橄榄叶粉末，醇或丙酮质量百分浓度 为30-100%，提取溶液与油橄榄叶粉末质量比为1-30 1，提取温度为25-65°C，时间为 10-60min，浸提次数1_5次，过滤，合并提取液；(4)在小于65°C温度下真空浓缩提取液，回收有机溶剂，控制浓缩液中有机溶剂 含量低于1 %，再加水稀释，过滤，经过大孔树脂分离，收集羟基酪醇洗脱部位，用中等极性 有机溶萃取3-5次，合并萃取相，低温真空浓缩，回收有机溶剂，溶缩液真空干燥，制备油橄 榄叶羟基酪醇精制品，羟基酪醇的含量为10% -60% ；(5)采用柱色谱分离橄榄叶羟基酪醇精制品，富集80% -98%羟基酪醇。本专利公开HPLC外标法测定羟基酪醇的纯度。以HPLC峰面积为纵坐 标，羟基酪醇质量(yg)为横坐标，绘制HPLC标准曲线，得HPLC线性回归方程为 Y = 179663. 8X-35982. 8，其相关系数为 r = 0. 9998。HPLC 色谱条件=C18ODS 色谱柱 沙4.6謹\200謹，5“111)，流动相甲醇-水(0.2%醋酸)体积比6 94，波长230nm，流速 lmL/min。精密吸取羟基酪醇标准品溶液10yL，重复进样5次，测定其峰面积，RSD = 0. 93%。精确称取油橄榄叶粉末lg，按实验方法中羟基酪醇溶液的制备方法制备其提取液， 然后将提取液均分为6份，其中一份用作空白样，其余5份分别定量加入0. 67mg/mL的羟基 酪醇标准品溶液，然后进样测定，每个样品进3次，取其峰面积平均值，得其加样回收率为 100. 5%，RSD = 0. 98%。结果表明该方法精密度和重现性良好。本专利技术采用HPLC方法分析羟基酪醇的含量变化规律，从城固32号、皮瓜尔、科拉 地、果达宁、九峰6号、配多灵、阿斯、小莱星、莱星、鄂植8号等10个油橄榄品种叶中筛选高 含量羟基酪醇的生产原料，结果表明，同一产地同一时期不同品种的油橄榄叶，羟基酪醇质 量分数有差异，10个品种油橄榄叶中羟基酪醇含量范围在0. 3% 0. 8%之间，羟基酪醇含 量大小顺序依次为小莱星>科拉地>阿斯>鄂植8号>九峰6号>果达宁>城固32号>5莱星 > 皮瓜尔 >配多灵。 表1不同品种油橄榄叶中羟基酪醇的含量权利要求，由以下步骤组成(1)从10个油橄榄品种叶中筛选高含量羟基酪醇的生产原料；(2)将筛选的新鲜油橄榄叶低温避光干燥，干燥温度低于20℃，破碎成0.5cm以下的粉末；(3)用C1 C3的醇或丙酮水溶液提取油橄榄叶粉末，醇或丙酮质量百分浓度为30 100％，提取溶液与油橄榄叶粉末质量比为1 30∶1，提取温度为25 65℃，时间为10 60min，浸提次数1 5次，过滤，合并提取液；(4)在小于65℃温度下真空浓缩提取液，回收有机溶剂，控制浓缩液中有机溶剂含量低于1％，再加水稀释，过滤，经过大孔树脂分离，收集羟基酪醇洗脱部位，用中等极性有机溶萃取3 5次，合并萃取相，低温真空浓缩，回收有机本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王成章，叶建中，董艳鹤，原姣姣，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，
类型：发明
国别省市：84